我々は、蚊およびショウジョウバエにおける殺虫剤感受性を測定するための局所適用バイオアッセイの方法論および重要性を説明する。提示されたアッセイはハイスループットであり、昆虫の質量を利用し、したがって濃度の代わりに質量相対化された致死量の計算を可能にし、他の同様の方法よりも変動性が低い可能性が高い。
公衆衛生および農業のための殺虫剤の継続的な使用は、広範な殺虫剤耐性および防除方法の妨げをもたらしている。蚊の個体群の殺虫剤耐性サーベイランスは、通常、疾病管理予防センター(CDC)のボトルバイオアッセイまたは世界保健機関(WHO)のチューブ検査を通じて行われます。しかしながら、これらの方法は、昆虫との可変殺虫剤接触、試験された比較的少数の生物、集団間の質量の広範な変動、および絶えず変化する環境条件のために、死亡率データに高度の変動をもたらし、変動する結果をもたらす可能性がある。この論文は、蚊とショウジョウバエの両方に対するハイスループット表現型バイオアッセイとして適応された局所適用バイオアッセイを提示し、殺虫剤濃度の範囲に沿って多数の昆虫を試験する。
このアッセイは、1)すべての生物との一貫した処理および殺虫剤接触を保証し、2)株と性別間の平均質量の違いを説明する非常に特異的な用量反応曲線を生成し(これは野外採取生物にとって特に重要である)、および3)統計的に厳密な中央値致死量(LD50)は、耐性比の比較に必要であり、幼虫駆除剤耐性サーベイランスにも使用される診断用量死亡率からの代替サーベイランスアプローチである。このアッセイは、蚊の集団を正確に表現型決定するための補完的なツールとなり、ショウジョウバエを使用して例示されるように、他の昆虫との使用に容易に適応可能である。我々は、このアッセイが、複数の昆虫種における遺伝子型と表現型殺虫剤耐性との間のギャップを埋めるのに役立つと主張する。
蚊は、人間に伝染する病気のために毎年70万人以上の死亡の原因となっており、その半数以上がマラリアのみによるものです1。マラリアおよび他のベクター媒介性疾患の伝染に対する主な予防方法は、しばしば長持ちする殺虫剤ネットまたは屋内残留散布2の形態で殺虫剤を使用することである。しかし、殺虫剤耐性は、蚊および他の昆虫ベクター、ならびに農業害虫3,4の間で広まっている。レジスタンスを効果的に管理するためには、監視が非常に重要です5.そのためには、高精度で高スループットの抵抗検出方法が必要です。現在、蚊のための最も広範な殺虫剤耐性監視ツールは、WHOチューブ試験6およびCDCボトルバイオアッセイ7である。ショウジョウバエの場合、残留接触施用法(CDCボトルバイオアッセイに類似)は、一般的に使用される殺虫剤バイオアッセイ8、9、10である。しかしながら、これらの方法からのデータの変動性は典型的に高く、同じ実験室の蚊株の測定値は、CDCボトルアッセイで〜20〜70%、致死量以下の用量にさらされた場合のWHO管試験で0〜50%の範囲である11。このような変異は、ほとんどの実験室株における限られた遺伝的変異が、集団における限定的な殺虫剤感受性変動をもたらすと予想されるので驚くべきことである。それにもかかわらず、バイオアッセイ結果に観察された高レベルの変動が依然として存在する。
この変動の潜在的な原因は、表面を介した間接的な殺虫剤曝露、不均一な環境影響、同じ遺伝子型の個体間の正常な生物学的変動、および同じ集団の検体の質量の変動によるバイオアッセイ内の検体間の不均一な殺虫剤曝露の結果であり得る12.より高い再現性を有するあまり使用されない方法は、局所適用バイオアッセイである。このアッセイでは、殺虫剤を各昆虫13、14に直接塗布し、同じアッセイ内の異なる検体の不均一暴露の因子を除去する。しかし、この方法のスループットが遅いため、蚊の集団に対する殺虫剤感受性監視ツールとして日常的に使用されていません。この論文は、殺虫剤感受性の変化と相関するパラメータである昆虫塊の変動を補正しながら、よりスループットの高い曝露を可能にする局所適用バイオアッセイのための修正されたプロトコルを提示する12。可変殺虫剤曝露による死亡率データの騒音および質量関連変動の減少は、より正確な技術的耐性サーベイランスを可能にするであろう11,15。このようなデータは、表現型耐性を遺伝子マーカー、適応度パラメータ、および/またはベクター能力とより正確に関連付けるために使用することができる。さらに、このアッセイを他の昆虫種に容易に適応させることができることを実証するために、より小さな体の昆虫種であるショウジョウバエに対する局所適用バイオアッセイを使用する。
