Este protocolo presenta un método fácil y barato de formar esferas bacterianas de celulosa (BC). Este biomaterial puede funcionar como un medio de encapsulación para materiales sólidos, incluyendo biocarbón, esferas de polímeros y residuos mineros.
Las esferas de celulosa bacteriana (BC) se han investigado cada vez más desde la popularización de BC como un material nuevo. Este protocolo presenta un método asequible y simple para la producción de esferas BC. Además de producir estas esferas, también se ha identificado un método de encapsulación para partículas sólidas. Para producir esferas bc, el agua, el té negro, el azúcar, el vinagre y el cultivo bacteriano se combinan en un matraz desconcertado y el contenido se agita. Después de determinar las condiciones de cultivo adecuadas para la formación de esferas BC, su capacidad para encapsular partículas sólidas se probó utilizando biocarbón, perlas de polímero y desechos de minas. Las esferas se caracterizaron utilizando el software ImageJ y el análisis gravimétrico térmico (TGA). Los resultados indican que las esferas con 7,5 mm de diámetro se pueden hacer en 7 días. La adición de varias partículas aumenta el rango de tamaño promedio de las cápsulas BC. Las esferas encapsularon 10 – 20% de su masa seca. Este método muestra la producción de esferas de bajo costo y la encapsulación que es posible con materiales fácilmente obtenibles. Las esferas BC se pueden utilizar en el futuro como una ayuda para la eliminación de contaminantes, recubrimiento de fertilizantes de liberación controlada o enmienda del suelo.
La celulosa bacteriana (BC) se ha destacado por su uso potencial en la industria debido a su resistencia mecánica, alta pureza y cristalinidad, capacidades de retención de agua e intrincada estructura de fibra1,2,3,4. Estas características hacen de BC un biomaterial favorable para una variedad de aplicaciones, incluyendo usos biomédicos, de procesamiento de alimentos y de remediación ambiental1. La formación de una película BC se puede hacer con cultivos de un solo organismo o cultivos mixtos como los utilizados para la kombucha5,una bebida de té fermentada. La kombucha cervecera se basa en un “cultivo simbiótico de bacterias y levaduras”, comúnmente conocido como SCOBY. Usando esta cultura simbiótica de organismos, se emplea una técnica similar para crear esferas BC. Este biomaterial puede emplearse para ayudar a aislar los contaminantes ambientales y anclar las enmiendas agrícolas como el biocarbón para lograr una producción de cultivos más eficiente.
La literatura anterior ha discutido cómo las características de BC producidas en condiciones agitadas se comparan con BC producidas en una cultura estacionaria. Un cultivo estacionario da como resultado una película que se forma en la interfaz líquido-aire, mientras que un cultivo sacudido resulta en partículas, hebras y esferas BC variables suspendidas dentro del líquido6. Muchos estudios han hecho referencia a la afirmación de que la producción comercial de BC es más factible en las condiciones dinámicas6,7,proporcionando la justificación para la aplicación del método de este trabajo. Además, se han llevado a cabo varias investigaciones sobre la estructura y las propiedades de las esferas de BC. Toyosaki et al.6 compararon frascos erlenmeyer desconcertados y de paredes lisas en su agitada producción de BC. Un estudio realizado por Hu y Catchmark4 determinó las condiciones para las esferas BC que se utilizaron como directrices para el proceso de producción actual de la esfera BC, y sus resultados indican que el tamaño de la esfera no continúa aumentando después de 60 horas. Una revisión de la producción de BC por Mohammad et al.1 indica que sacudir la cultura de BC asegura incluso el suministro y la distribución de oxígeno, que es necesario para el crecimiento exitoso de BC. Holland et al.8 han estudiado la cristalinidad y la estructura química de BC utilizando difracción de rayos X y espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier. Se supone que las cápsulas bc exhibirán características similares y futuras investigaciones investigarán las propiedades estructurales. Los estudios también han explorado los efectos beneficiosos del uso de BC para producir biocompuestos mejorados. Utilizando resina epoxi como base, los investigadores han demostrado que la adición de BC mejora las características del material como la vida útil de la fatiga, la tenacidad a la fractura y la resistencia a la tracción yla flexión 9,10. Como lo muestran las investigaciones pasadas y actuales, muchos están interesados en comercializar el uso de BC.
