Summary

Bakterielle Cellulosekugeln, die feste Materialien verkapseln

Published: February 26, 2021
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Summary

Dieses Protokoll stellt eine einfache, kostengünstige Methode zur Bildung von bakteriellen Cellulosekugeln (BC) dar. Dieses Biomaterial kann als Verkapselungsmedium für feste Materialien, einschließlich Pflanzenkohle, Polymerkugeln und Minenabfälle, fungieren.

Abstract

Bakterielle Cellulosekugeln (BC) wurden seit der Popularisierung von BC als neuartiges Material zunehmend erforscht. Dieses Protokoll stellt eine erschwingliche und einfache Methode für die BC-Kugelproduktion dar. Neben der Herstellung dieser Kugeln wurde auch ein Verkapselungsverfahren für feste Partikel identifiziert. Zur Herstellung von BC-Kugeln werden Wasser, schwarzer Tee, Zucker, Essig und Bakterienkultur in einem verfackelten Kolben kombiniert und der Inhalt gerührt. Nach der Bestimmung der richtigen Kulturbedingungen für die BC-Kugelbildung wurde ihre Fähigkeit, feste Partikel zu verkapseln, mit Pflanzenkohle, Polymerperlen und Minenabfällen getestet. Die Sphären wurden mit der ImageJ-Software und der thermischen gravimetrischen Analyse (TGA) charakterisiert. Die Ergebnisse zeigen, dass Kugeln mit 7,5 mm Durchmesser in 7 Tagen hergestellt werden können. Die Zugabe verschiedener Partikel erhöht den durchschnittlichen Größenbereich der BC-Kapseln. Die Kugeln verkapselten 10 – 20% ihrer Trockenmasse. Diese Methode zeigt eine kostengünstige Kugelherstellung und Verkapselung, die mit leicht erhältlichen Materialien möglich ist. BC-Kugeln können in Zukunft als Hilfsmittel zur Entfernung von Verunreinigungen, als Düngemittelbeschichtung mit kontrollierter Freisetzung oder als Bodenverbesserung verwendet werden.

Introduction

Bakterielle Cellulose (BC) ist aufgrund ihrer mechanischen Festigkeit, hohen Reinheit und Kristallinität, Wasserrückhaltefähigkeit und kompliziertenFaserstruktur 1, 2,3,4für ihre potenzielle Verwendung in der Industrie bekannt. Diese Eigenschaften machen BC zu einem günstigen Biomaterial für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich biomedizinischer, lebensmittelverarbeitender und Umweltsanierungsanwendungen1. Die Bildung eines BC-Films kann mit Einzelorganismuskulturen oder Mischkulturen erfolgen, wie sie für Kombucha5,ein fermentiertes Teegetränk, verwendet werden. Das Brauen von Kombucha beruht auf einer “symbiotischen Kultur von Bakterien und Hefe”, allgemein bekannt als SCOBY. Unter Verwendung dieser symbiotischen Kultur von Organismen wird eine ähnliche Technik verwendet, um BC-Kugeln zu erzeugen. Dieses Biomaterial kann verwendet werden, um Umweltschadstoffe zu isolieren und landwirtschaftliche Ergänzungen wie Pflanzenkohle zu verankern, um eine effizientere Pflanzenproduktion zu erreichen.

In der früheren Literatur wurde diskutiert, wie die Eigenschaften von BC, die unter bewegten Bedingungen produziert werden, mit BC verglichen werden, die in einer stationären Kultur produziert werden. Eine stationäre Kultur führt zu einem Film, der sich an der Flüssigkeit-Luft-Grenzfläche bildet, während eine geschüttelte Kultur zu unterschiedlichen BC-Partikeln, Strängen und Kugeln führt, die in der Flüssigkeit6suspendiert sind. Viele Studien haben sich auf die Behauptung bezogen, dass die kommerzielle Produktion von BC unter den dynamischenBedingungen 6,7praktikabler ist, was eine Begründung für die Anwendung der Methode dieses Papiers liefert. Darüber hinaus wurden verschiedene Untersuchungen zur Struktur und den Eigenschaften von BC-Kugeln durchgeführt. Toyosaki et al.6 verglichen verwirrte und glattwandige Erlenmeyerkolben in ihrer bewegten BC-Produktion. Eine Studie von Hu und Catchmark 4 bestimmtedie Bedingungen für BC-Kugeln, die als Richtlinien für den aktuellen BC-Kugelproduktionsprozess verwendet wurden, und ihre Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Kugelgröße nach 60 Stunden nicht weiter zunimmt. Eine Überprüfung der BC-Produktion durch Mohammad et al.1 zeigt, dass das Schütteln der BC-Kultur eine gleichmäßige Sauerstoffversorgung und -verteilung gewährleistet, die für ein erfolgreiches BC-Wachstum notwendig ist. Holland et al.8 haben die Kristallinität und chemische Struktur von BC mittels Röntgenbeugung und Fourier-Transformations-Infrarotspektroskopie untersucht. Es wird angenommen, dass BC-Kapseln ähnliche Eigenschaften aufweisen und zukünftige Forschung strukturelle Eigenschaften untersuchen wird. Studien haben auch die positiven Auswirkungen der Verwendung von BC zur Herstellung verbesserter Biokomposite untersucht. Unter Verwendung von Epoxidharz als Basis haben Forscher gezeigt, dass die Zugabe von BC Materialeigenschaften wie Ermüdungslebensdauer, Bruchzähigkeit sowie Zug- undBiegefestigkeit verbessert 9,10. Wie frühere und aktuelle Forschungen zeigen, sind viele an der Kommerzialisierung der BC-Nutzung interessiert.