前述の残留接触用途の主な制限は、殺虫剤曝露が同じアッセイ内で検体ごとに異なる可能性があることである。CDCボトルバイオアッセイおよび接触法の場合、殺虫剤曝露は、同じアッセイの反復間で変化し得る。昆虫は、ガラス瓶の内側(CDCボトルバイオアッセイおよび接触法)または含浸紙(WHOチューブ試験)に分布する殺虫剤にさらされる。両面(ガラスおよび紙)における殺虫剤の濃度は、既知の遺伝子型の異なる種をスクリーニングすることによって既知であり、予め定められている。しかしながら、昆虫によって吸収される可能性があるために利用可能な量は、使用される表面、殺虫剤混合物成分、および殺虫剤が表面材料16、17にわたってどの程度均質に分布しているかによって大きく異なり得る。CDCボトルバイオアッセイでは、ボトルの内側の殺虫剤コーティングは、各実験室およびユーザーが採用する手順に依存する。WHOのチューブテストでは、殺虫剤処理された紙は集中的に生産されるため、ラボ全体で非常に均質である可能性が最も高いです。しかし、WHOチューブ試験では、暴露チューブは検体が非殺虫剤暴露金属メッシュ上に着陸して休むことを可能にし、各試験内の検体間で潜在的に不均一な殺虫剤曝露をもたらす。各方法で検体に拾い上げられ吸収された殺虫剤の実際の量は、まださらに調査する必要があります18.
さらに、CDCボトルバイオアッセイ、WHOチューブ試験、および接触法は、1つの所定の殺虫剤濃度のみを試験する閾値アッセイとして最も一般的に使用される。このアプローチは、抵抗の存在を正確に検出することができ、抵抗監視(特に抵抗が広がっている場合)にとって有益です。しかし、閾値アッセイでは耐性の強さを定量化できず、介入ツールの有効性をより予測できる可能性があります。これらの方法で複数の殺虫剤濃度を使用する場合、それらは強度アッセイとして使用することができる。CDCボトルバイオアッセイおよびWHOチューブ試験のための強度アッセイは、サーベイランス6、19におけるこのギャップに対処するために、所定の識別用量の5倍および10倍を試験することによって導入されている。耐性集団を区別するより大きな能力を提供する一方で、3〜5(予め決定された)投与量は、致死濃度を計算するための限られた分解能を提供する。さらに、様々なサイズの蚊がそのようなアッセイに使用される。しかし、単位質量当たりの有効線量はより小さな生物のそれよりもはるかに低いため、より大きな標本を殺すためにより高い線量を必要とする可能性があるため、質量を測定することは重要です12。質量相対化された致死量(昆虫質量あたりの殺虫剤の量)を計算することは、性別、集団、および遺伝子型間の昆虫質量の変動を考慮するため、より一般的な致死濃度(例えば、表面積あたりの殺虫剤の量)よりも有用な指標であろう。このようなデータは、実験室および現場における遺伝子型耐性と表現型耐性との間のギャップを埋めるのに役立ち、また、既知の平均質量の昆虫の集団を治療するために必要な適用濃度を計算する簡単な方法を提供する可能性がある。
検体の50%(LD 50)を殺す大量相対化致死量の使用には、他にもいくつかの利点があります。mg/kg(= ng/mg)単位の特定の化合物の毒性の評価は、ヒトおよび獣医の毒物学14において標準的であり、LD50 値は物質安全データシートに記載されています。致死的投与量はまた、特定の種に対する異なる化学物質間の毒性の直接比較、または異なる種20に対する同じ化学物質の毒性の直接比較、ならびに新規殺虫剤および化学物質13の高品質評価を可能にする。さらに、LD50 は、診断用量死亡率結果から導出されたものよりも有意義で正確な耐性比を提供することができ、これは集団中に存在する耐性レベルの過大評価をもたらし得る。したがって、このアッセイは、他のバイオアッセイに推奨されるよりも多くの検体に由来する大量相対化致死量に基づくより厳密な耐性モニタリングを提供することにより、日常的なサーベイランスプログラムに適しているであろう21。
