Summary

Katı Malzemeleri Kapsülleyen Bakteriyel Selüloz Küreler

Published: February 26, 2021
doi:

Summary

Bu protokol, bakteriyel selüloz (BC) küreleri oluşturmak için kolay ve ucuz bir yöntem sunar. Bu biyomalzeme, biyoşarç, polimer küreler ve maden atıkları da dahil olmak üzere katı malzemeler için bir kapsülleme aracı olarak işlev görür.

Abstract

Bakteriyel selüloz (BC) küreleri, M.Ö.’nün yeni bir materyal olarak popülerleşmesinden bu yana giderek daha fazla araştırılmaktadır. Bu protokol BC küre üretimi için uygun fiyatlı ve basit bir yöntem sunar. Bu kürelerin üretilmesinin yanı sıra katı parçacıklar için bir kapsülleme yöntemi de tanımlanmıştır. BC küreleri üretmek için su, siyah çay, şeker, sirke ve bakteri kültürü şaşkın bir şişede birleştirilir ve içeriği tedirgin edilir. BC küre oluşumu için uygun kültür koşulları belirlendikten sonra, katı parçacıkları kapsülleme yetenekleri biyoşarç, polimer boncuklar ve maden atıkları kullanılarak test edildi. Küreler ImageJ yazılımı ve termal gravimetrik analiz (TGA) kullanılarak karakterize edildi. Sonuçlar, 7,5 mm çapında kürelerin 7 günde yapılabileceğini göstermektedir. Çeşitli parçacıklar eklemek BC kapsüllerinin ortalama boyut aralığını artırır. Küreler kuru kütlelerinin % 10-20’sini kaplar. Bu yöntem, kolayca elde edilebilen malzemelerle mümkün olan düşük maliyetli küre üretimini ve kapsüllemlerini gösterir. BC küreleri gelecekte kirletici kaldırma yardımı, kontrollü salınımlı gübre kaplaması veya toprak değişikliği olarak kullanılabilir.

Introduction

Bakteriyel selüloz (BC), mekanik mukavemeti, yüksek saflığı ve kristalitesi, su tutma yetenekleri ve karmaşık lif yapısı 1 , 2 ,3,4nedeniyle potansiyel endüstri kullanımı ile dikkat çekti. Bu özellikler BC’yi biyomedikal, gıda işleme ve çevresel iyileştirme kullanımları da dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar için elverişli bir biyomalzeme haline getirir1. Bir BC filminin oluşumu, fermente bir çay içeceği olan kombucha5için kullanılanlar gibi tek organizma kültürleri veya karışık kültürlerle yapılabilir. Kombucha demleme, yaygın olarak SCOBY olarak bilinen “Simbiyotik Bakteri ve Maya Kültürü”ne dayanır. Organizmaların bu simbiyotik kültürünü kullanarak, BC küreleri oluşturmak için benzer bir teknik kullanılır. Bu biyomalzeme, çevresel kirleticilerin izole edilmesine ve daha verimli mahsul üretimi elde etmek için biyoşarş gibi tarımsal değişikliklerin demirlemesine yardımcı olmak için kullanılabilir.

