Ein Protokoll zur Beurteilung der Zeitlichen Entwicklung der neuronalen Verzierung zu externen, sich wiederholenden Reizen wird vorgestellt. Steady-State-Aufnahmen desselben experimentellen Zustandes werden im Zeitbereich erfasst und gemittelt. Die Steady-State-Dynamik wird analysiert, indem die Antwortamplitude als Funktion der Zeit nachzeichnet.
Neurale Entrainment bezieht sich auf die Synchronisation der neuronalen Aktivität mit der Periodizität der sensorischen Reize. Diese Synchronisation definiert die Erzeugung von steady-State evozierten Antworten (d. h. Schwingungen im Elektroenzephalogramm phasengebunden an die Antriebsstimuli). Die klassische Interpretation der Amplitude der steady-state evozierten Antworten setzt eine stereotype zeitinvariante neuronale Reaktion plus zufällige Hintergrundschwankungen voraus, so dass die Mittelung über wiederholte Darstellungen des Stimulus die stereotypische Reaktion. Dieser Ansatz ignoriert die Dynamik des Steady-State, wie im Falle der Anpassung, die durch längere Expositionen gegenüber dem Stimulus ausgelöst wird. Um die Dynamik von stationären Reaktionen zu analysieren, kann davon ausgegangen werden, dass die Zeitentwicklung der Antwortamplitude in verschiedenen Stimulationsläufen gleich ist, die durch ausreichend lange Pausen getrennt sind. Basierend auf dieser Annahme wird eine Methode vorgestellt, um die Zeitentwicklung von steady-state-Antworten zu charakterisieren. Eine ausreichend große Anzahl von Aufnahmen wird als Reaktion auf den gleichen experimentellen Zustand erworben. Experimentelle Durchläufe (Aufnahmen) werden spaltenweise gemittelt (d. h. Läufe werden gemittelt, aber Epochen innerhalb von Aufnahmen werden nicht mit den vorhergehenden Segmenten gemittelt). Die säulenweise Mittelung ermöglicht die Analyse von stationären Reaktionen in Aufnahmen mit bemerkenswert hohen Signal-Rausch-Verhältnissen. Daher liefert das gemittelte Signal eine genaue Darstellung der Zeitentwicklung der stationären Reaktion, die sowohl in den Zeit- als auch in der Frequenzbereich analysiert werden kann. In dieser Studie wird eine detaillierte Beschreibung der Methode bereitgestellt, bei der visuell evozierte Potentiale für den stationären Zustand als Beispiel für eine Antwort verwendet werden. Vorteile und Vorbehalte werden anhand eines Vergleichs mit Einzelversuchsmethoden zur Analyse der neuronalen Entrainment bewertet.
Wenn von der Kopfhaut aufgezeichnet, Gehirn elektrische Aktivität wird als kontinuierliche und regelmäßige Veränderungen der Spannungen im Laufe der Zeit beobachtet. Diese elektrische Aktivität wird Elektroenzephalogramm (EEG) genannt und wurde erstmals von Hans Berger in den späten zwanziger Jahren des letzten Jahrhundertsbeschrieben 1. Nachfolgende wegweisende Studien beschrieben das EEG als eine zusammengesetzte Zeitreihe, in der verschiedene rhythmische oder sich wiederholende Muster beobachtet werden können2,3,4. Heutzutage ist das EEG in der Regel in fünf etablierte Frequenzbänder unterteilt, Delta, Theta, Alpha, Beta und Gamma, die mit dem unterschiedlichen sensorischen und kognitiven Prozess verbunden sind.