局所適用方法は、耐性がすでに既知または疑われる場合の標準的な殺虫剤感受性バイオアッセイの代替として、蚊およびハエの殺虫剤感受性サーベイランスにおいて使用されてきた22,23、ならびに耐性プロファイルおよび殺虫剤固有毒性をより正確に評価するためのいくつかの害虫昆虫24におけるサーベイランス21.局所適用バイオアッセイでは、殺虫剤が各生物に適用され、殺虫剤曝露の変動が最小限に抑えられる。この論文は、殺虫剤曝露を短期間で多数の昆虫に適用し、昆虫塊22を防除することを可能にする、わずかに適応され改良された方法を提示する。良好なレベルの再現性を備えたこの高スループットの方法は、日常的な殺虫剤感受性監視のための有用な追加ツールとなり得る。
この論文は、蚊およびショウジョウバエの局所適用アッセイのための適合プロトコルを提示する。この手順は、最小限の特殊な機器を必要とするため、現場で他の生物と一緒に使用するように簡単に適応させることができます。以下に、このプロトコルの重要な手順、潜在的な変更、トラブルシューティングのアドバイス、方法の制限事項、およびこの方法の重要性を示します。
プロトコルの重要な手順: プロトコルには、誤って完了するとバイオアッセイの結果に劇的な影響を与える可能性のある3つの重要なステップがあります:殺虫剤濃度の精度、検体のノックダウン、および死亡率評価。
殺虫剤濃度精度:
反復可能な用量反応曲線と有意義な結果を得るためには、正確な殺虫剤溶液を持つことが非常に重要です。殺虫剤溶液調製への容積測定アプローチは、CDCボトルバイオアッセイ7および局所適用13、14、43の両方について文献内でより一般的である。しかしながら、ここで説明する重量測定アプローチは、(温度特異的な)密度を含めることによる温度の考慮のために本質的により正確であり、より正確な製剤調製につながる。
試料ノックダウン:
検体をノックダウンすることは、この方法の重要な要素であり、殺虫剤の正確な投与および重量測定を可能にする。しかし、生物を倒すことは、以前に実証したように、必然的に身体的ストレスと損傷のリスクを伴います30。したがって、試料をノックダウンする際には、i)各試料が同様の期間にわたってノックダウンされ、ii)ノックダウンの長さが最小限に抑えられ、iii)ノックダウンの方法がすべての試料にわたって一貫していることを確認するために、慎重かつ注意を払ってください。さらに、殺虫剤の施用前にノックダウン法を個別に試験して、方法が成功し、10%を超える制御死亡率を誘導しないことを確認することをお勧めします。経験の浅いユーザーにとっては、最初のテストに時間がかかることがあり、ノックダウン時間が長くなります。したがって、最初のアッセイの結果を解釈するときは注意してください。
死亡率評価:
死亡率を評価することは、特に殺虫剤が完全に殺すのではなく、蚊やハエを倒したり傷つけたりするだけの場合、困難な場合があります。したがって、殺虫剤が標的生物にどのように影響するかを認識し、開始する前に「死んだ」(またはノックダウンされた)生物の明確な定義を持つことが重要です。さらに、変動を減らすために、同じ人に用量と反復の間の死亡率を評価してもらうことをお勧めします。
プロトコルの変更: 以下に説明するいくつかの変形例をこのプロトコルに適用して、その汎用性およびアクセシビリティを改善することができる。
アッセイをより小型または大型の昆虫に適応させる:
より小さいまたはより大きな検体を使用する場合は、それぞれ殺虫剤のより少ないまたはより大きな用量量を適用することが推奨される。例として、0.5 μLの用量を0.2 μLの用量に減らすことによって、ショウジョウバエに蚊のプロトコルを適応させました。選択した用量量に対して正しいシリンジサイズが選択されていることを確認します。
野外昆虫へのアッセイの適応:
野外昆虫を使用する場合、昆虫の大きさにより多くのばらつきがあるかもしれません。したがって、昆虫を小さなグループ(例えば、カップあたり)で計量することは、大きなグループ(例えば、1つの実験に使用されるすべての昆虫)としてではなく、推奨されるであろう。これは、野外昆虫の質量の違いに関連する殺虫剤感受性の潜在的な変動を捉えるのに役立ちます。