Önceki literatür, M.Ö.’nün tedirgin koşullarda üretilen özelliklerinin sabit bir kültürde üretilen BC ile karşılaştırıldığında nasıl olduğunu tartışmıştır. Sabit bir kültür, sıvı hava arayüzünde oluşan bir filmle sonuçlanırken, sarsılmış bir kültür, sıvı6içinde asılı olan çeşitli BC parçacıkları, iplikçikler ve kürelerle sonuçlanır. Birçok çalışma, BC’nin ticari üretiminin dinamik koşullarda daha uygulanabilir olduğu iddiasına atıfta bulundu6,7, bu makalenin yöntemini uygulamak için rasyonel sağlar. Ayrıca, BC kürelerinin yapısı ve özellikleri hakkında çeşitli araştırmalar yapılmıştır. Toyosaki ve ark.6, tedirgin BC üretimlerinde şaşkın ve pürüzsüz duvarlı Erlenmeyer şişelerini karşılaştırdı. Hu ve Catchmark4 tarafından yapılan bir çalışmada, mevcut BC küre üretim süreci için kılavuz olarak kullanılan BC küreleri için koşullar belirlendi ve sonuçları küre boyutunun 60 saat sonra artmaya devam etmediğini gösteriyor. Mohammad ve ark.1 tarafından BC üretiminin gözden geçirilmesi, BC kültürünün sarsılmasının, başarılı BC büyümesi için gerekli olan oksijen tedarikini ve dağıtımını bile sağladığını göstermektedir. Holland ve ark.8, X-ışını kırınımı ve Fourier transform kızılötesi spektroskopi kullanarak M.Ö.’nün kristalitesini ve kimyasal yapısını incelemiştir. BC kapsüllerinin benzer özellikler sergileyeceği ve gelecekteki araştırmaların yapısal özellikleri araştıracağı varsayılmaktadır. Çalışmalar ayrıca gelişmiş biyokompozitler üretmek için BC kullanmanın yararlı etkilerini de araştırmıştır. Epoksi-reçineyi baz olarak kullanan araştırmacılar, BC’nin eklenmesinin yorulma ömrü, kırılma tokluğu ve çekme ve bükülme mukavemeti9,10gibi malzeme özelliklerini geliştirdiğini göstermiştir. Geçmiş ve mevcut araştırmalarda gösterildiği gibi, birçoğu BC kullanımını ticarileştirmekle ilgilenmektedir.

Birçok araştırmacı kontrollü salınım sistemlerinde bakteriyel selülozu araştırdı ve burada açıklanan yöntem kontrollü salınım sistemleri olarak kullanılabilecek kapsüller üretiyor. Bu araştırmanın çoğu biyomedikal alanda kontrollü salınıma ve kontrollü salınımlı gübre (CRF) yönetiminde bazı keşiflere odaklanmıştır. BC’nin kontrollü amoksisilin salınımının başarısına dayanarak11, lidokrin12ve ibuprofen13, BC, peletlenmiş gübre gibi diğer maddelerle benzer teslimat özellikleri gösterebilir. Shaviv ve Mikkelsen14 tarafından CRF’lere genel bir bakış, CRF’lerin daha verimli olduğunu, işgücünden tasarruf ettiğini ve genellikle geleneksel gübre uygulamasına göre daha az çevresel bozulmaya neden olduğunu kabul eder. Bakteriyel selüloz CRF’ler için uygun bir kapsülleme malzemesi olarak çalışabilir. Gübreler BC membranlarından süzebilir veya BC biyobozunur15,16olarak deşarj olabilir. BC’nin yüksek su şişme kapasitesi de yararlı bir toprak değişikliği olarak işlev görebilebilir17,18,19 çünkü hem gübre besin maddeleri hem de nem BC kürelerinin uygulanması yoluyla toprağa salınabilir. Bu özelliklerle, BC küre kapsülleme tarafından oluşturulan bir CRF, üretim ve bertaraf aşamalarında olumsuz etkileri olabilecek diğer gübre kaplama malzemelerine göre avantajlı olabilir. BC’nin gübre kaplamasına uyarlanmış olarak uyarlanmış haline getirildirilebilir ve CRF teknolojileri daha da geliştirilebilir. Gübre salınım oranını düşürerek, mahsuller gübreyi almak ve su kütlelerine fazla akıntıyı önlemek için yeterli zamana sahip olacak ve böylece ötrofikasyonu veoksijen olmayan bölgeleri azaltacaktır. Benzer yavaş salınımlı gübreler, polimer kaplamalar kullanılarak hazırlanmış ve pilotlanmıştır20.

Önceki araştırmalarda belirtilen protokollerin aksine, bu yüksek selüloz verimi yerine tek tip, uyumlu küre üretimine odaklanmaktadır. Ayrıca, bc kapsülleme diğer katı madde selüloz filmler ile çalışılmıştır, ancak küreler21. Bakteriyel selüloz küreleri üzerindeki araştırma genişletilerek, BC’nin çevreye duyarlı özellikleri nedeniyle faydalı olan M.Ö.’nün ticari olarak üretilmesi için daha fazla adım atılabilir. BC küre imalatının bu yöntemi ucuz, hazır mutfak malzemelerini kullanır. İlk montajdan sonra, BC küreleri 2 gün içinde parazit olmadan oluşmaya başlar. Bu strateji ile BC küreleri üretmek çok az alan gerektirir ve yenilebilir bir yan ürüne sahiptir, fermente çay ‘kombucha’. Diğer çalışmalarda bahsedilen kapsülleme teknikleri arasında faz inversiyon tekniği22 , 23,matris oluşumu24,sprey kurutma25ve sentez sırasında doğrudan kapsülleme ile oluşturulan kaplamalar26bulunur. Bu yazıda özetlenen doğrudan kapsülleme yöntemi, hazır malzemeler kullanan kolay ve ucuz bir süreç isteyenler için yararlıdır.

