/
/
שילוב מערכות SDS ללא הפחתה-דף ניתוח ויצירת קישור כימי כדי לזהות מכלולי מולטימאריק התייצב על ידי הקשרים הדיסולריים בתאי היונקים בתרבות
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Title
- 00:34Harvesting Cells After Blocking Free Cysteine Residues Using Iodoacetamide
- 02:02Extraction of Protein and Sample Preparation
- 03:13In Vivo Formaldehyde Cross-linking of Endogenous Proteins in U-2 OS Cells
- 04:30Fractionation of Nuclei
- 06:11Extraction of Protein and Sample Preparation
- 06:51SDS-PAGE Analysis
- 07:53Results: Analyzing Multimeric Complexes Using a Two-step Method of Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Formaldehyde Cross-linking
- 09:04Conclusion
הקשרים disulfide כבר זמן רב ידועים לייצב את המבנה של חלבונים רבים. שיטה פשוטה לנתח מכלולי מולטימאריק התייצב על ידי קישורים אלה היא באמצעות ניתוח שאינו מקטין SDS-PAGE. כאן, שיטה זו מומחש על ידי ניתוח isoform גרעינית של דאפס של העצם האנושית קו התאים אוסטאוסרקומה U-2 מערכת ההפעלה.
