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ヒト多能性幹細胞におけるCRISPR-CAS9を用いて定義されたゲノム修飾の生成
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Generation of Defined Genomic Modifications Using CRISPR-CAS9 in Human Pluripotent Stem Cells
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ヒト多能性幹細胞におけるCRISPR-CAS9を用いて定義されたゲノム修飾の生成
DOI:
10.3791/60085-v
•
09:04 min
•
September 25, 2019
•
Fabian L. Cardenas-Diaz*
1
,
Jean Ann Maguire*
1
,
Paul Gadue
2,3
,
Deborah L. French
2,3
1
Center for Cellular and Molecular Therapeutics
,
The Children’s Hospital of Philadelphia
,
2
Department of Pathology and Laboratory Medicine
,
The Children’s Hospital of Philadelphia
,
3
Department of Pathology and Laboratory Medicine
,
University of Pennsylvania
Chapters
00:04
Title
01:19
Test gRNA (GuidE RNA) Cutting Efficiency
03:50
Clone Screening
04:51
Transfection Setup
06:07
Checking for Mutations in Single Colonies
07:11
Results: Cutting Efficiency, and Generation and Screening of Mutations
08:10
Conclusion
Summary
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このプロトコルは、ヒト多能性幹細胞におけるCRISPR-CAS9を用いて定義されたヘテロ接合性またはホモ接合ヌクレオチド変化の生成を容易にする方法を提供する。
Tags
CRISPR-Cas9
Human Pluripotent Stem Cells
Isogenic Lines
Heterozygous Mutations
Gene Function
Disease Modeling
Colony Picking
Fluorescence-activated Cell Sorting
MEFs
ROCK Inhibitor
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