Bu araştırma ile BC küre üretimi ve kapsülleme için başarılı bir protokol oluşturulmuştur. BC küreleri, biyoşark, mayın atıkları ve polistiren mikrobeadların katı parçacıklarını kendi bükme yapıları içinde kapsülleyebilir. Henüz endüstride yaygın olarak kullanılmasa da, BC gelecekteki uygulamalar için kullanılabilecek pratik, sürdürülebilir ve doğal olarak meydana gelen bir malzemedir.

Protocol

1. Bakteriyel selüloz başlangıç kültürünün oluşturulması ve sürdürülmesi Bir SCOBY şeklinde yaklaşık 50 g bakteriyel selülozun başlangıç kültürünü elde edin. Ticari olarak satın alınabilir (örneğin, Sağlık için Kültürler’den). SCOBY’yi kağıt havlu ile kaplanmış 1 L beherin içine yerleştirin. 700 mL deiyonize suyu kaynatın, SCOBY içerenden ayrı bir kapta aktarın ve 85 g sakkaroz ekleyin. Sakkaroz çözüldükten sonra, 2 torba siyah çay (4.87 g) ekl…

Representative Results

BC küreleri kültürün ilk 48 h’si boyunca en hızlı büyüme hızına sahiptir (Şekil 2). Şekil 2 ayrıca kürelerin maksimum ortalama boyuta ulaşma ve daha sonra sabit kalma eğilimini de göstermektedir. Bu deneyde küreler ortalama 7,5 ± 0,2 mm çapa ulaştı. BC küreleri 10 günlük büyüme süresi içinde hiçbir zaman tamamen bozulmasa da, sekizinci gün boyunca kürenin ana gövdesinden uzanan tendriller oluşturmaya başladı. Bu şekil <strong…

Discussion

Bu protokol, yürütülmesi kolay ve uygun maliyetli BC küre üretimi ve kapsülleme yöntemlerini özetlemektedir. Orijinal protokolde yapılan çeşitli ayarlamalar sayesinde yeterli bir süreç belirlenmiştir. Uygulanabilir kürelerin sağlanması için kritik adımlar atılmalıdır. BC oluşumunda yer alan tüm bileşenler kürelerin sağlığında ve dayanıklılığında önemli bir rol oynar. Sakkaroz organizmaları besler, çay azot sağlar ve sirke istenmeyen kirleticileri önlemek için pH’ı en uygun koşul…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma Adolfo Martinez, Catherine Mulholland, Tyler Somerville ve Laurel Bitterman tarafından montana tech araştırma yardımcı mentorluk programının devamıdır. Araştırma, Ulusal Bilim Vakfı tarafından Hibe No. OIA-1757351 ve Muharebe Kabiliyetleri Geliştirme Komutanlığı Ordu Araştırma Laboratuvarı (Kooperatif Anlaşma Numarası W911NF-15-2-0020). Bu materyalde ifade edilen herhangi bir görüş, bulgu ve sonuç veya öneri yazarların görüşleridir ve Ulusal Bilim Vakfı veya Ordu Araştırma Laboratuvarı’nın görüşlerini yansıtmak zorunda değildir. Amy Kuenzi, Lee Richards, Katelyn Alley, Chris Gammons, Max Wohlgenant ve Kris Bosch’a da katkılarından dolayı teşekkür ederiz.

