Journal
/
Genetics
/
Saccharomyces cerevisiae Metabolsk merking med 4-thiouracil og kvantifisering av nylig syntetisert mRNA som en Proxy for RNA Polymerase II aktivitet
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity

Saccharomyces cerevisiae Metabolsk merking med 4-thiouracil og kvantifisering av nylig syntetisert mRNA som en Proxy for RNA Polymerase II aktivitet

DOI:
10.3791/57982-v

•

09:21 min

•

October 22, 2018

•

,
1Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Illkirch, France, 2Centre National de la Recherche Scientifique, Illkirch, France, 3Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Illkirch, France, 4Université de Strasbourg

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:41Cell Culturing
  • 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
  • 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
  • 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
  • 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
  • 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
  • 08:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Protokollen beskrevet her er basert på genomet hele kvantifisering av nylig syntetisert mRNA renset fra gjærceller merket med 4-thiouracil. Denne metoden gjør det mulig for å måle mRNA syntese uncoupled fra mRNA forfall, og dermed gir en nøyaktig måling av RNA polymerase II transkripsjon.

Tags

Saccharomyces CerevisiaeMetabolic Labeling4-thiouracilQuantificationNewly Synthesized MRNARNA Polymerase II ActivityMicroarray HybridizationHigh-throughput SequencingS. PombeYPD MediumYAS MediumCell CountingCell CentrifugationRNA ExtractionRNA Polymerase II

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Måling av Forskjellig metylert<em> INS</em> DNA Arter i humant serum som en biomarkør for Islet β celledød

Inducerbart T7 RNA Polymerase-mediert Multigen Expressions System, pMGX

Genom-brede kartlegging av protein-DNA-interaksjoner med ChEC-seq i<em> Saccharomyces cerevisiae</em

Måle mRNA nivåer Over tid under gjær S. cerevisiae Hypoxic svaret

Metabolsk merking og profilering av overføring RNAs bruker Macroarrays

Semi kvantitative påvisning av RNA-avhengig RNA Polymerase aktivitet av menneskelig Telomerase revers transkriptase Protein

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Histone endringer fra Saccharomyces cerevisiae

Metodikk for nøyaktig påvisning av Mitokondrielt DNA metylering

Kvantitativ analyse av Alternative Pre-mRNA skjøting i musen hjernen inndelinger ved hjelp av RNA i Situ hybridisering analysen

Evaluering av en Universal nestet omvendt transkripsjon polymerase Kjedere reaksjon for påvisning av Lyssaviruses

Read Article