Viele Forscher haben bakterielle Cellulose in kontrollierten Freisetzungssystemen untersucht, und die hier beschriebene Methode erzeugt Kapseln, die als kontrollierte Freisetzungssysteme verwendet werden könnten. Ein Großteil dieser Forschung konzentriert sich auf die kontrollierte Freisetzung im biomedizinischen Bereich sowie auf einige Untersuchungen in der Verabreichung von Düngemitteln mit kontrollierter Freisetzung (CRF). Basierend auf dem Erfolg der kontrollierten Freisetzung von Amoxicillin11, Lidocain12und Ibuprofen13durch BC kann BC ähnliche Abgabeeigenschaften wie bei anderen Substanzen wie einem pelletierten Dünger aufweisen. Ein Überblick über CRFs von Shaviv und Mikkelsen14 erkennt an, dass CRFs effizienter sind, Arbeit sparen und im Allgemeinen weniger Umweltzerstörung verursachen als herkömmliche Düngemittelanwendungen. Bakterielle Cellulose kann als günstiges Verkapselungsmaterial für CRFs wirken. Düngemittel können aus BC-Membranen austreten oder als BC-Biologisch abbaubarsein 15,16. Die hohe Quellfähigkeit von BC kann auch als vorteilhafte Bodenverbesserung17 , 18,19wirken, da sowohl Düngemittelnährstoffe als auch Feuchtigkeit durch die Anwendung von BC-Kugeln in den Boden gelangen können. Mit diesen Eigenschaften kann ein CRF, das durch BC-Kugelverkapselung gebildet wird, einen Vorteil gegenüber anderen Düngemittelbeschichtungsmaterialien haben, die während ihrer Produktions- und Entsorgungsphasen negative Auswirkungen haben könnten. Die Anpassung von BC an eine Düngemittelbeschichtung kann die CRF-Technologien weiter verbessern. Durch die Senkung der Düngemittelfreisetzungsrate haben die Pflanzen genügend Zeit, um den Dünger zu aufnehmen und einen übermäßigen Abfluss in Gewässer zu verhindern, wodurch eutrophierende und nicht sauerstoffreiche Zonen reduziert werden. Ähnliche langsam freisetzende Düngemittel wurden mit Polymerbeschichtungen hergestellt und pilotiert20.

Im Gegensatz zu Protokollen, die in früheren Forschungen beschrieben wurden, konzentriert sich dieses auf eine gleichmäßige, kohäsive Kugelproduktion und nicht auf eine hohe Celluloseausbeute. Darüber hinaus wurde die BC-Verkapselung anderer Feststoffe mit Cellulosefilmen, aber nicht mit Kugeln21untersucht. Durch die Ausweitung der Forschung an bakteriellen Cellulosekugeln können weitere Schritte unternommen werden, um BC kommerziell herzustellen, was aufgrund der umweltverträglichen Eigenschaften von BC von Vorteil ist. Diese Methode der BC-Kugelherstellung verwendet kostengünstige, leicht verfügbare kulinarische Zutaten. Nach der ersten Montage beginnen sich BC-Kugeln innerhalb von 2 Tagen ohne Störungen zu bilden. Die Herstellung von BC-Kugeln durch diese Strategie benötigt wenig Platz und hat ein essbares Nebenprodukt, den fermentierten Tee “Kombucha”. Verkapselungstechniken, die in anderen Studien erwähnt werden, umfassenBeschichtungen,die durch die Phaseninversionstechnik22,23, Matrixbildung24,Sprühtrocknung 25und direkte Verkapselung während der Synthese gebildet werden26. Die in diesem Manuskript beschriebene methode der direkten Verkapselung ist nützlich für diejenigen, die einen einfachen, kostengünstigen Prozess wünschen, der leicht verfügbare Materialien verwendet.

