Isolement axoplasme du nerf sciatique du rat
Summary
Nous démontrons un protocole pour l'isolement du nerf axoplasme sciatique de rat adulte repose sur la dissection des fascicules nerveux et l'incubation dans le milieu hypotonique pour libérer de la myéline et Lyse non axonale structures, suivie de l'extraction de l'axone reste-matériau enrichi.
Abstract
Isolement du cytoplasme axonal pur (axoplasme) de nerf périphérique est cruciale pour les études biochimiques de nombreux processus biologiques. Dans cet article, nous démontrons et décrire un protocole pour l'isolement du nerf axoplasme sciatique de rat adulte sur la base des étapes suivantes: (1) la dissection des fascicules nerveux et la séparation des tissus conjonctifs; (2) incubation de courts segments de fascicules nerveux au milieu hypotonique pour libérer de la myéline et Lyse non axonale des structures, et (3) l'extraction de l'axone reste-matériau enrichi. Caractérisation protéomique et biochimique de cette préparation a confirmé un haut degré d'enrichissement pour les composants axonale.
Protocol
Discussion
Les analyses biochimiques et protéomiques ont confirmé que cette procédure réduit la contamination de cellules gliales sérum et 3 par rapport aux méthodes décrites précédemment pour l'isolement axoplasme de Squeeze mécanique 1. Nous avons utilisé ce protocole d'isolement axoplasme à explorer dynéine basé signalisation rétrograde après lésion du nerf sciatique 2, et s'attendre à ce qu'il ont une utilité dans l'exploration de nombreux autres processus…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
- Male Wistar rats (8-10 weeks old)
- PBS 0.2X and PBS 1X solutions containing protease inhibitors (Roshe) 2 tablets per 50 ml
- Eppendorfs for 1.5 ml
- Sterilized plastic dishes 35 mm
- Dissecting tools including: scissors and fine forceps
- Binocular and table light
Antibodies
Mouse anti-GFAP clone G-A-5 was from Sigma (G6171). Rabbit anti-Albumin was from Cedarlane (CLAG5140). Mouse anti-Tubulin β3 and rabbit anti-gERK were from Sigma (T2200 and M5670 respectively).
References
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