Digestion enzymatique et dissociation manuelle : une méthode pour préparer les embryons de C. elegans à la culture cellulaire

Published: April 30, 2023

Abstract

Source : Sangaletti, R. et Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. Exp. (2013). 

Cette vidéo introduit une méthode pour isoler et culturer stérilement les cellules embryonnaires de C. elegans in vitro.

Protocol

1. Dissociation des cellules embryonnaires Effectuer les prochaines étapes de la procédure dans des conditions stériles à l’aide d’un capot d’écoulement laminaire. Alors que les animaux sont robe sur les plaques de bactéries, les lavages et le traitement avec la solution de lyse contenant de l’eau de Javel devrait éliminer la plupart sinon toutes les bactéries. Ainsi, l’utilisation d’une hotte laminaire à ce stade de la procédure empêche une nouvelle contamination de la s…

Representative Results

Figure 1. Embryons de C. elegans avant et après le traitement de chitinase. (A) Photographie des œufs avant l’exposition à la chitinase. La flèche indique la coquille d’œuf transparente et intacte entourant un embryon. (B) Oeufs traités avec chitinase pendant 10 min. Les coquilles d’œufs ont été digérées et ne sont plus visibl…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid Invitrogen 11415-064
Fetal Bovine Serum Invitrogen 16140-063
Penicillin-streptomycin Sigma P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus Sigma C6137-25UN
Peanut Lectin Sigma L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips USA Scentific 1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped USA Scentific 1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector VWR International Inc. 89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond VWR International Inc. 53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile VWR International Inc. 14670-114
15 ml Conical Tube USA Scentific 1475-1611
Sterile 18 gauge Needles Becton, Dickinson and Co. 305196
Sterile 10 ml Syringes Becton, Dickinson and Co. 305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size Corning 431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane VWR International Inc. 28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips VWR International Inc. 48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid Thomas scientific 6902A09
Dumont #5- Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20
Centrifuge 5702 Eppendorf 22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator

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Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).

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