肾小球的分离及肾小球细胞表面蛋白的活体标记

蛋白尿是肾小球损伤的标志, 通常伴随肾小球滤^{池 1}的破坏。肾小球滤池由被过滤的内皮细胞、肾小球基底膜和足细胞组成。肾小球滤池的微妙分子结构是高度动态的, 在健康和患病的肾脏^{2,3,4, 5, 6 都}容易发生细胞表面蛋白贩运.细胞表面蛋白的内分泌已被证明是至关重要的生存的足细胞⁷。肾素和足苷酸是在足细胞上表达的跨膜蛋白。肾素是肾小球裂隙膜片的主干, 而 podocalyxin 是一种四聚糖蛋白, 包覆于足部 8^{、9、10 的}次生足部过程。此前, 已经显示肾素和 podocalyxin^{3、11、12、13、14的内分泌}贩运。

据我们所知, 细胞表面蛋白的内吞尚未在肾小球内皮细胞中被描述在文献中。然而, 内皮细胞一般表达所有必要的蛋白质为不同类型的内吞 (即, clathrin 依赖, 流依赖性内吞)^15,16。因此, 可以用这种方法研究内皮细胞表面的移植, 例如, 使用血管内皮 (ve)-钙粘蛋白和细胞内粘附分子 (icam-2) 作为肾小球内皮细胞¹⁷的细胞表面标记蛋白.

遗憾的是, 对于可以研究细胞表面蛋白质贩运的精细三层肾小球滤池, 目前还没有准确的体外模型。因此, 这种方法的目的是研究体内肾小球蛋白贩运。此外, 该协议还包含有关如何分离肾小球的信息, 从而能够进一步分析肾小球 rna、蛋白质或细胞。不同的组 18^,19描述了类似的肾小球分离技术。

此前, 我们和其他人使用了生物素化^{2、3、4、20、21}对肾小球细胞表面蛋白进行体外标记。然而, 在这种体外方法中, 孤立的肾小球暴露在机械应力下, 这可能会影响细胞内贩运。另外, 肾小球细胞表面蛋白的免疫荧光标记已被广泛应用于文献^2、20、22.然而, 使用这种方法, 只有少量的蛋白质可以在一张幻灯片内进行分析, 并且免疫荧光图像的定量往往是困难的。

这种新的体内方法为研究健康和患病肾脏中肾小球细胞表面蛋白质丰度和贩运提供了可靠的工具, 可作为免疫荧光检测的补充。