Durch diese Forschung wurde ein erfolgreiches Protokoll für die Bc-Kugelproduktion und -verkapselung erstellt. BC-Kugeln können feste Partikel aus Pflanzenkohle, Minenhalden und Polystyrol-Mikroperlen in ihren individuellen Strukturen einkapseln. Obwohl BC in der Industrie noch nicht weit verbreitet ist, ist es ein praktisches, nachhaltig hergestelltes und natürlich vorkommendes Material, das für zukünftige Anwendungen verwendet werden könnte.

Protocol

1. Erstellung und Pflege einer bakteriellen Cellulose-Starterkultur Erhalten Sie eine Starterkultur von bakterieller Cellulose, ca. 50 g, in Form eines SCOBY. Es kann kommerziell erworben werden (z. B. von Cultures for Health). Legen Sie den SCOBY in ein 1 L Becherglas, bedeckt mit einem Papiertuch. Kochen Sie 700 ml entionisiertes Wasser, geben Sie es in ein separates Gefäß von dem, das das SCOBY enthält, und fügen Sie 85 g Saccharose hinzu. Sobald sich die Saccharose aufgelöst hat, f?…

Representative Results

BC-Kugeln haben die schnellste Wachstumsrate während der ersten 48 Stunden der Kultur (Abbildung 2). Abbildung 2 zeigt auch, wie die Kugeln dazu neigen, eine maximale durchschnittliche Größe zu erreichen und dann konstant zu bleiben. In diesem Experiment erreichten die Kugeln einen durchschnittlichen Durchmesser von 7,5 ± 0,2 mm. Obwohl sich die BC-Kugeln innerhalb der 10-tägigen Wachstumsperiode nie vollständig verschlechtern, begannen sie, Ranken zu bild…

Discussion

Dieses Protokoll beschreibt BC-Kugelproduktions- und Verkapselungsmethoden, die einfach durchzuführen und kostengünstig sind. Durch verschiedene Anpassungen des ursprünglichen Protokolls wurde ein adäquater Prozess identifiziert. Kritische Schritte müssen befolgt werden, um lebensfähige Sphären zu gewährleisten. Alle Inhaltsstoffe, die an der BC-Bildung beteiligt sind, spielen eine Schlüsselrolle für die Gesundheit und Haltbarkeit der Kugeln. Die Saccharose ernährt Organismen, der Tee liefert Stickstoff und de…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit ist eine Fortsetzung eines Montana Tech Research Assistant Mentorship Program-Projekts von Adolfo Martinez, Catherine Mulholland, Tyler Somerville und Laurel Bitterman. Die Forschung wurde von der National Science Foundation unter der Fördernummer gefördert. OIA-1757351 und das Combat Capabilities Development Command Army Research Laboratory (Kooperationsvertragsnummer W911NF-15-2-0020). Alle Meinungen, Ergebnisse und Schlussfolgerungen oder Empfehlungen, die in diesem Material zum Ausdruck gebracht werden, sind die der Autoren und spiegeln nicht unbedingt die Ansichten der National Science Foundation oder des Army Research Lab wider. Wir danken auch Amy Kuenzi, Lee Richards, Katelyn Alley, Chris Gammons, Max Wohlgenant und Kris Bosch für ihre Beiträge.

Materials

100 mL graduated cylinder
1000 mL beaker
25 mL graduated cylinder
250 mL Erlenmeyer baffled flask Chemglass CLS-2040-02
500 mL beaker
Balance
Biochar Ponderosa pine heat treated under argon gas, heated at 15 °C per minute to 800 °C
Black tea
Deionized water
Distilled white vinegar
Elastic band
Microbial starter culture Cultures for Health
Mine waste Collected from Butte, MT: 46.001978,-112.582465. Mine waste contains soil and metals originating from past copper mining. Mn, Si, Ca, Al, and Fe were the five most prevalent elements measured in the mine waste through x-ray diffraction.
Mortar and pestle
Orbital shaker Used various brands
Paper towel
Polystyrene microbeads Polybead 17138 3 micron diameter
Stir rod
Sucrose
Tea kettle
TGA TA Instruments TA Q500 400 °C/min to 800 °C, 100 mL/min N2
Thermometer
XRF Analyzer ThermoFisher Scientific 10131166

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Cite This Article
Bitterman, L. A., Martinez, A., Mulholland, C., Somerville, T., Prieto-Centurion, D., Zodrow, K. R. Bacterial Cellulose Spheres that Encapsulate Solid Materials. J. Vis. Exp. (168), e62286, doi:10.3791/62286 (2021).

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