효소 소화 및 수동 해리: 세포 배양을 위한 C. 예르간 배아를 준비하는 방법
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: 상갈레티, R. 및 비안치, L. 배아 C. 예르간 세포를 배양하는 방법. J. 비스 익스펙. (2013).
이 비디오는 시험관 내에서 배아 C. 엘레간 세포를 분리하고 살균하는 방법을 소개합니다.
Protocol
1. 배아 세포 해리 라미나르 플로우 후드를 사용하여 멸균 조건하에서 절차의 다음 단계를 수행한다. 동물은 박테리아 접시에 가운 동안, 표백제가 포함 된 용액을 가진 세차및 치료는 모든 박테리아가 아니라면 대부분제거해야합니다. 따라서 절차의이 시점에서 라미나르 후드를 사용하여 계란 현탁액의 새로운 오염을 방지할 수 있습니다. 펠렛 달걀을 2 mg/ml 치티나아?…
Representative Results
그림 1. C. 치티나아제 치료 전후에 예족 배아. (A) 치티나아제에 노출되기 전에 계란의 사진. 화살표는 배아를 둘러싼 투명하고 그대로 달걀 껍질을 가리킵니다. (B) 10 분 동안 치티나아제로 처리 된 계란. 달걀 껍질은 소화되었으며 배아 주위에 더 이상 볼 수 없?…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).