機器の変更:
昆虫処理テント:検体の投与は、PVCパイプと蚊帳で簡単に構築された昆虫処理テントの下で完了することができます。これは、密閉された部屋(例えば、昆虫)の代替物であり得、昆虫飼育が起こる可能性のある地域での潜在的な殺虫剤汚染を排除するのに役立つ。この昆虫処理テントは建設が簡単で低コスト(〜$ 70)です。あるいは、昆虫処理ケージを購入することもできます(〜$ 425)。
チルテーブル:アイスパックまたは氷のトレイは、試料をノックダウンおよび/または試料をノックダウンしておくために使用することができる。
インキュベーター:インキュベーターは、検体を飼育し、殺虫剤処理後24時間検体を保持するために推奨されます。インキュベーターが利用できない場合は、構築することができます。インキュベーターを構築するために必要な機器には、断熱容器、加湿器、ヒートケーブル、湿度および温度コントローラ、およびライトが含まれ、これは以前の方法に従って拡張され、約$ 170の総費用に上るはずです44。
保持カップ:プラスチックカップは、処理された試料を分類して保持するために使用されますが、ワックスライニングされた紙コップまたはガラス容器が適切な代替品です。
生物およびライフステージの変更:
この方法は、他のベクター、昆虫、および/またはア カイエカキンケファシアトゥス 蚊32、イエバエ32、およびゴキブリ45などの節足動物、ならびに蚊の幼虫46などの非成虫の生活段階との使用に非常に適応可能である。
局所的なアプリケーションの場所の変更:
この方法は、殺虫剤を蚊の腹側胸部および腹部領域(およびショウジョウバエの背部)に適用することを記載する。ただし、他のアプリケーションの場所は、露出サイトが一貫している限り使用できます。殺虫剤感受性は施用場所32に基づいて変化し得るので、一貫性は重要である。
トラブルシューティングのアドバイス: この方法には、最初は困難ないくつかの手順があります。以下に、遭遇する可能性のある最も一般的な問題のいくつかを示します。
殺虫剤溶液の漏れ/蒸発:
殺虫剤は、一般に、揮発性の高い化合物であるアセトンに溶解される。これは、アセトンが室温で迅速に蒸発し、時間の経過とともに殺虫剤濃度を増加させることを意味する。殺虫剤溶液が漏れたり蒸発したりしているように見える場合は、溶液を作り直し、チューブの蓋がしっかりとオンになっていることを確認し、保存プロトコルが適切に守られていること(パラフィルムが使用されている、チューブが直立して保存されているなど)を再確認してください。漏れが続く場合は、アセトンが異なる温度で経験する体積の変化のためのより多くのスペースを可能にするために、より低い体積でチューブを充填してみてください。さらに、溶媒としてアセトンを使用する場合は、チューブがアセトン貯蔵用に定格されていることを確認してください(FEP、TFE、PFAプラスチックなど)。疎水性殺虫剤を使用する場合は、溶液をガラスバイアルに保管してください(疎水性殺虫剤がプラスチックよりもガラスに付着しないため)。蒸発を監視するために保存する前に溶液のメニスカスをマークすることも良い習慣です。
生物の体重を計量する際のマイクロバランス上の重量のドリフト:
体重計の重量測定値がドリフトしている場合(ゆっくりと上下している場合)、これは静的な状態が原因である可能性があります。ドリフトは、プラスチックが静電荷を容易に保持することができるので、プラスチックアイテムの生物を計量するときに最も頻繁に起こる。これを避けるために、計量されるプラスチック容器の下に計量紙を置くか、ガラスなどの非プラスチック容器を使用することができる。
異常な死亡率の結果:
死亡率の結果が異常に見える可能性がある多くの方法があり、例えば、対照における高い死亡率またはすべての殺虫剤用量にわたって高い/低い死亡率を観察する。各シナリオのトラブルシューティングについては、次のケースを確認してください。
高いコントロール死亡率