Jahrelang beschränkte sich die Untersuchung von Gehirnschwingungen mit EEG entweder auf die Analyse des Spektrums in der laufenden Aktivität oder auf Veränderungen der oszillatonischen Aktivität, die durch nicht periodische sensorische Ereignisse ausgelöst wurden. In den letzten Jahrzehnten wurden verschiedene Methoden implementiert, um laufende EEG-Oszillationen zu modulieren und die Auswirkungen solcher Modulationen auf Wahrnehmungs- und kognitive Prozesse zu untersuchen, einschließlich der Darstellung rhythmischer sensorischer Stimulation für neuronale Verzierung. Der Begriff neuronale Verzierung bezieht sich auf die Synchronisation der neuronalen Aktivität mit den periodischen Eigenschaften sensorischer Reize. Dieser Prozess führt zur Erzeugung von steady-State evozierten Potentialen (d. h. EEG-Oszillationen, die an die periodischen Eigenschaften der Antriebsreize gebunden sind). Steady-State evozierte Potentiale werden am häufigsten durch visuelle, auditive und vibrotaktile Stimulation ausgelöst, entweder mit transienten Reizen präsentiert mit einer konstanten Rate oder kontinuierliche Stimulation in Amplitude bei der Häufigkeit des Interesses moduliert. Während somatosensorische Steady-State-Evoktionspotentiale (SSSEPs) als Reaktion auf sich wiederholende taktile Stimulation5,6aufgezeichnet werden, werden die periodischen, attinierten, visuell evozierten Potentiale (SSVEPs) im allgemeinen durch die periodischen Darstellung von Luminanzflimmern, Bildern und Gesichtern7,8. Auditorische Steady-State-Antworten (ASSRs) werden in der Regel von Zügen transienter akustischer Reize oder durch die kontinuierliche Darstellung von Amplituden-modulierten Tönen9,10erzeugt.
Die Extraktion von steady-state evozierten Potentialen aus dem gemessenen EEG beruht im Wesentlichen auf der Mittelung später erworbener EEG-Epochen, die zeitgebunden an den Stimulus11gebunden sind. Aufgrund der Periodizität der Antworten können sie sowohl in Zeit- als auch in Frequenzbereichen analysiert werden. Nach der Frequenz-Domänen-Transformation wird das sensorische Ansprechen als Amplitudenspitzen bei der Darstellungsrate oder Modulationsfrequenz der äußeren Reize und der entsprechenden Oberschwingungen beobachtet. Diese Verfahren (Time-Domain-Mittelung und die anschließende Frequenz-Domain-Transformation) waren für die Entwicklung eines Hörtestes auf der Grundlage des Nachweises von ASSR-Methoden mit klinischen Zwecken unerlässlich12,13,14 ,15,16.
Darüber hinaus war die klassische Zeitbereichsmittelung von EEG-Epochen äußerst nützlich für die Analyse physiologischer Prozesse wie der Erzeugung und aussterbenden SSVEP17,18. Die Darstellung aufeinander folgender Züge von Flimmerlichtern und die Mittelung nachfolgender Epochen innerhalb einer Aufzeichnung stellten Wacker et al.19 fest, dass der Phasensperrindex des SSVEP während der ersten 400 ms Stimulation schnell angestiegen ist und danach hoch blieb. . Sie berichteten auch, dass eine robuste visuelle Verzessement zwischen 700-1 100 ms nach Stimulusbeginn etabliert wurde. Ein gewisses Maß an Einschulung blieb nach dem Offset des Stimulationszuges wirksam, der etwa drei Perioden der oszillatoren Reaktion17,19dauerte. Diese Verhaltensweisen wurden als die einnehmende/entfesselnde Wirkung der beobachteten Schwingungen interpretiert, die eine Folge der nichtlinearen Informationsverarbeitung im menschlichen visuellen System ist17. Alternativ ist bekannt, dass unter bestimmten experimentellen Bedingungen die Flickerstimulation zu Beginn On-Responses und off-responses am Ende von Stimulationszügen anstelle von neuronaler Entrainment18auslösen kann.
Die Hauptannahme für durchschnittliche nacheinander erworbene EEG-Epochen ist, dass das EEG-Signal eine lineare Kombination aus sensorischer Reaktion und Hintergrundrauschen20darstellt. Darüber hinaus wird angenommen, dass die Amplitude, Frequenz und Phase der oszillierenden Reaktion stationär sind, während das Hintergrundrauschen als zufällige Aktivität betrachtet wird. In Fällen, in denen diese Annahme nicht erfüllt ist, entspricht die nach mehreren Epochen berechnete Antwortamplitude jedoch nicht unbedingt der momentanen Amplitude des evozierten Potentials.
Kürzlich wurde berichtet, dass sich die im Hirnstamm von Ratten erzeugte ASSR an die kontinuierliche Darstellung von Amplituden-modulierten Tönen anpasst (d. h. die Reaktionsamplitude nimmt im Laufe der Zeit exponentiell ab)21,22. Die Anpassung wurde als neuronaler Mechanismus interpretiert, der den Verlust der Neuheit eines monoton repetitiven Sinnesreizes widerspiegelt und die Empfindlichkeit gegenüber relevanten Schwankungen in der akustischen Umgebung erhöht23,24. Im akustischen Pfad kann Anpassung das Sprachverständnis in lauten Umgebungen verbessern. Darüber hinaus kann dieser Prozess Teil der bestehenden Mechanismen zur Überwachung des akustischen Feedbacks der eigenen Stimme sein, um die Sprachproduktion zu steuern.
