Summary

Sfere di cellulosa batterica che incapsulano materiali solidi

Published: February 26, 2021
doi:

Summary

Questo protocollo presenta un metodo semplice ed economico per formare sfere di cellulosa batterica (BC). Questo biomateriale può funzionare come mezzo di incapsulamento per materiali solidi, tra cui biochar, sfere polimeriche e rifiuti di miniera.

Abstract

Le sfere di cellulosa batterica (BC) sono state sempre più ricercate sin dalla popolarità di BC come nuovo materiale. Questo protocollo presenta un metodo semplice e conveniente per la produzione di sfere BC. Oltre a produrre queste sfere, è stato identificato anche un metodo di incapsulamento per le particelle solide. Per produrre sfere BC, acqua, tè nero, zucchero, aceto e coltura batterica sono combinati in un pallone sconcertato e il contenuto è agitato. Dopo aver determinato le condizioni di coltura adeguate per la formazione della sfera BC, la loro capacità di incapsulare particelle solide è stata testata utilizzando biochar, perline polimeriche e rifiuti di miniera. Le sfere sono state caratterizzate utilizzando il software ImageJ e l’analisi gravimetrica termica (TGA). I risultati indicano che le sfere con diametri di 7,5 mm possono essere realizzate in 7 giorni. L’aggiunta di varie particelle aumenta la gamma di dimensioni medie delle capsule BC. Le sfere incapsulano il 10-20% della loro massa secca. Questo metodo mostra la produzione e l’incapsulamento di sfere a basso costo che è possibile con materiali facilmente ottenibili. Le sfere BC possono essere utilizzate in futuro come ausilio per la rimozione dei contaminanti, rivestimento di fertilizzanti a rilascio controllato o modifica del suolo.

Introduction

La cellulosa batterica (BC) è stata nota per il suo potenziale uso industriale grazie alla sua resistenza meccanica, all’elevata purezza e cristallinità, alle capacità di ritenzione idrica e all’intricata struttura infibra 1,2,3,4. Queste caratteristiche rendono BC un biomateriale favorevole per una varietà di applicazioni, tra cui usi biomedici, di lavorazione degli alimenti e di bonifica ambientale1. La formazione di un film BC può essere fatta con colture di singoli organismi o colture miste come quelle utilizzate per kombucha5,una bevanda al tè fermentata. Brewing kombucha si basa su una “Cultura simbiotica di batteri e lieviti”, comunemente nota come SCOBY. Usando questa cultura simbiotica degli organismi, una tecnica simile viene utilizzata per creare sfere BC. Questo biomateriale può essere utilizzato per aiutare a isolare i contaminanti ambientali e ancorare emendamenti agricoli come biochar per ottenere una produzione agricola più efficiente.

La letteratura precedente ha discusso di come le caratteristiche di BC prodotte in condizioni agitate si confrontano con bc prodotto in una cultura stazionaria. Una coltura stazionaria si traduce in un film che si forma all’interfaccia liquido-aria, mentre una coltura scossa si traduce in particelle, filamenti e sfere BC variabili sospesi all’interno delliquido 6. Molti studi hanno fatto riferimento all’affermazione che la produzione commerciale di BC è più fattibile nellecondizioni dinamiche 6,7, fornendo motivazioni per l’applicazione del metodo di questo documento. Inoltre, sono state condotte varie indagini sulla struttura e le proprietà delle sfere BC. 6 hanno confrontato le fiasche Erlenmeyer sconcertate e dalle pareti lisce nella loro agitata produzione BC. Uno studio di Hu e Catchmark4 determinò le condizioni per le sfere BC che furono usate come linee guida per l’attuale processo di produzione della sfera BC, e i loro risultati indicano che la dimensione della sfera non continua ad aumentare dopo 60 ore. Una revisione della produzione bc da parte di Mohammad etal. Holland et al. Si presume che le capsule BC mostreranno caratteristiche simili e la ricerca futura studierà le proprietà strutturali. Gli studi hanno anche esplorato gli effetti benefici dell’uso di BC per produrre biocompositi migliorati. Utilizzando la resina epossidica come base, i ricercatori hanno dimostrato che l’aggiunta di BC migliora le caratteristiche del materiale come la durata della fatica, la tenacità alla frattura e la resistenza alla trazione ealla flessione 9,10. Come dimostrato dalla ricerca passata e attuale, molti sono interessati a commercializzare l’uso bc.

