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Geração de modificações genómicas definidas usando CRISPR-CAS9 em células-tronco pluripotentes humanas
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Generation of Defined Genomic Modifications Using CRISPR-CAS9 in Human Pluripotent Stem Cells

Geração de modificações genómicas definidas usando CRISPR-CAS9 em células-tronco pluripotentes humanas

DOI:
10.3791/60085-v

•

09:04 min

•

September 25, 2019

•

, , ,
1Center for Cellular and Molecular Therapeutics,The Children’s Hospital of Philadelphia, 2Department of Pathology and Laboratory Medicine,The Children’s Hospital of Philadelphia, 3Department of Pathology and Laboratory Medicine,University of Pennsylvania

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:19Test gRNA (GuidE RNA) Cutting Efficiency
  • 03:50Clone Screening
  • 04:51Transfection Setup
  • 06:07Checking for Mutations in Single Colonies
  • 07:11Results: Cutting Efficiency, and Generation and Screening of Mutations
  • 08:10Conclusion

Summary

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Este protocolo fornece um método para facilitar a geração de mudanças heterozygous ou homozygous definidas do nucleotide usando CRISPR-CAS9 em pilhas de haste pluripotentes humanas.

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CRISPR-Cas9Human Pluripotent Stem CellsIsogenic LinesHeterozygous MutationsGene FunctionDisease ModelingColony PickingFluorescence-activated Cell SortingMEFsROCK Inhibitor

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