A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Title
- 00:41Cell Culturing
- 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
- 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
- 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
- 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
- 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
- 08:52Conclusion
प्रोटोकॉल यहां वर्णित नए संश्लेषित mRNA खमीर 4-thiouracil के साथ लेबल कोशिकाओं से शुद्ध के जीनोम चौड़ा ठहराव पर आधारित है । इस विधि mRNA संश्लेषण mRNA क्षय से जोड़े को मापने के लिए अनुमति देता है और, इस प्रकार, आरएनए पोलीमरेज़ द्वितीय प्रतिलेखन की एक सटीक माप प्रदान करता है.