Bei der Analyse der Zeitentwicklung der 40 Hz ASSR beim Menschen beobachteten Van Eeckhoutte et al.25 eine signifikante, aber geringe Abnahme der Antwortamplitude im Laufe der Zeit (etwa -0,0002 V/s basierend auf der Gruppenanalyse, wenn man von einer linearen Abnahme im Laufe der Zeit ausging). Folglich kamen diese Autoren zu dem Schluss, dass die 40 Hz ASSR beim Menschen sich nicht an die Stimulation anpasst. Beim Menschen wurden bei der Analyse der Stabilität des SSVEP26nicht stationäre Verhaltensweisen beobachtet. Diese Autoren stellten fest, dass die Amplitude der Grundfrequenz und die zweite Oberschwingung des SSVEP nur bei 30 % bzw. 66,7 % der getesteten Probanden stationär waren. Die Phasen beider SSVEP-Frequenzkomponenten waren zwar im Laufe der Zeit relativ stabil, zeigten aber kleine Drifts26.
Obwohl die klassische Zeitbereichsmittelung später erworbener Epochen die Erforschung stationärer Eigenschaften der neuronalen Einbahnung ermöglicht, muss diese Methodik überarbeitet werden, wenn die langfristige Dynamik der Forschung, oder wenn die Mittelung der kurzfristigen Dynamik durch das Auftreten von langzeit-Dynamik korrumpiert wird. Um nicht stationäre Verhaltensweisen der konstanten Variablen zu charakterisieren, sollte die evozierte Antwort, die in einem bestimmten Zeitfenster berechnet wird, nicht durch die in den vorhergehenden EEG-Segmenten berechneten beeinträchtigt werden. Mit anderen Worten, das evozierte Potential sollte aus dem Hintergrundrauschen extrahiert werden, ohne dass Epochen mit den vorhergehenden EEG-Segmenten gemittelt sind.
In dieser Studie wird eine Methode zur Bewertung der Dynamik der neuronalen Entrainment vorgestellt. Steady-State-Antworten werden wiederholt als Reaktion auf die gleiche Stimulation aufgezeichnet, bei der aufeinander folgende Aufnahmen durch ein Ruheintervall von dreimal so lang wie der Versuchslauf überfliegt werden. Wenn man bedenkt, dass, wenn die Zeitentwicklung der physiologischen Reaktion in verschiedenen unabhängigen experimentellen Läufen (unabhängige Aufnahmen) gleich ist, werden Aufnahmen spaltenweise gemittelt. Mit anderen Worten, Epochen, die dem gleichen Ort in den verschiedenen Aufnahmen entsprechen, werden gemittelt, ohne Mittelungsepochen innerhalb einer Aufnahme. Folglich entspricht die in jedem Stimulationsintervall berechnete Antwortamplitude der momentanen Amplitude des evozierten Potentials. Die sensorischen Reaktionen können je nach Ziel des Experiments entweder im Zeitbereich analysiert oder in den Frequenzbereich umgewandelt werden. In jedem Fall können die Amplituden als Funktion der Zeit dargestellt werden, um die Zeitentwicklung der stationären Reaktion zu analysieren. Die Generierung und das Aussterben der beschworenen Steady-State-Potenziale kann beurteilt werden, indem die Analyse auf die erste und letzte Epoche der Aufnahmen beschränkt wird.
Die Dynamik der neuronalen Einspeisung kann mit anderen Ansätzen analysiert werden, wie z. B. Schmalbandfiltermessungen, die die Häufigkeit des Interesses umschließen, und die Berechnung der Umhüllung des Leistungssignals mittels Low-Pass-Filterung25 und Hilbert Transformation27. Im Vergleich zu diesen Methoden ermöglicht die säulenweise Mittelung von Epochen die Berechnung von Steady-State-Parametern basierend auf Signalen mit dem höheren Signal-Rausch-Verhältnis (SNR). Kürzlich hat sich die Kalman-Filterung als vielversprechende Technik für die Schätzung von 40-Hz-ASSR-Amplituden28,29,30herauskristallisiert. Die Implementierung der Kalman-Filterung kann die Erkennung von stationären Reaktionen näher ander elektrophysiologischen Schwelle verbessern und die Zeit des Hörtests 29 reduzieren. Darüber hinaus sind stationäre Antworten nicht anzunehmen, wenn ein Kalman-Filteransatz verwendet wird, um die ASSR-Amplitude30zu schätzen. Dennoch hat nur eine Studie die Zeitentwicklung von ASSRs mit Kalman-Filterung25analysiert. Das Fazit der Studie ist, dass die 40-Hz-ASSR-Amplitude über das Stimulationsintervall stabil ist. Daher muss die Kalman-Filterung unter Bedingungen getestet werden, unter denen die ASRR nicht stationär ist.
