La regeneración renal en adultos de pez cebra por gentamicina lesión inducida

El riñón es esencial para la homeostasis de fluidos, la regulación de la presión arterial y la filtración de los residuos del cuerpo. Aunque los mamíferos son capaces de reparar nefronas existentes después de la lesión utilizando células epiteliales diferenciadas ^1-4, que parecen carecer de una piscina de células madre reservadas ⁵ y son incapaces de formar nuevas nefronas de novo. En contraste a los mamíferos, peces adultos son capaces de formar nuevas nefronas largo de la vida adulta para apoyar el crecimiento de los peces y en respuesta a la lesión ^6,7. El pez cebra, Danio rerio, es un organismo modelo de gran valor para el estudio de la regeneración de órganos ^8-10 y tiene el potencial para proporcionar información de gran alcance en las aplicaciones de la ingeniería de la reparación de los riñones humanos. La Tg (Lhx1a: EGFP) transgén ¹¹ se ha demostrado para etiquetar un conjunto de células progenitoras nefrona en el riñón adultos de pez cebra ^12, sin embargo los mecanismos que controlan la respuesta de lhx1a + células a una lesión rEmain claro.

La gentamicina es un antibiótico aminoglucósido ampliamente utilizado con efectos nefrotóxicos y ototóxicos conocidos en humanos ^13. La inyección intraperitoneal de gentamicina es un método establecido de inducir lesión renal aguda en peces ^6. Esta lesión en imita pescado la pérdida de epitelio tubular y la cicatrización de los glomérulos que se produce en los seres humanos después de la gentamicina sobredosis ^14. La inducción de lesiones en el pez cebra por inyección de gentamicina es una manera conveniente de inducir una respuesta regeneración síncrono fuerte, con muchas nuevas nefronas producidos y de proceder simultáneamente a través de etapas de la formación, la proliferación y la diferenciación.

Este protocolo detalla nuestro método de lesión robusta y reproducible en el pez cebra riñón adulto mediante la utilización de un proceso de selección visual no invasiva para reducir al mínimo los valores atípicos. Aprovechamos el hecho de que las lesiones con gentamicina conduce a la muerte del tejido renal epitelial y formatoión de cilindros tubulares renales, que luego se acumulan en masas en los conductos mesonéfricos y cloaca. Estos son pasados ​​por el pescado y se pueden observar visualmente en el agua. Esto nos permite a la pantalla para los peces con una fuerte lesión no letal, que luego pueden ser agrupados para su posterior experimentación. Reducir al mínimo el número de peces o no lesionado que mueren antes de llegar al punto final del experimento conduce a más uniforme y la recopilación de datos eficiente y análisis. Además, no se requieren dispositivos especiales o reactivos, por lo que este método rentable y adecuado para su uso en un entorno académico o la enseñanza. Usando este método, aquí mostramos las crecientes efectos de la dosis de gentamicina en la regeneración del riñón, así como el efecto del aumento de temperatura.