Molti ricercatori hanno studiato la cellulosa batterica nei sistemi a rilascio controllato, e il metodo qui descritto genera capsule che potrebbero essere utilizzate come sistemi a rilascio controllato. Gran parte di questa ricerca si concentra sul rilascio controllato in campo biomedico, così come alcune esplorazioni nella somministrazione di fertilizzanti a rilascio controllato (CRF). Sulla base del successo del rilascio controllato da parte di BC di amoxicillina11,lidocaina12e ibuprofene13,BC può presentare caratteristiche di consegna simili con altre sostanze, come un fertilizzante pellettizzato. Una panoramica dei CRF di Shaviv e Mikkelsen14 riconosce che i CRF sono più efficienti, risparmiano manodopera e generalmente causano meno degrado ambientale rispetto all’applicazione convenzionale di fertilizzanti. La cellulosa batterica può funzionare come materiale incapsulante favorevole per i CRF. I fertilizzanti possono lisciviare dalle membrane BC o scaricarsi come biodegradi BC15,16. L’elevata capacità di gonfiore dell’acqua di BC può anche fungere da utile emendamento del suolo 17,18,19 perchésia i nutrienti fertilizzanti che l’umidità possono rilasciarsi nel terreno attraversol’applicazionedi sfere BC. Con questi tratti, un CRF formato dall’incapsulamento della sfera BC può avere un vantaggio rispetto ad altri materiali di rivestimento dei fertilizzanti che potrebbero avere effetti negativi durante le loro fasi di produzione e smaltimento. L’adattamento di BC in un rivestimento di fertilizzanti può migliorare ulteriormente le tecnologie CRF. Abbassando il tasso di rilascio dei fertilizzanti, le colture avranno tempo sufficiente per assumere il fertilizzante e prevenire l’eccesso di deflusso nei corpi idrici, riducendo così l’eutrofizzazione e le zone nonossigenate. Simili fertilizzanti a lento rilascio sono stati preparati e pilotati utilizzando rivestimenti polimerici20.

A differenza dei protocolli delineati nelle ricerche precedenti, questo si concentra sulla produzione uniforme e coesa della sfera piuttosto che sull’elevata resa di cellulosa. Inoltre, l’incapsulamento BC di altri solidi è stato studiato con pellicole di cellulosa, ma noncon sfere 21. Espandendo la ricerca sulle sfere di cellulosa batterica, è possibile compiere ulteriori passi per produrre BC commercialmente, il che è vantaggioso a causa delle caratteristiche sicure per l’ambiente di BC. Questo metodo di fabbricazione della sfera BC utilizza ingredienti culinari economici e prontamente disponibili. Dopo l’assemblaggio iniziale, le sfere BC iniziano a formarsi entro 2 giorni senza interferenze. Produrre sfere BC attraverso questa strategia richiede poco spazio e ha un prodotto di base commestibile, il tè fermentato “kombucha”. Le tecniche di incapsulamento menzionate in altri studi includono rivestimenti formati attraverso la tecnica di inversione difase 22,23,formazione dellamatrice 24,essiccazione a spruzzo25e incapsulamento diretto durante lasintesi 26. Il metodo di incapsulamento diretto delineato in questo manoscritto è utile per coloro che desiderano un processo facile ed economico che utilizza materiali prontamente disponibili.

Attraverso questa ricerca, è stato creato un protocollo di successo per la produzione e l’incapsulamento della sfera BC. Le sfere BC possono incapsulare particelle solide di biochar, code di miniera e microperline di polistirolo all’interno delle loro singole strutture. Sebbene non sia ancora ampiamente utilizzato nell’industria, BC è un materiale pratico, realizzato in modo sostenibile e naturale che potrebbe essere utilizzato per applicazioni future.

Protocol

1. Creazione e manutenzione di coltura di starter di cellulosa batterica Ottenere una coltura iniziale di cellulosa batterica, circa 50 g, sotto forma di SCOBY. Può essere acquistato commercialmente (ad esempio, da Cultures for Health). Posizionare lo SCOBY in un becher da 1 L, coperto con un tovagliolo di carta. Far bollire 700 mL di acqua deionizzata, trasferirla su un recipiente separato da quello contenente lo SCOBY e aggiungere 85 g di saccarosio. Una volta sciolto il saccarosio, aggiu…

Representative Results

Le sfere BC hanno il tasso di crescita più rapido durante le prime 48 ore di cultura (Figura 2). La figura 2 mostra anche come le sfere tendano a raggiungere una dimensione media massima e quindi rimangano costanti. In questo esperimento, le sfere raggiunsero un diametro medio di 7,5 ± 0,2 mm. Sebbene le sfere BC non si deteriorero mai completamente entro il periodo di crescita di 10 giorni, hanno iniziato a formare viticci che si estendono dal corpo principal…