対照群で死亡率が高い(10%以上)場合は、ノックダウン法と検体がノックダウンされる時間の長さを評価します。可能であれば、標本がノックダウンされる時間を短くしてください。対照における高い死亡率について考慮すべき他の潜在的な要因には、i)インキュベーターの設定が正しいかどうかのチェックが含まれる – 異常な温度および/または湿度は死亡率の増加につながる可能性がある。温度と湿度は、独立したデータロガーで確認する必要があります。ii)昆虫の取り扱いを評価する。昆虫の扱いが多すぎたり、粗雑になりすぎたりすると、死亡率が高くなる可能性があります。iii)対照群または計装の治療に使用される100%アセトンに殺虫剤汚染がないかどうかを確認する。アセトンを交換し、すべての器具をアセトンまたはエタノールで洗浄してください。手袋を頻繁に交換し、こぼれを防ぎ、器具を清掃することで、汚染を避けてください。 補足ファイル3では、コントロール(アセトンのみ)カップ内で最大2匹の蚊が死亡したことに注意してください。この死亡率は高いとは見なされず(10%未満)、したがって、懸念の原因はなかった。
すべてのばく露群で死亡率が高い(ただし対照群ではそうではない)
試験には、より低い殺虫剤濃度またはより少ない用量量を使用してください。使用される投与量は、死亡率を誘発しない最小用量を超えている可能性があります。いくつかの10倍希釈を使用して正しい用量範囲を特定し、汚染を排除します。汚染を避けるために、最低濃度で投与を開始し、最高濃度に向かって作業してください。さらに、使用するすべての機器がアセトンおよび/またはエタノールで定期的に洗浄されていること、試料に適用される用量が非常に少なく、わずかな交差汚染でも結果に影響を与える可能性があることを確認してください。
すべての被ばく群における死亡率が低い
より高い殺虫剤濃度を使用してください。使用される投与量は、すべて集団の死亡率を引き起こすには低すぎる可能性があります。正しい用量範囲を特定するには、検体をさらに10倍の濃縮用量にさらします。殺虫剤溶液が期限切れまたは劣化していないことを確認してください(高温または光暴露による可能性があります)。ソリューションの有効期限が切れている場合、または劣化した疑いがある場合は、ソリューションを作り直し、適切なストレージ条件に従っていることを確認してください。
反復/日間の死亡率に一貫性がない
昆虫が殺虫剤に曝露される時刻は、特に代謝抵抗性34について発現される耐性のレベルに影響を及ぼす可能性がある。このプロトコルを毎日同じ時間帯に繰り返して、死亡率の変化に寄与する潜在的な変数としての時刻を回避します。反復間の一貫性のない死亡率に寄与する他の潜在的な要因には、i)実験間で差次的に飼育されている標本が含まれる。すべての検体が同じ年齢層で、同じ温度で、同様の密度と食物の入手可能性で飼育されていることを確認してください。ii)アセトン蒸発により経時的に分解またはより濃縮される殺虫剤濃度。ソリューションを再構築し、適切な保管条件を確認します。iii)一貫性のない死亡率スコアリング。同じ人が死亡率を得点することを確認するか、チーム全体で一貫して使用される明確なプロトコルを開発します。ブラインドスコアリングを使用して、死亡率スコアリングの偏りを減らします。
選別トレイの表面に付着している昆虫:
アセトンは、ペトリ皿などのこのプロトコルで使用されるプラスチックに反応します。ペトリ皿または同様のプラスチック表面にアセトンを使用すると、試料が表面に付着する可能性があります。この付着は、仕分けトレイに計量紙をライニングするか、非プラスチックの仕分けトレイを使用することで回避できます。さらに、選別トレイや保持カップ内のプラスチックの表面の結露は、結露に昆虫が付着したり、試料が寒すぎて表面に凍結する可能性があります。ノックダウン方式を調整して結露を低減し、試料が冷たくなったり凍りついたりするのを防ぎます(例:計量紙を試料とプラスチック選別トレイの間に配置します)。
R 分析エラー:
死亡率データが収集されると、分析中にさまざまな合併症が発生する可能性があります。R コードがデータ ファイルのアクションを完了できない最も一般的な理由は、データ形式がコードと一致しないことです (列見出しや空のセルなど)。より深刻な合併症が発生した場合は、Rstudio35に組み込まれているRヘルプページを参照してください。
上記の局所適用方法の制限:
局所適用法による殺虫剤吸収は、自然曝露を模倣しない:
一次体への局所適用は、殺虫剤吸収の自然な方法ではない。野外では、昆虫は、腹面上の急速な曝露ではなく、小さなエアロゾル粒子47、48を介して、殺虫剤処理された表面または翼に接触している時間にわたって、主に脚を通して殺虫剤を吸収する。しかし、既知の殺虫剤用量の直接適用は、遺伝的および進化的研究または空間または時間にわたる殺虫剤感受性の比較に必要な殺虫剤に対する表現型応答を正確に確立する。したがって、このアプローチは、技術的抵抗の試験には有益であるが、実用的な抵抗(フィールド設定15における実際の介入ツールの有効性)を直接測定するものではない。しかし、現在の標準的な方法(例えば、WHOチューブ試験およびCDCボトルバイオアッセイ)も、現場での殺虫剤曝露を(すなわち、曇らせることによって)捕捉または模倣することができないことに注意することが重要です。
局所適用アッセイは、接触吸収殺虫剤のみを評価することができる:
この方法は、殺虫剤の接触および吸収を介して作用する殺虫剤を対象としており、魅力的な毒性糖餌49において一般的に使用されるホウ酸などの経口殺虫剤と共に使用するためのものではない。
この方法の意義:
局所適用法は、致死量(濃度ではない)を計算し、技術的(実用的ではない)耐性を測定することによって、殺虫剤バイオアッセイのための十分に確立された標準を拡張する15。以下に、既存の殺虫剤感受性アッセイに対するこの方法の長所と短所を示します。
致死量計算:
この方法は、CDCおよびWHOバイオアッセイが判別用量11を確立するために使用する致死濃度ではなく、殺虫剤の致死用量を決定する。致死量は、死亡率を引き出すことが知られている殺虫剤の定量化された量であるため、より有意義である。対照的に、致死濃度は、生物が実際にどれだけの殺虫剤を獲得するかを考慮しない。致死量計算を使用すると、性別またはサイズ依存の感受性プロファイル間の差をより正確に観察および定量化できるため、この測定はさらに汎用性が高くなります。
技術的抵抗:
この方法は、標準化された制御された環境下で測定される抵抗である技術的抵抗を評価します。このような測定は、殺虫剤耐性の広がりの監視に適しており、表現型耐性を潜在的なマーカー15と結びつけるのに適している。局所適用バイオアッセイから生じる死亡率の変動が減少するため、新しい耐性マーカーのより優れた同定が可能になります。しかしながら、殺虫剤の蚊への不自然な曝露のために、このアッセイは、特定の集団における特定の介入の有効性の推定には適していない。このような実用的な抵抗の測定には他のアッセイが必要である15。
試料の適応性:
この方法は、作物害虫(例えば、コロラド・ポテト・ビートル)、ハウス・ペスト(例えば、ゴキブリおよびトコジラミ)、または花粉媒介者(例えば、ミツバチ)などの他の重要な節足動物に対して、ノックダウンアプローチおよび/または殺虫剤の用量、体積、および/または濃度(上述のように)を単純な変更で実施することができる。適応性の容易さは、異なる研究分野にわたる殺虫剤耐性研究を類推するのに役立ちます。検体の50%を殺す致死濃度(LC50 )の代わりにLD50値を使用することで、種間で正確な比較が可能になります。
費用:
CDCボトルバイオアッセイおよびWHOチューブ試験と同様に、局所適用アッセイを実行するためのコストは最小限に抑えられます( 材料表を参照)。重要な機器は、シリンジ(約70ドル)とディスペンサー(約100ドル)で、アッセイ間で再利用可能です。
必要な試料の数:
局所適用アッセイカップごとに最低20〜25検体を使用する必要があります。実験ごとに最低5つの殺虫剤濃度を試験することが推奨され、手順には最低3回の反復が推奨される。全体として、これは、WHOチューブ試験またはCDCボトルバイオアッセイを使用して耐性強度試験を実行するために必要な検体の数に匹敵する、完全な試験に必要な最低300〜375検体をもたらす。しかし、局所適用バイオアッセイで変動性の低減が達成された場合、同じ数の検体が空間または時間にわたって感受性データを比較するためのより多くの統計的検出力につながる可能性があります。
The authors have nothing to disclose.
