Voksen zebrafisk elektrofysiologi: En metode til at måle neuronernes ekstracellulære elektriske aktivitet i Vivo

- Neuroner udbreder elektriske impulser via virkningspotentialer. Når neuronen er i hviletilstand, er der en langsommere udstrømning af kaliumioner end tilstrømningen af natriumioner, hvilket fører til ændringen i membranpotentialet. Dette får natriumionkanalerne til at åbne og tillade tilstrømning af natriumioner, hvilket genererer en elektrisk impuls.

Metoden til at studere sådanne aktiviteter i en celle kaldes elektrofysiologi. Begynd proceduren ved at indsætte en sekundær elektrodespids i næseboret af en voksen zebrafisk. Næste, indsæt de primære elektroder overfladisk inden for det udsatte optiske tectum for at måle ekstracellulær neural aktivitet.

Den primære elektrode måler det ekstracellulære membranpotentiale i alle celler omkring den.

Overhold aflæsningerne og analyser den elektriske forskel mellem de primære og sekundære elektroder.

- Til elektrofysiologiregistrering skal du slukke for intubationsstophanen og hurtigt frakoble Leur-låsen, der forbinder intubationsbasen med tricaindråben.

Ved hjælp af en mikromanipulation skal du placere den sekundære elektrode, så elektrodespidsen kan indsættes i dyrets næsebor eller i dip under overkæben. Efterfølgende indsættes den primære elektrodenål i kraniotomyåbningen. Indsæt derefter nålen i vævet, således at spidsen er placeret ret overfladisk i det optiske tectum.

Dybere positioner af elektroden kan resultere i et lille elektrisk signal. Til dataindsamling anvendes gap-free-tilstand ved 5.000 hertz samplingfrekvens sammen med lowpass-filteret på 0,1 kilohertz og et highpass-filter på 1 hertz. Begynd registreringen af den elektrofysiologiske aktivitet, når habitatvandet er perfunderet i mindst 45 minutter. Registrer en baseline af indfødt aktivitet i mindst 15 minutter før tilsætning af eksperimentelle lægemidler.