Discussion

Questo protocollo delinea i metodi di produzione e incapsulamento della sfera BC che sono facili da condurre ed efficaci in termini di costi. Attraverso vari adeguamenti al protocollo originale, è stato individuato un processo adeguato. Occorre seguire misure critiche per garantire sfere vitali. Tutti gli ingredienti coinvolti nella formazione BC svolgono un ruolo chiave nella salute e nella durata delle sfere. Il saccarosio nutre gli organismi, il tè fornisce azoto e l’aceto abbassa il pH a condizioni ottimali per pre…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è la continuazione di un progetto montana tech research assistant mentorship program di Adolfo Martinez, Catherine Mulholland, Tyler Somerville e Laurel Bitterman. La ricerca è stata sponsorizzata dalla National Science Foundation nell’ambito di Grant No. OIA-1757351 e il Combat Capabilities Development Command Army Research Laboratory (Cooperative Agreement Number W911NF-15-2-0020). Eventuali opinioni, risultati e conclusioni, o raccomandazioni espresse in questo materiale sono quelle degli autori e non riflettono necessariamente le opinioni della National Science Foundation o dell’Army Research Lab. Vorremmo anche ringraziare Amy Kuenzi, Lee Richards, Katelyn Alley, Chris Gammons, Max Wohlgenant e Kris Bosch per i loro contributi.

Materials

100 mL graduated cylinder
1000 mL beaker
25 mL graduated cylinder
250 mL Erlenmeyer baffled flask Chemglass CLS-2040-02
500 mL beaker
Balance
Biochar Ponderosa pine heat treated under argon gas, heated at 15 °C per minute to 800 °C
Black tea
Deionized water
Distilled white vinegar
Elastic band
Microbial starter culture Cultures for Health
Mine waste Collected from Butte, MT: 46.001978,-112.582465. Mine waste contains soil and metals originating from past copper mining. Mn, Si, Ca, Al, and Fe were the five most prevalent elements measured in the mine waste through x-ray diffraction.
Mortar and pestle
Orbital shaker Used various brands
Paper towel
Polystyrene microbeads Polybead 17138 3 micron diameter
Stir rod
Sucrose
Tea kettle
TGA TA Instruments TA Q500 400 °C/min to 800 °C, 100 mL/min N2
Thermometer
XRF Analyzer ThermoFisher Scientific 10131166