この研究は、米国国立科学財団からSHへのCAREER賞(受賞番号2047572)によって支援されました。我々は、ショウジョウバエの飼育と局所適用アッセイの準備におけるダミアン・リベラの支援、ウィスコンシン大学マディソン校のガネツキー博士のカントンSショウジョウバエ株の共有、ロックフェラー株の共有のための疾病管理予防センター、IICCアイソリン株の共有のための米国農務省医療農業獣医昆虫学センターに感謝する。 図 1 は、 BioRender.com を使用して作成されました。
1.5 mL microcentrifuge tubes | Thomas Scientific | 20A00L068 | Acetone aliquot storage |
1.5 mL screw cap tubes | Thomas Scientific | 1182K23 | Insecticide dilution storage |
15 mL conical tubes | VWR | 339651 | Insecticide dilution storage |
20 mL glass scintillation vials | Fisher Scientific | 0334125D | Fruit fly weighing |
25 μL syringe | Fisher Scientific | 14815288 | Topical applicator |
Acetone | Fisher Scientific | AC423240040 | ACS 99.6%, 4 L |
Aedes aegypti (IICC strain) | USDA CMAVE | NA | Insecticide resistant |
Aedes aegypti (Rockefeller strain) | CDC | NA | Insecticide susceptible |
Analytical scale | Fisher Scientific | 14-557-409 | Precision up to 0.1 mg |
Aspirator | Amazon | 6.49986E+11 | Mosquito collection device |
Bench paper | VWR | 89126-794 | Place under workspace |
Cotton swabs | Amazon | B092S8JVQN | Use for sorting insects |
Cotton wool balls | Amazon | B0769MKZWT | Use for sucrose solution |
Dispenser | Fisher Scientific | 1482225 | Repeater pipettor |
Drosophila melanogaster (Canton-S strain) | University of Wisconsin-Madison | NA | Insecticide susceptible |
Fine-tipped paint brushes | Amazon | B07KT2X1BK | Use for sorting insects |
Fruit fly stock bottles | Fisher Scientific | AS355 | Use for rearing and sorting fruit flies |
Hand-held CO2 dispenser | Fisher Scientific | NC1710679 | Use for knocking down insects |
Holding cups | Amazon | B08DXG7V1S | Clear plastic |
Ice pack | Amazon | B08QDWMMW5 | Use for knocking down fruit flies |
Ice trays | Amazon | 9301085269 | Use for knocking down insects |
Insect forceps | Amazon | B07B4767WR | Insect forceps |
Insecticide | Sigma-Aldrich Inc | 45423-250MG | Deltamethrin |
Labeling stickers | Amazon | B07Q4X9GWX | 3/4" Color dot stickers |
Labeling tape | Amazon | B00X6A1GYK | White tape |
Netting | Amazon | B07F2PHHWV | Use for covering holding cups and insect handling tent |
Petri dishes | Fisher Scientific | FB0875712H371 | 100 mm x 15 mm |
PVC Pipe | Lowe’s | 23971 | Insect handling tent materials |
Rubber bands | Amazon | B00006IBRU | Use for securing mesh/net on cups |
Sucrose | Amazon | B01J78INO0 | Granulated White Sugar |
Weighing paper | VWR | 12578-165 | 4" x 4" |