ラット坐骨神経からの軸索原形質分離
Summary
我々は、ミエリンを解放し、残りの軸索に富む材料の抽出に続いて、非軸索の構造を、溶解する低張培地で神経の束とインキュベーションの解剖に基づいて、成体ラットの坐骨神経からの軸索原形質分離のためのプロトコルを示す。
Abstract
末梢神経からの純粋な軸索の細胞質（軸索原形質）の分離には多くの生物学的過程の生化学的研究にとって重要です。この記事では、次の手順に基づいて、成体ラットの坐骨神経からの軸索原形質分離のためのプロトコルを示し、説明します。神経の束と結合組織の分離の（1）解剖、神経束の短いセグメントの（2）インキュベーション低張培地でミエリンを解放し、非軸索の構造を溶解すること、（3）残りの軸索に富む材料の抽出。この準備のプロテオミクスと生化学的特性は、軸索のコンポーネントのための濃縮度の高い認識しています。
Protocol
Discussion
生化学的およびプロテオーム解析は、機械的なスクイーズ1による軸索原形質分離のために前述の方法に比べて、この手順では、血清およびグリア細胞のコンタミネーション3を減少させることを確認した。我々は、坐骨神経損傷2の後ダイニンベースの逆行性シグナリングを探求し、それが軸索-グリア相互作用4を含む成人の末梢神経の他の多くのプロセス、の…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
- Male Wistar rats (8-10 weeks old)
- PBS 0.2X and PBS 1X solutions containing protease inhibitors (Roshe) 2 tablets per 50 ml
- Eppendorfs for 1.5 ml
- Sterilized plastic dishes 35 mm
- Dissecting tools including: scissors and fine forceps
- Binocular and table light
Antibodies
Mouse anti-GFAP clone G-A-5 was from Sigma (G6171). Rabbit anti-Albumin was from Cedarlane (CLAG5140). Mouse anti-Tubulin β3 and rabbit anti-gERK were from Sigma (T2200 and M5670 respectively).
References
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