References

  1. Mohainin Mohammad, S., Abd Rahman, N., Sahaid Khalil, M., Rozaimah Sheikh Abdullah, S. An Overview of Biocellulose Production Using Acetobacter xylinum Culture. Advances in Biological Research. 8 (6), 307-313 (2014).
  2. Dufresne, A. Bacterial cellulose. Nanocellulose. , 125-146 (2017).
  3. Czaja, W., Romanovicz, D., Brown, R. M. Structural investigations of microbial cellulose produced in stationary and agitated culture. Cellulose. 11 (3-4), 403-411 (2004).
  4. Hu, Y., Catchmark, J. M. Formation and characterization of spherelike bacterial cellulose particles produced by acetobacter xylinum JCM 9730 strain. Biomacromolecules. 11 (7), 1727-1734 (2010).
  5. Goh, W. N., Rosma, A., Kaur, B., Fazilah, A., Karim, A. A., Bhat, R. Microstructure and physical properties of microbial cellulose produced during fermentation of black tea broth (kombucha). International Food Research Journal. 19 (1), 153-158 (2012).
  6. Toyosaki, H., Naritomi, T., Seto, A., Matsuoka, M., Tsuchida, T., Yoshinaga, F. Screening of Bacterial Cellulose-producing Acetobacter Strains Suitable for Agitated Culture. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 59 (8), 1498-1502 (1995).
  7. Shi, Z., Zhang, Y., Phillips, G. O., Yang, G. Utilization of bacterial cellulose in food. Food Hydrocolloids. 35, 539-545 (2014).
  8. Holland, M. C., Eggensperger, C. G., Giagnorio, M., Schiffman, J. D., Tiraferri, A., Zodrow, K. R. Facile Postprocessing Alters the Permeability and Selectivity of Microbial Cellulose Ultrafiltration Membranes. Environmental Science and Technology. 54 (20), 13249-13256 (2020).
  9. Le Hoang, S., Vu, C. M., Pham, L. T., Choi, H. J. Preparation and physical characteristics of epoxy resin/ bacterial cellulose biocomposites. Polymer Bulletin. 75 (6), 2607-2625 (2018).
  10. Vu, C. M., Nguyen, D. D., Sinh, L. H., Pham, T. D., Pham, L. T., Choi, H. J. Environmentally benign green composites based on epoxy resin/bacterial cellulose reinforced glass fiber: Fabrication and mechanical characteristics. Polymer Testing. 61, 150-161 (2017).
  11. Pavaloiu, R. D., Stoica, A., Stroescu, M., Dobre, T. Controlled release of amoxicillin from bacterial cellulose membranes. Central European Journal of Chemistry. 12 (9), 962-967 (2014).
  12. Trovatti, E., et al. Biocellulose membranes as supports for dermal release of lidocaine. Biomacromolecules. 12 (11), 4162-4168 (2011).
  13. Trovatti, E., et al. Bacterial cellulose membranes applied in topical and transdermal delivery of lidocaine hydrochloride and ibuprofen: In vitro diffusion studies. International Journal of Pharmaceutics. 435 (1), 83-87 (2012).
  14. Shaviv, A., Mikkelsen, R. L. Controlled-release fertilizers to increase efficiency of nutrient use and minimize environmental degradation – A review. Fertilizer Research. 35 (1-2), 1-12 (1993).
  15. Eggensperger, C. G., et al. Sustainable living filtration membranes. Environmental Science and Technology Letters. 7 (3), 213-218 (2020).
  16. Schröpfer, S. B., et al. Biodegradation evaluation of bacterial cellulose, vegetable cellulose and poly (3-hydroxybutyrate) in soil. Polimeros. 25 (2), 154-160 (2015).
  17. Orts, W. J., Glenn, G. M. Reducing soil erosion losses with small applications of biopolymers. ACS Symposium Series. 723, 235-247 (1999).
  18. Mohite, B. V., Patil, S. V. A novel biomaterial: Bacterial cellulose and its new era applications. Biotechnology and Applied Biochemistry. 61 (2), 101-110 (2014).
  19. Mikkelsen, R. L. Using hydrophilic polymers to control nutrient release. Fertilizer Research. 38 (1), 53-59 (1994).
  20. Du, C. W., Zhou, J. M., Shaviv, A. Release characteristics of nutrients from polymer-coated compound controlled release fertilizers. Journal of Polymers and the Environment. 14 (3), 223-230 (2006).
  21. Serafica, G., Mormino, R., Bungay, H. Inclusion of solid particles in bacterial cellulose. Applied Microbiology and Biotechnology. 58 (6), 756-760 (2002).
  22. Tomaszewska, M., Jarosiewicz, A. Use of polysulfone in controlled-release NPK fertilizer formulations. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (16), 4634-4639 (2002).
  23. González, M. E., et al. Evaluation of biodegradable polymers as encapsulating agents for the development of a urea controlled-release fertilizer using biochar as support material. Science of the Total Environment. 505, 446-453 (2015).
  24. Shavit, U., Shaviv, A., Shalit, G., Zaslavsky, D. Release characteristics of a new controlled release fertilizer. Journal of Controlled Release. 43 (2-3), 131-138 (1997).
  25. Kolakovic, R., Laaksonen, T., Peltonen, L., Laukkanen, A., Hirvonen, J. Spray-dried nanofibrillar cellulose microparticles for sustained drug release. International Journal of Pharmaceutics. 430 (1-2), 47-55 (2012).
  26. Zaharia, A., et al. Bacterial cellulose-poly(acrylic acid-: Co-N, N ′-methylene-bis-acrylamide) interpenetrated networks for the controlled release of fertilizers. RSC Advances. 8 (32), 17635-17644 (2018).
  27. Peterson, J. D., Vyazovkin, S., Wight, C. A. Kinetics of the thermal and thermo-oxidative degradation of polystyrene, polyethylene and poly(propylene). Macromolecular Chemistry and Physics. 202 (6), 775-784 (2001).
  28. Goh, W. N., Rosma, A., Kaur, B., Fazilah, A., Karim, A. A., Bhat, R. Fermentation of black tea broth (kombucha): I. effects of sucrose concentration and fermentation time on the yield of microbial cellulose. International Food Research Journal. 19 (1), 109-117 (2012).
  29. Zhu, H., Jia, S., Yang, H., Jia, Y., Yan, L., Li, J. Preparation and application of bacterial cellulose sphere: A novel biomaterial. Biotechnology and Biotechnological Equipment. 25 (1), 2233-2236 (2011).
  30. Nguyen, V. T., Flanagan, B., Gidley, M. J., Dykes, G. A. Characterization of cellulose production by a Gluconacetobacter xylinus strain from Kombucha. Current Microbiology. 57 (5), 449-453 (2008).
  31. Costa, A. F. S., Almeida, F. C. G., Vinhas, G. M., Sarubbo, L. A. Production of bacterial cellulose by Gluconacetobacter hansenii using corn steep liquor as nutrient sources. Frontiers in Microbiology. 8, 1-12 (2017).
  32. Watanabe, K., Tabuchi, M., Morinaga, Y., Yoshinaga, F. Structural features and properties of bacterial cellulose produced in agitated culture. Cellulose. 5 (3), 187-200 (1998).

Play Video

Cite This Article
Bitterman, L. A., Martinez, A., Mulholland, C., Somerville, T., Prieto-Centurion, D., Zodrow, K. R. Bacterial Cellulose Spheres that Encapsulate Solid Materials. J. Vis. Exp. (168), e62286, doi:10.3791/62286 (2021).

View Video