Obwohl zeitaufwändig, ist die spaltenweise Mittelungsmethode modellfrei und benötigt keine Initialisierungswerte und/oder a priori Definitionen des Rauschverhaltens. Da es sich nicht um Konvergenzzeiten handelt, kann die säulenweise Mittelung eine zuverlässigere Darstellung des Beginns der neuronalen Einbahnung liefern. Daher können die Ergebnisse, die mit der säulenweisen Mittelungsmethode erzielt wurden, als die Bodenwahrheit für die Analyse der Dynamik der neuronalen Einbahnung mit Kalman-Filterung betrachtet werden.
Diese Beschreibung des Protokolls basiert auf einem Beispiel von SSVEP. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass die hier vorgestellte Methode modalitätsunabhängig ist, so dass sie auch verwendet werden kann, um die Zeitentwicklung von SSSEP und ASSR zu analysieren.
Diese Arbeit beschreibt ein experimentelles Verfahren zur Analyse der Dynamik oszillatorischer Gehirnreaktionen. Eine solche Methode besteht darin, eine ausreichende Anzahl unabhängiger Versuchsläufe desselben experimentellen Zustandes zu erwerben, und Zeitbereichs-Mittelungsepochen, die dem gleichen Zeitfenster in den verschiedenen Aufnahmen entsprechen (spaltenweise Mittelung in Abbildung 1B). Die in den gemittelten Daten berechnete Amplitude stellt die momentane Amplitude der oszillatorischen Antwort variablen Antwort variablen Darstellung dar. Das Plotten dieser Amplituden als Funktion der Zeit (oder der Anzahl der Spalten im Dataset) ermöglicht die Analyse der Zeitentwicklung der oszillatorischen Reaktion, die zeitgesperrt für die Stimulation ist. Diese Methode ist eine Änderung der von Ritter et al.23 vorgeschlagenen Änderung zur Analyse der Anpassung vorübergehender kortikal evozierter Potentiale. Die Methode wurde verwendet, um die Dynamik der auditivevoevoevoken Potenziale sowohl beim Menschen24 und Tiermodelle20,21zu analysieren.
Aus methodischer Sicht ist die Kombination von Parametern, die verwendet werden, um die stationäre Reaktion auszulösen, und der Parameter, die implementiert werden, um die neuronale Reaktion aus Hintergrundrauschen zu extrahieren, entscheidend, um die Zeitentwicklung von evozierten Potentialen zu analysieren. 22. Die in dem hier vorgestellten Experiment verwendete Stimuluslänge (40 s) wurde anhand der Ergebnisse einer Pilotstudie ausgewählt. Diese Stimuluslänge reichte aus, um die Anpassung der im Rattenhirnstamm erzeugten ASSR zu analysieren21,22. Darüber hinaus sollte die Stimuluslänge die Zeit überschreiten, zu der die asymptotische Momentbandbreitenleistung von SSVEPs erreicht wird (Abbildung 1 in Labecki et al.26). Dennoch kann die asymptotische Momentbandbreitenleistung von SSVEPs in einigen Fällen über 60 jahre hinaus erreicht werden (Abbildung 2 in Labecki et al.26). Daher wird empfohlen, eine Pilotstudie mit kleinen Stichproben auszuführen, um die Stimuluslänge der Stimulation zu definieren. Andernfalls wird eine Stimuluslänge von mehr als 90 s empfohlen, um eine vollständige Darstellung der Zeitentwicklung der Antwort zu erreichen. Die Verwendung angemessen langer Pausen zwischen aufeinanderfolgenden Aufzeichnungen impliziert die Berücksichtigung aufeinander folgender Versuchsläufe als statistisch unabhängig (d. h. unterschiedliche, unabhängige Kennzahlen derselben Variablen). Nach bestem Wissen und Gewissen wurden keine Experimente durchgeführt, um die optimale Pause zwischen den Läufen zu analysieren (Mindestpause erforderlich, um Läufe voneinander unabhängig zu machen). Das Kriterium der Verwendung von Pausen, die mindestens 3x länger als die Stimuluslänge sind, ist konservativ genug, um sicherzustellen, dass die in einem bestimmten Lauf aufgezeichnete stationäre Reaktion nicht durch die vorherige Stimulation beeinflusst wird.