Materials

100 mL graduated cylinder
1000 mL beaker
25 mL graduated cylinder
250 mL Erlenmeyer baffled flask Chemglass CLS-2040-02
500 mL beaker
Balance
Biochar Ponderosa pine heat treated under argon gas, heated at 15 °C per minute to 800 °C
Black tea
Deionized water
Distilled white vinegar
Elastic band
Microbial starter culture Cultures for Health
Mine waste Collected from Butte, MT: 46.001978,-112.582465. Mine waste contains soil and metals originating from past copper mining. Mn, Si, Ca, Al, and Fe were the five most prevalent elements measured in the mine waste through x-ray diffraction.
Mortar and pestle
Orbital shaker Used various brands
Paper towel
Polystyrene microbeads Polybead 17138 3 micron diameter
Stir rod
Sucrose
Tea kettle
TGA TA Instruments TA Q500 400 °C/min to 800 °C, 100 mL/min N2
Thermometer
XRF Analyzer ThermoFisher Scientific 10131166

References

  1. Mohainin Mohammad, S., Abd Rahman, N., Sahaid Khalil, M., Rozaimah Sheikh Abdullah, S. An Overview of Biocellulose Production Using Acetobacter xylinum Culture. Advances in Biological Research. 8 (6), 307-313 (2014).
  2. Dufresne, A. Bacterial cellulose. Nanocellulose. , 125-146 (2017).
  3. Czaja, W., Romanovicz, D., Brown, R. M. Structural investigations of microbial cellulose produced in stationary and agitated culture. Cellulose. 11 (3-4), 403-411 (2004).
  4. Hu, Y., Catchmark, J. M. Formation and characterization of spherelike bacterial cellulose particles produced by acetobacter xylinum JCM 9730 strain. Biomacromolecules. 11 (7), 1727-1734 (2010).
  5. Goh, W. N., Rosma, A., Kaur, B., Fazilah, A., Karim, A. A., Bhat, R. Microstructure and physical properties of microbial cellulose produced during fermentation of black tea broth (kombucha). International Food Research Journal. 19 (1), 153-158 (2012).
  6. Toyosaki, H., Naritomi, T., Seto, A., Matsuoka, M., Tsuchida, T., Yoshinaga, F. Screening of Bacterial Cellulose-producing Acetobacter Strains Suitable for Agitated Culture. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 59 (8), 1498-1502 (1995).
  7. Shi, Z., Zhang, Y., Phillips, G. O., Yang, G. Utilization of bacterial cellulose in food. Food Hydrocolloids. 35, 539-545 (2014).
  8. Holland, M. C., Eggensperger, C. G., Giagnorio, M., Schiffman, J. D., Tiraferri, A., Zodrow, K. R. Facile Postprocessing Alters the Permeability and Selectivity of Microbial Cellulose Ultrafiltration Membranes. Environmental Science and Technology. 54 (20), 13249-13256 (2020).
  9. Le Hoang, S., Vu, C. M., Pham, L. T., Choi, H. J. Preparation and physical characteristics of epoxy resin/ bacterial cellulose biocomposites. Polymer Bulletin. 75 (6), 2607-2625 (2018).
  10. Vu, C. M., Nguyen, D. D., Sinh, L. H., Pham, T. D., Pham, L. T., Choi, H. J. Environmentally benign green composites based on epoxy resin/bacterial cellulose reinforced glass fiber: Fabrication and mechanical characteristics. Polymer Testing. 61, 150-161 (2017).
  11. Pavaloiu, R. D., Stoica, A., Stroescu, M., Dobre, T. Controlled release of amoxicillin from bacterial cellulose membranes. Central European Journal of Chemistry. 12 (9), 962-967 (2014).
  12. Trovatti, E., et al. Biocellulose membranes as supports for dermal release of lidocaine. Biomacromolecules. 12 (11), 4162-4168 (2011).
  13. Trovatti, E., et al. Bacterial cellulose membranes applied in topical and transdermal delivery of lidocaine hydrochloride and ibuprofen: In vitro diffusion studies. International Journal of Pharmaceutics. 435 (1), 83-87 (2012).
  14. Shaviv, A., Mikkelsen, R. L. Controlled-release fertilizers to increase efficiency of nutrient use and minimize environmental degradation – A review. Fertilizer Research. 35 (1-2), 1-12 (1993).