Muchos investigadores han investigado la celulosa bacteriana en sistemas de liberación controlada, y el método descrito aquí genera cápsulas que podrían utilizarse como sistemas de liberación controlada. Gran parte de esta investigación se centra en la liberación controlada en el campo biomédico, así como en cierta exploración en la administración de fertilizantes de liberación controlada (CRF). De acuerdo con el éxito de la liberación controlada de BC de amoxicilina11,lidocaína12e ibuprofeno13,BC puede exhibir características de administración similares con otras sustancias, como un fertilizante peletizado. Una visión general de los CRF de Shaviv y Mikkelsen14 reconoce que los CRF son más eficientes, ahorran mano de obra y, en general, causan menos degradación ambiental que la aplicación de fertilizantes convencionales. La celulosa bacteriana puede funcionar como un material encapsulante favorable para los CRF. Los fertilizantes pueden lixiviarse fuera de las membranas de BC o descargarse como biodegrados de BC15,16. La alta capacidad de hinchazón de agua de BC también puede actuar como una enmienda beneficiosa del suelo17,18,19 porque tanto los nutrientes del fertilizante como la humedad pueden liberarse en el suelo a través de la aplicación de esferas de BC. Con estos rasgos, un CRF formado por encapsulación de esfera BC puede tener una ventaja sobre otros materiales de recubrimiento de fertilizantes que podrían tener efectos negativos durante sus etapas de producción y eliminación. La adaptación de BC en un recubrimiento de fertilizantes puede mejorar aún más las tecnologías de CRF. Al reducir la tasa de liberación de fertilizantes, los cultivos tendrán tiempo suficiente para absorber el fertilizante y evitar el exceso de escorrentía en cuerpos de agua, reduciendo así la eutrofización y las zonas no oxigenadas. Se han preparado y puesto a prueba fertilizantes similares de liberación lenta utilizando recubrimientos poliméricos20.
A diferencia de los protocolos descritos en investigaciones anteriores, este se centra en la producción uniforme y cohesiva de esferas en lugar de un alto rendimiento de celulosa. Por otra parte, la encapsulación bc de otros sólidos se ha estudiado con películas de celulosa, pero no esferas21. Al ampliar la investigación sobre las esferas de celulosa bacteriana, se pueden dar más pasos para producir BC comercialmente, lo que es beneficioso debido a las características ambientalmente seguras de BC. Este método de fabricación de esferas BC utiliza ingredientes culinarios baratos y fácilmente disponibles. Después del ensamblaje inicial, las esferas BC comienzan a formarse dentro de los 2 días sin interferencias. La producción de esferas bc a través de esta estrategia requiere poco espacio y tiene un subproducto comestible, el té fermentado ‘kombucha’. Las técnicas de encapsulación mencionadas en otros estudios incluyen recubrimientos formados mediante la técnica de inversión de fase22,23,formación de matriz24,secado por aspersión25,y encapsulación directa durantela síntesis 26. El método de encapsulación directa descrito en este manuscrito es útil para aquellos que desean un proceso fácil y económico que utilice materiales fácilmente disponibles.
A través de esta investigación, se creó un protocolo exitoso para la producción y encapsulación de esferas BC. Las esferas BC pueden encapsular partículas sólidas de biocarbón, relaves mineros y microperlas de poliestireno dentro de sus estructuras individuales. Aunque todavía no se utiliza ampliamente en la industria, BC es un material práctico, hecho de manera sostenible y natural que podría usarse para futuras aplicaciones.
Este protocolo describe los métodos de producción y encapsulación de la esfera BC que son fáciles de conducir y rentables. A través de varios ajustes al protocolo original, se ha identificado un proceso adecuado. Se deben seguir medidas críticas para garantizar esferas viables. Todos los ingredientes involucrados en la formación de BC juegan un papel clave en la salud y durabilidad de las esferas. La sacarosa alimenta a los organismos, el té aporta nitrógeno y el vinagre baja el pH a condiciones óptimas para pr…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo es una continuación de un proyecto del Programa de Mentoría asistente de investigación de Montana Tech por Adolfo Martínez, Catherine Mulholland, Tyler Somerville y Laurel Bitterman. La investigación fue patrocinada por la Fundación Nacional de Ciencias en el marco de la Subvención No. OIA-1757351 y el Laboratorio de Investigación del Ejército del Comando de Desarrollo de Capacidades de Combate (Acuerdo de Cooperación Número W911NF-15-2-0020). Todas las opiniones, hallazgos y conclusiones, o recomendaciones expresadas en este material son las de los autores y no reflejan necesariamente los puntos de vista de la Fundación Nacional de Ciencias o el Laboratorio de Investigación del Ejército. También nos gustaría agradecer a Amy Kuenzi, Lee Richards, Katelyn Alley, Chris Gammons, Max Wohlgenant y Kris Bosch por sus contribuciones.
100 mL graduated cylinder | |||
1000 mL beaker | |||
25 mL graduated cylinder | |||
250 mL Erlenmeyer baffled flask | Chemglass | CLS-2040-02 | |
500 mL beaker | |||
Balance | |||
Biochar | Ponderosa pine heat treated under argon gas, heated at 15 °C per minute to 800 °C | ||
Black tea | |||
Deionized water | |||
Distilled white vinegar | |||
Elastic band | |||
Microbial starter culture | Cultures for Health | ||
Mine waste | Collected from Butte, MT: 46.001978,-112.582465. Mine waste contains soil and metals originating from past copper mining. Mn, Si, Ca, Al, and Fe were the five most prevalent elements measured in the mine waste through x-ray diffraction. | ||
Mortar and pestle | |||
Orbital shaker | Used various brands | ||
Paper towel | |||
Polystyrene microbeads | Polybead | 17138 | 3 micron diameter |
Stir rod | |||
Sucrose | |||
Tea kettle | |||
TGA | TA Instruments | TA Q500 | 400 °C/min to 800 °C, 100 mL/min N2 |
Thermometer | |||
XRF Analyzer | ThermoFisher Scientific | 10131166 |