עיכול אנזימטי ודיסוציאציה ידנית: שיטה להכנת C. elegans עוברים לתרבות התא
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: Sangaletti, R. וביאנקי, L. שיטה Culturing עוברי C. elegans תאים. ג’יי ויס אקספ. (2013).
וידאו זה מציג שיטה לבודד תרבות סטרילית עוברית C. elegans תאים במבחנה.
Protocol
1. ניתוק תאים עובריים בצע את השלבים הבאים של ההליך בתנאים סטריליים באמצעות מכסה המנוע זרימה למינארי. בעוד בעלי חיים הם שמלת על צלחות חיידקים, שטיפות ואת הטיפול עם פתרון תמוגה המכיל אקונומיקה צריך לחסל ביותר אם לא את כל החיידקים. לכן באמצעות מכסה המנוע למינאר בשלב זה של ההליך מ…
Representative Results
איור 1. ג. אלגנים עוברים לפני ואחרי טיפול chitinase. (א) תצלום ביצים לפני החשיפה לצ’יטינז. החץ מצביע על קליפת הביצה השקופה והשלמה המקיפה עובר. (ב) ביצים שטופלו בצ’יטינז במשך 10 דקות. קליפות הביצים מתעכ…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).