Journal
/
Genetics
/
Saccharomyces cerevisiae Metaboliske mærkning med 4-thiouracil og kvantificering af nyligt syntetiserede mRNA som en Proxy for RNA Polymerase II aktivitet
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity

Saccharomyces cerevisiae Metaboliske mærkning med 4-thiouracil og kvantificering af nyligt syntetiserede mRNA som en Proxy for RNA Polymerase II aktivitet

DOI:
10.3791/57982-v

•

09:21 min

•

October 22, 2018

•

,
1Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Illkirch, France, 2Centre National de la Recherche Scientifique, Illkirch, France, 3Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Illkirch, France, 4Université de Strasbourg

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:41Cell Culturing
  • 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
  • 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
  • 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
  • 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
  • 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
  • 08:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Protokollen beskrevet her er baseret på en genome-wide kvantificering af nyligt syntetiserede mRNA renset fra gærceller mærket med 4-thiouracil. Denne metode gør det muligt for at måle mRNA syntese sammenkædet fra mRNA i tænderne og således giver en nøjagtig måling af RNA polymerase II transskription.

Tags

Saccharomyces CerevisiaeMetabolic Labeling4-thiouracilQuantificationNewly Synthesized MRNARNA Polymerase II ActivityMicroarray HybridizationHigh-throughput SequencingS. PombeYPD MediumYAS MediumCell CountingCell CentrifugationRNA ExtractionRNA Polymerase II

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Måling af Differentielt Methyleret<em> INS</em> DNA Arter i humane serumprøver som biomarkør for Islet β Cell Død

Inducerbart T7 RNA Polymerase-medieret Multigen Expressions System, pMGX

Genom-bred kortlægning af protein-DNA-interaktioner med ChEC-seq in<em> Saccharomyces cerevisiae</em

Måling af mRNA niveauer Over tid under gær S. cerevisiae hypoksiske svar

Metaboliske mærkning og profilering af overførsel RNA'er ved hjælp af Macroarrays

Semi-kvantitative opdagelse af RNA-afhængige RNA Polymerase aktivitet af menneskelige Telomerase Reverse transkriptase Protein

Kromatin Immunoprecipitation (ChIP) af Histon ændringer fra Saccharomyces cerevisiae

Metoder til nøjagtig detektering af mitokondrie-DNA methylering

Kvantitativ analyse af Alternative Pre-mRNA-Splicing i mus hjernen sektioner ved hjælp af RNA In Situ hybridisering Assay

Evaluering af en universel indlejret reverse transkription polymerase kædereaktion til påvisning af Lyssavira

Read Article