Enzymatische spijsvertering en handmatige dissociatie: een methode om C. elegans-embryo's voor celcultuur te bereiden
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Sangaletti, R. and Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J.Vis. Exp. (2013).
Deze video introduceert een methode om embryonale C. eleganscellen in vitro te isoleren en steriel te gekweekt.
Protocol
1. Embryonale cellen dissociatie Voer de volgende stappen van de procedure uit onder steriele omstandigheden met behulp van een laminaire stroomkap. Terwijl dieren toga op bacteriënplaten zijn, moeten de wasbeurten en de behandeling met de lysis-oplossing die bleekmiddel bevat, de meeste, zo niet alle bacteriën elimineren. Zo voorkomt het gebruik van een laminaire kap op dit punt van de procedure nieuwe verontreiniging van de eisuspensie. Resuspend gepelde eieren in 1 ml chitinase v…
Representative Results
Figuur 1. C. elegans embryo’s voor en na chitinase behandeling. A) Foto van eieren vóór blootstelling aan chitinase. De pijl wijst naar de transparante en intacte eierschaal rond een embryo. (B) Eieren behandeld met chitinase gedurende 10 minuten. De eierschalen zijn verteerd en zijn niet meer zichtbaar rond de embryo’s. De pijlen wijzen naa…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).