Nier Regeneratie in Adult zebravis door Gentamicin geïnduceerd letsel

De nier is essentieel voor vloeistof homeostase, regulering van de bloeddruk en filtratie van afvalstoffen uit het lichaam. Hoewel de zoogdieren zijn in staat om de bestaande nefronen te herstellen na een blessure met gedifferentieerde epitheliale cellen ^1-4, lijken ze een pool van gereserveerde stamcellen ⁵ missen en niet in staat zijn om nieuwe nefronen de novo te vormen. In tegenstelling tot zoogdieren, volwassen vissen kunnen nieuwe nefronen tijdens het volwassen leven vormen voor de groei van de vis en in reactie op verwonding ^6,7 ondersteunen. De zebravis, Danio rerio, is een waardevolle modelorganisme voor de studie van orgaanregeneratie ^10/08 en heeft het potentieel om krachtige inzichten in toepassingen van engineering van de reparatie van menselijke nieren. De Tg (Lhx1a: EGFP) transgen ¹¹ is aangetoond dat een pool van nefron progenitorcellen label in de volwassen zebravissen nier ¹² echter mechanismen die de reactie van lhx1a + cellen letsel rEmain onduidelijk.

Het aminoglycoside gentamicine is een veel gebruikte antibioticum met bekende nefrotoxische en ototoxische effecten bij de mens ^13. Intraperitoneale injectie van gentamicine is een gevestigde methode voor het induceren van acuut nierfalen in vis ^6. Deze blessure in vis bootst het verlies van tubulair epitheel en littekenvorming van glomeruli die optreedt bij de mens na gentamicine overdosis ^14. Het induceren schade in zebravis door gentamicine injectie is een geschikte wijze van aanbrengen van een sterke, synchrone regeneratie respons, met veel nieuwe nefronen geproduceerd en tegelijkertijd het doorlopen stadia van hun vorming, proliferatie en differentiatie.

Dit protocol Gegevens onze methode voor robuuste en reproduceerbare letsel in de volwassen zebravissen nier door gebruik te maken van een niet-invasieve visuele screening proces om uitschieters te minimaliseren. We profiteren van het feit dat de schade met gentamicine leidt tot de dood van epitheliale nierweefsel en het formaation van renale tubulaire casts, die vervolgens ophopen in massa's in de mesonephric leidingen en cloaca. Deze worden aangenomen door de vis en kan visueel worden waargenomen in het water. Dit stelt ons in staat om het scherm voor vissen met een sterke niet-dodelijke verwondingen, die vervolgens kunnen worden samengevoegd voor verdere experimenten. Het minimaliseren van de aantallen niet gewonde vis of vis die sterven voordat ze het eindpunt van het experiment leidt tot meer uniforme en efficiënte verzamelen van gegevens en analyse. Bovendien zijn geen speciale apparatuur of reagentia vereist, waardoor deze werkwijze rendabel en geschikt voor gebruik in een academische of lering instelling. Met onze werkwijze, hier tonen we de effecten van toenemende dosis gentamicine de nieren regeneratie en het effect van verhoogde temperatuur.