Journal
/
Genetics
/
Saccharomyces cerevisiae Metabole labelen met 4-thiouracil en de kwantificering van gesynthetiseerd mRNA nieuw als een Proxy voor RNA Polymerase II activiteit
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Saccharomyces cerevisiae Metabole labelen met 4-thiouracil en de kwantificering van gesynthetiseerd mRNA nieuw als een Proxy voor RNA Polymerase II activiteit

DOI:
10.3791/57982-v

•

09:21 min

•

October 22, 2018

•

,
1Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Illkirch, France, 2Centre National de la Recherche Scientifique, Illkirch, France, 3Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Illkirch, France, 4Université de Strasbourg

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:41Cell Culturing
  • 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
  • 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
  • 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
  • 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
  • 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
  • 08:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Het protocol hier beschreven is gebaseerd op het genoom-brede kwantificeren van nieuw samengestelde mRNA gezuiverd van gistcellen aangeduid met 4-thiouracil. Deze methode maakt het mogelijk om het meten van de mRNA-synthese rekken van mRNA verval en biedt dus een nauwkeurige meting van RNA polymerase II transcriptie.

Tags

Saccharomyces CerevisiaeMetabolic Labeling4-thiouracilQuantificationNewly Synthesized MRNARNA Polymerase II ActivityMicroarray HybridizationHigh-throughput SequencingS. PombeYPD MediumYAS MediumCell CountingCell CentrifugationRNA ExtractionRNA Polymerase II

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Meting van differentieel gemethyleerde<em> INS</em> DNA-Species in monsters humaan serum als een Biomarker van Islet β Cell Death

Induceerbaar T7 RNA Polymerase-gemedieerde Multigene Expression System, pMGX

Genoom-wide mapping van eiwit-DNA-interacties met ChEC-seq in<em> Saccharomyces cerevisiae</em

Het meten van de mRNA niveaus na verloop van tijd tijdens de gist S. cerevisiae hypoxische reactie

Metabole Labeling en profilering van overdracht RNAs met behulp van Macroarrays

Semi-kwantitatieve opsporing van RNA-afhankelijke RNA-polymeraseactiviteit van menselijke Telomerase Reverse-Transcriptase eiwit

Chromatine Immunoprecipitation (ChIP) van Histone modificaties van Saccharomyces cerevisiae

Methodologie voor nauwkeurige detectie van mitochondriaal DNA methylatie

Kwantitatieve analyse van alternatieve Pre-mRNA-Splicing in muis hersenen secties met behulp van RNA In Situ hybridisatie Assay

Evaluatie van een universele geneste omgekeerde transcriptie polymerase chain reactie voor de opsporing van Lyssaviruses

Read Article