Digestión enzimática y disociación manual: un método para preparar embriones C. elegans para el cultivo celular
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Sangaletti, R. y Bianchi, L. Un método para la cultectación de células embrionarias C. elegans. J. Vis. (2013).
Este video introduce un método para aislar y cultivar estérilmente células embrionarias C. elegans in vitro.
Protocol
1. Disociación de células embrionarias Realice los siguientes pasos del procedimiento en condiciones estériles utilizando una campana de flujo laminar. Mientras que los animales están vestidos en placas de bacterias, los lavados y el tratamiento con la solución de lisis que contiene lejía deben eliminar la mayoría si no todas las bacterias. Por lo tanto, el uso de una capucha laminar en este punto del procedimiento evita una nueva contaminación de la suspensión del huevo. Res…
Representative Results
Figura 1. C. embriones elegans antes y después del tratamiento con quitosa. (A) Fotografía de óvulos antes de la exposición a la quitosa. La flecha apunta a la cáscara de huevo transparente e intacta que rodea un embrión. (B) Huevos tratados con quitosa durante 10 min. Las cáscaras de huevo han sido digeridas y ya no son visibles alrede…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).