El método flotante para tejido parafina-encajado de seccionamiento y corte
Summary
Aquí, presentamos un protocolo para mejorar la parafina secciones. Este método combina el corte y flotando con una cámara termostática simple para evitar el proceso de transferencia requerido por el método convencional. Como resultado, la eficacia y el número de secciones de la parafina intacto mejoraron grandemente.
Abstract
Secciones de tejido embebido en parafina es ampliamente utilizado en histología y patología. Sin embargo, es tedioso. Para mejorar este método, varias empresas han ideado sistemas de transferencia de sección compleja con fluido agua. Para simplificar esta tecnología, hemos creado un método sencillo usando equipos caseros que combina el corte y flotando dentro de una cámara termostática simple; por lo tanto, las secciones automáticamente entrar en el baño de agua en la superficie del agua. El hipocampo de cerebro de ratón adulto, los riñones de ratón adulto, cerebros embrionarios de ratón y ojos de pez cebra adulto fueron cortados usando secciones de parafina convencional y el método presentado para la comparación. El análisis estadístico muestra que nuestro método mejorado había ahorrado tiempo y produce perfiles de calidad superiores. Además, parafina de seccionamiento de la muestra entera en poco tiempo es fácil para los operadores junior.
Introduction
Estudio morfológico es importante en la investigación biológica. Aunque la nueva tecnología ha permitido a los investigadores a observar sus objetivos directamente en el tejido entero u organismos1,2,3, cortar al espécimen de secciones delgadas, seguido por la coloración, sigue siendo el principal morfología de tejido único método fornot sino directamente en el tejido de la proteína. La microscopia ligera utiliza tres tipos de sección: parafina, congelado y SEMIFINOS. Aunque cryosectioning es común para la protección de la antigenicidad del tejido, y la preparacion es simple, la morfología de tejido retenido es pobre e inadecuado para fina seccionamiento de4,5. Secciones de la parafina es el método más frecuentemente utilizado para exhibir bien preservada morfología. Ya que las muestras deshidratadas totalmente incrustadas en la cera, los bloques de parafina pueden ser almacenados indefinidamente. Además, secciones de la parafina produce secciones delgadas que mejoran el acceso de la sonda biológica en experimentos adicionales y reducen la superposición de capas de células en la dirección Z.
Sin embargo, secciones de la parafina convencional es tedioso y exige habilidad del operador. Secciones de la parafina se someten a la fijación, deshidratación, inclusión, corte y flotante. Lo importante, transferencia de cintas de la sección de soporte de la cuchilla en el baño de agua es necesaria pero difícil para los operadores junior. Especialmente en aire seco, las cintas de la sección se tuerza debido a la electricidad estática y son difíciles de desplegar en la superficie de agua caliente. Para mejorar la sección de calidad, humedecer la superficie de tejidos expuestos entre pasadas de cuchilla microtomo, enfriamiento los bloques de cera por inmersión en agua con hielo o aumentar la humedad con un humidificador cerca el micrótomo se recomienda6,7 . Nuevos métodos para mejorar la parafina secciones incluyen híbrido inclusión en parafina, cryosectioning8y sección comercial transferencia sistema asistencia9. Aunque estos métodos mejoran parcialmente parafina secciones velocidad y calidad, hacen secciones mucho más engorroso, y sistemas de transferencia de la sección comercial son caros.
En este protocolo, demostramos cómo crear simple, barato y flexible equipo paso a paso, que puede conectarse al sujetador de la cuchilla de un micrótomo rotatorio. Este equipo está compuesto por un canal de sección, un baño de agua y un calentador con un interruptor de detección de temperatura. Después del corte, docenas de secciones de flujo en el canal de sección y entrar en el baño de agua directamente, así se despliega automáticamente. Esto mejora la eficiencia de parafina de seccionamiento y hace que esta tecnología sea más conveniente. Usando este método, más adultas secciones de hipocampo de ratón, las secciones de riñón de ratón adulto, embrionario 15,5 días de edad (E15.5) ratón secciones del cerebro y ojo de pez cebra adulto secciones fueron cosechadas en menos tiempo e intacta más morfológicamente. Este método puede utilizarse también para otras muestras de tejidos que requieren acelerado parafina secciones evitando la pérdida de distinción de la sección.
Protocol
Representative Results
Discussion
Para mejorar la morfología de la sección de parafina y resolver el problema del tiempo perdido durante el seccionamiento de la parafina convencional, hemos creado una parafina mejor método que combina el corte y el despliegue de seccionamiento. Este método mejorado se basa en un equipo simple que consta de un canal de sección, un baño de agua y un calentador con un interruptor de detección de temperatura. La cinta de la sección entra en el baño de agua a través del canal de sección y se despliega automáticame…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue financiado por la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (Grant no. 31400936, 31460260) y la Ciencia Natural Fundación de Jiangxi provincia de China (20171BAB215020). También agradecemos al programa conjunto entre la Universidad de Nanchang y Queen Mary University of London para apoyar este trabajo.
Materials
| Incubator | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 64-17-5 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| Heated Paraffin Embedding Module | Leica | ||
| Commercial acrylic board | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 67-66-3 | |
| Tubular electric heating element(12V 200W) | |||
| Temperature controller(12v 120w) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| Rotary microtome | Leica | ||
| Neutral silicone sealant | Link the water channel with the microtome knife holder | ||
| Voltage transformer | Dearll | S-250-12 | |
| Disposable blade | Accu-Edge | 4689 | |
| Hematoxylin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Eosin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| Microscope | Carl Zeiss | ||
| Hydrochloric acid | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| Water bath for paraffin sections | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - Cold Plate | Leica | ||
| paraffin repellent spray | Thermo Scientific | 9990420 |
References
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