Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Neuronen verbreiten elektrische Impulse über Aktionspotentiale. Befindet sich das Neuron im Ruhezustand, gibt es einen langsameren Abfluss von Kaliumionen als der Zufluss von Natriumionen, was zur Veränderung des Membranpotentials führt. Dies bewirkt, dass sich die Natriumionenkanäle öffnen und den Zufluss von Natriumionen ermöglichen, wodurch ein elektrischer Impuls erzeugt wird.
Die Methode, solche Aktivitäten in einer Zelle zu untersuchen, wird Elektrophysiologie genannt. Beginnen Sie das Verfahren, indem Sie eine sekundäre Elektrodenspitze in das Nasenloch eines erwachsenen Zebrafisches einsetzen. Als nächstes legen Sie die primären Elektroden oberflächlich in das exponierte optische Tektum ein, um die extrazelluläre neuronale Aktivität zu messen.
Die Primärelektrode misst das extrazelluläre Membranpotential aller umgebenden Zellen. Das Signal stellt das kombinierte Membranpotenzial all dieser Zellen dar. Die Elektrode erkennt das Signal und überträgt es an einen Verstärker - ein Oszilloskop -- der eine visuelle Darstellung des Membranpotentials darstellt, und einen Computer.
Beobachten Sie die Messwerte und analysieren Sie den elektrischen Unterschied zwischen der Primär- und der Sekundärelektrode. Die elektrophysiologische Messung ist ein Vergleich. Im Beispielprotokoll messen wir die Wirkung pharmakologischer Verbindungen auf die neuronale Aktivität bei einem erwachsenen Zebrafisch.
- Für die Elektrophysiologie-Aufnahme, schalten Sie den Intubations-Stopphahn ab und trennen Sie schnell das Leur-Schloss, das die Intubationsbasis mit dem Tricain-Tropfen verbindet. Bewegen Sie den intakten Intubationsaufbau an das Elektrophysiologiemikroskop und verbinden Sie ihn mit dem Perfusionssystem. Schalten Sie das Lebensraumwasser ein und durchdringen Sie mit einer Rate von 1 Milliliter pro Minute für etwa eine Stunde, um die Tricaine auszuwaschen.
Positionieren Sie mit einem Mikromanipulator die Sekundärelektrode so, dass die Elektrodenspitze in das Nasenloch des Tieres oder in das Dip unter dem Oberkiefer eingeführt werden kann. Setzen Sie anschließend die primäre Elektrodennadel in die Craniotomieöffnung ein. Setzen Sie dann die Nadel in das Gewebe ein, so dass die Spitze relativ oberflächlich im optischen Tectum positioniert ist.
Tiefere Positionen der Elektrode können zu einem kleinen elektrischen Signal führen. Für die Datenerfassung wird ein lückenfreier Modus mit 5.000 Hertz Abtastrate, zusammen mit dem Tiefpassfilter von 0,1 Kilohertz und einem Hochpassfilter von 1 Hertz verwendet. Beginnen Sie mit der Aufzeichnung der elektrophysiologischen Aktivität, wenn das Habitatwasser mindestens 45 Minuten durchdrungen ist.