  15. Eggensperger, C. G., et al. Sustainable living filtration membranes. Environmental Science and Technology Letters. 7 (3), 213-218 (2020).
  16. Schröpfer, S. B., et al. Biodegradation evaluation of bacterial cellulose, vegetable cellulose and poly (3-hydroxybutyrate) in soil. Polimeros. 25 (2), 154-160 (2015).
  17. Orts, W. J., Glenn, G. M. Reducing soil erosion losses with small applications of biopolymers. ACS Symposium Series. 723, 235-247 (1999).
  18. Mohite, B. V., Patil, S. V. A novel biomaterial: Bacterial cellulose and its new era applications. Biotechnology and Applied Biochemistry. 61 (2), 101-110 (2014).
  19. Mikkelsen, R. L. Using hydrophilic polymers to control nutrient release. Fertilizer Research. 38 (1), 53-59 (1994).
  20. Du, C. W., Zhou, J. M., Shaviv, A. Release characteristics of nutrients from polymer-coated compound controlled release fertilizers. Journal of Polymers and the Environment. 14 (3), 223-230 (2006).
  21. Serafica, G., Mormino, R., Bungay, H. Inclusion of solid particles in bacterial cellulose. Applied Microbiology and Biotechnology. 58 (6), 756-760 (2002).
  22. Tomaszewska, M., Jarosiewicz, A. Use of polysulfone in controlled-release NPK fertilizer formulations. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (16), 4634-4639 (2002).
  23. González, M. E., et al. Evaluation of biodegradable polymers as encapsulating agents for the development of a urea controlled-release fertilizer using biochar as support material. Science of the Total Environment. 505, 446-453 (2015).
  24. Shavit, U., Shaviv, A., Shalit, G., Zaslavsky, D. Release characteristics of a new controlled release fertilizer. Journal of Controlled Release. 43 (2-3), 131-138 (1997).
  25. Kolakovic, R., Laaksonen, T., Peltonen, L., Laukkanen, A., Hirvonen, J. Spray-dried nanofibrillar cellulose microparticles for sustained drug release. International Journal of Pharmaceutics. 430 (1-2), 47-55 (2012).
  26. Zaharia, A., et al. Bacterial cellulose-poly(acrylic acid-: Co-N, N ′-methylene-bis-acrylamide) interpenetrated networks for the controlled release of fertilizers. RSC Advances. 8 (32), 17635-17644 (2018).
  27. Peterson, J. D., Vyazovkin, S., Wight, C. A. Kinetics of the thermal and thermo-oxidative degradation of polystyrene, polyethylene and poly(propylene). Macromolecular Chemistry and Physics. 202 (6), 775-784 (2001).
  28. Goh, W. N., Rosma, A., Kaur, B., Fazilah, A., Karim, A. A., Bhat, R. Fermentation of black tea broth (kombucha): I. effects of sucrose concentration and fermentation time on the yield of microbial cellulose. International Food Research Journal. 19 (1), 109-117 (2012).
  29. Zhu, H., Jia, S., Yang, H., Jia, Y., Yan, L., Li, J. Preparation and application of bacterial cellulose sphere: A novel biomaterial. Biotechnology and Biotechnological Equipment. 25 (1), 2233-2236 (2011).
  30. Nguyen, V. T., Flanagan, B., Gidley, M. J., Dykes, G. A. Characterization of cellulose production by a Gluconacetobacter xylinus strain from Kombucha. Current Microbiology. 57 (5), 449-453 (2008).
  31. Costa, A. F. S., Almeida, F. C. G., Vinhas, G. M., Sarubbo, L. A. Production of bacterial cellulose by Gluconacetobacter hansenii using corn steep liquor as nutrient sources. Frontiers in Microbiology. 8, 1-12 (2017).
  32. Watanabe, K., Tabuchi, M., Morinaga, Y., Yoshinaga, F. Structural features and properties of bacterial cellulose produced in agitated culture. Cellulose. 5 (3), 187-200 (1998).

Play Video

Cite This Article
Bitterman, L. A., Martinez, A., Mulholland, C., Somerville, T., Prieto-Centurion, D., Zodrow, K. R. Bacterial Cellulose Spheres that Encapsulate Solid Materials. J. Vis. Exp. (168), e62286, doi:10.3791/62286 (2021).

View Video