La découpe et la méthode flottante pour tissus inclus en paraffine pour le sectionnement
Summary
Nous présentons ici un protocole visant à améliorer le sectionnement de la paraffine. Cette méthode combine coupe et flottant à l’aide d’une simple chambre thermostatique pour éviter le processus de transfert requis par la méthode conventionnelle. En conséquence, l’efficacité et le nombre de sections de paraffine intacts ont été grandement améliorées.
Abstract
Découpe des tissus inclus en paraffine est largement utilisé en histologie et pathologie. Toutefois, il est fastidieux. Pour améliorer cette méthode, plusieurs sociétés commerciales ont mis au point des systèmes de transfert de section complexe à l’aide de l’eau liquide. Pour simplifier cette technologie, nous avons créé une méthode simple à l’aide de matériel fait maison qui combine coupe et flottant dans une enceinte thermostatique simple ; par conséquent, les sections automatiquement dans le bain d’eau à la surface de l’eau. L’hippocampe du cerveau de souris adultes, reins de souris adulte, cerveaux embryonnaires de souris et yeux de poisson-zèbre adulte ont été coupés à l’aide de paraffine conventionnelle de sectionnement et de la méthode présentée aux fins de comparaison. L’analyse statistique montre que notre méthode améliorée enregistrés fois et produit des Articles de qualité supérieures. En outre, il est facile pour les opérateurs juniors de paraffine sectionnement d’un spécimen entier en peu de temps.
Introduction
Étude morphologique est importante dans la recherche biologique. Bien que la nouvelle technologie a permis aux chercheurs d’observer leurs cibles directement du tissu entier ou organismes1,2,3, coupant le spécimen en lames minces, suivie d’une coloration, reste le principal la morphologie tissulaire seule méthode fornot mais aussi protéine ciblant directement dans le tissu. Microscopie optique utilise trois types de section : paraffine, congelé et semi-fines. Bien que cryosectioning est commun pour protéger l’antigénicité des tissus, et la préparation des échantillons est simple, la morphologie des tissus conservés est pauvre et impropres à être mince séparation4,5. Sectionnement de paraffine est la méthode le plus souvent utilisée pour qui présentent une morphologie bien conservée. Comme les spécimens sont déshydratées complètement et incorporés dans la cire, les blocs de paraffine peuvent être conservés indéfiniment. En outre, paraffine sectionnement produit des coupes minces qu’améliorer l’accès de la sonde biologique dans d’autres expériences et réduisent la superposition de couche de cellule dans la direction Z.
Cependant, paraffine conventionnelle de sectionnement est fastidieux et exige des compétences de l’opérateur. Sections de paraffine subissent une fixation, déshydratation, enrobage, découpage et flottant. Ce qui est important, rubans section proviennent du porte-couteau à l’eau du bain est nécessaire mais difficile pour les opérateurs juniors. Surtout dans l’air sec, les rubans de section seront tordre à cause de l’électricité statique et sont difficiles à se dérouler sur la surface de l’eau tiède. Afin d’améliorer la section qualité, humidifier la surface du tissu exposé entre les passages de lame microtome, refroidissement des blocs de cire en l’immergeant dans l’eau glacée, ou le relèvement de l’humidité avec un humidificateur près du microtome est recommandée6,7 . Des méthodes plus récentes pour améliorer le sectionnement de la paraffine incluent hybride enrobage de paraffine, cryosectioning8et section commerciale transfert système assistance9. Bien que ces méthodes améliorent partiellement paraffine sectionnant la rapidité et la qualité, ils font la section beaucoup plus encombrante, et systèmes de transfert de la section commerciale sont chers.
Dans ce protocole, nous montrent comment créer des équipements simples, bon marché et flexible étape par étape, qui peuvent être reliée au détenteur d’un microtome à lame. Cet équipement se compose d’un canal de section, un bain d’eau et un appareil de chauffage avec un interrupteur de détection de température. Après la découpe, des dizaines de sections se jettent dans le canal de section et entrer dans le bain d’eau directement, donc qui se déroulent automatiquement. Cela améliore l’efficacité de sectionnement de la paraffine et rend cette technologie plus commode. En utilisant cette méthode, plus adulte souris hippocampe sections, sections de rein de souris adultes, embryonnaires 15,5 sections jour-vieux (E15.5) souris cerveau et œil de poisson-zèbre adulte sections ont été récoltées en moins de temps et est restées intact plus morphologiquement. Cette méthode peut également être utilisée pour d’autres échantillons de tissus qui requièrent le sectionnement de paraffine accéléré tout en évitant la perte de distinction de la section.
Protocol
Representative Results
Discussion
Pour améliorer la paraffine section morphologie et résoudre le problème de perte de temps au cours de la paraffine conventionnelle de sectionnement, nous avons créé une paraffine meilleure méthode qui combine la coupe et du dépliage de sectionnement. Cette méthode améliorée s’appuie sur des équipements simples qui comprend un canal de section, un bain d’eau et un appareil de chauffage avec un interrupteur de détection de température. Le ruban de la section entre le bain d’eau à travers le canal de la …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (Grant no 31400936, 31460260) et la Fondation sciences naturelles du Jiangxi Province de Chine (20171BAB215020). Nous remercions également le programme conjoint entre l’Université de Nanchang et Queen Mary University of London pour soutenir ce travail.
Materials
| Incubator | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 64-17-5 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| Heated Paraffin Embedding Module | Leica | ||
| Commercial acrylic board | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 67-66-3 | |
| Tubular electric heating element(12V 200W) | |||
| Temperature controller(12v 120w) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| Rotary microtome | Leica | ||
| Neutral silicone sealant | Link the water channel with the microtome knife holder | ||
| Voltage transformer | Dearll | S-250-12 | |
| Disposable blade | Accu-Edge | 4689 | |
| Hematoxylin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Eosin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| Microscope | Carl Zeiss | ||
| Hydrochloric acid | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| Water bath for paraffin sections | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - Cold Plate | Leica | ||
| paraffin repellent spray | Thermo Scientific | 9990420 |
References
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