Axoplasma de aislamiento de nervio ciático de rata
Summary
Demostramos un protocolo para el aislamiento de axoplasma del nervio ciático de rata adulta basada en la disección de los fascículos nerviosos y la incubación en un medio hipotónico para liberar la mielina y la lisis no axonal estructuras, seguido de la extracción del resto del axón material enriquecido.
Abstract
El aislamiento de citoplasma pura axonal (axoplasma) de los nervios periféricos es crucial para los estudios bioquímicos de muchos procesos biológicos. En este artículo, demostrar y describir un protocolo para el aislamiento de axoplasma del nervio ciático de rata adulta sobre la base de los siguientes pasos: (1) la disección de los fascículos nerviosos y la separación del tejido conectivo, (2) la incubación de segmentos cortos de fascículos nerviosos en medio hipotónico para liberar la mielina y la lisis no axonal estructuras, y (3) la extracción del resto del axón material enriquecido. Caracterización proteómica y bioquímica de esta preparación ha confirmado un alto grado de enriquecimiento para los componentes axonal.
Protocol
Discussion
Los análisis bioquímicos y proteómica han confirmado que este procedimiento reduce la contaminación de células gliales en suero y 3 en comparación con los métodos descritos anteriormente para el aislamiento de axoplasma por presión mecánica 1. Hemos utilizado este protocolo de aislamiento para explorar axoplasma dineína basado en la señalización retrógrada después de la lesión del nervio ciático 2, y esperamos que tenga utilidad en la exploración de muchos otros procesos…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
- Male Wistar rats (8-10 weeks old)
- PBS 0.2X and PBS 1X solutions containing protease inhibitors (Roshe) 2 tablets per 50 ml
- Eppendorfs for 1.5 ml
- Sterilized plastic dishes 35 mm
- Dissecting tools including: scissors and fine forceps
- Binocular and table light
Antibodies
Mouse anti-GFAP clone G-A-5 was from Sigma (G6171). Rabbit anti-Albumin was from Cedarlane (CLAG5140). Mouse anti-Tubulin β3 and rabbit anti-gERK were from Sigma (T2200 and M5670 respectively).
References
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