Kürzlich wurden abwechselnde Reize (experimentelle Bedingungen) vorgeschlagen, um die Pause zwischen experimentellen Läufen zu reduzieren und zusätzliche Anpassungseffekte zu vermeiden25. Ebenso ist die Anzahl der in diesem Experimentellen Protokoll implementierten experimentellen Durchläufe (30) konservativ, da die asymptotischen RNL und pSNR in der Regel nach durchschnittlich 20 experimentellen Durchläufen erreicht werden, ungefähr. Wenn Reize innerhalb des mittleren oberen Bereichs des dynamischen Bereichs der Reaktion liegen (hohe Empfindungsniveaus), sind wahrscheinlich niedrigere Anzahl von Durchläufen erforderlich, um die Dynamik der evozierten Reaktion zu analysieren. In Fällen, in denen unterschiedliche Versuchsbedingungen getestet werden, ist jedoch die gleiche Anzahl von Versuchsläufen für Vergleiche zwischen Bedingungen (d. h. unterschiedlichen Empfindungsniveaus) von entscheidender Bedeutung.
Zusätzlich zur säulenweisen Mittelung von Epochen wurde die Dynamik oszillatorisch evozierter Potentiale analysiert, indem die Einzelversuchsmessungen in einem schmalen Frequenzband um die Frequenz des Interesses gefiltert und die Umhüllung der Leistung berechnet wurden. Signal mit Tiefpassfilterung26. Ebenso wurde eine Einzelversuchsanalyse implementiert, um die Übergangszeit zu charakterisieren, die der stabilen Region von SSVEP48vorausgeht, und die Veränderungen der Amplitude und Phase des SSVEP während des stabilen Bereichs der Antwort49. Während Einzelversuchsanalysen die Diskriminierung relativ schneller Schwankungen der Antwortamplitude ermöglichen, berücksichtigen experimentelle Entwürfe zur Analyse der durchschnittlichen Reaktion in Blöcken, die durch ein bestimmtes Interblockintervall getrennt sind, nur langfristige Schwankungen in der Amplitude des evozierten Potentials50,51. Die säulenweise Mittelung der Epochen steht zwischen diesen beiden Optionen. Das Konvertieren des gemittelten Signals in die Frequenzdomäne mit dem FFT impliziert die Analyse der Dynamik der Antwortvariablen mit einer Auflösung, die der Länge der Epoche entspricht. Im hier vorgestellten Beispiel wurde der SSVEP alle 4 s gemeldet. Obwohl 4 s Auflösung ausreichend ist, um Dynamiken zu beschreiben, die in Zeitabständen auftreten, die zig Sekunden übersteigen, wie die des SSVEP26,ermöglicht es teilweise überlappende Epochen in den Originalaufnahmen, die Zeitentwicklung der steady-state-Reaktion in einer raffinierteren Art und Weise25.
Die Dynamik der konstanten Reaktionen, die nach der spaltenmäßigen Mittelung von Epochen erhalten wurden, stellt hauptsächlich die Entwicklung der oszillatonischen Aktivität dar, die zwischen den gemittelten EEG-Segmenten synchronisiert wird (die, die die Mittelung überleben). Daher ist eine wichtige Frage in Bezug auf die Durchführbarkeit der Methodik die mögliche Dämpfung von Reaktionsamplituden aufgrund von Variationen in der Phase der neuronalen Schwingungen von einem unabhängigen Versuch zum anderen (d. h. zwischen Aufnahmen). Dieses Thema muss experimentell behandelt werden. Es gibt jedoch Hinweise darauf, dass die Phase der oszillatonen Reaktionen des Gehirns weniger variabel ist als erwartet. Tatsächlich haben mehrere Studien eine Regelmäßigkeit in der erwarteten Phase des menschlichen 80 Hz ASSR47,48,49berichtet. Wenn Latenzen auf der Grundlage der Phase der oszillatorischen Aktivität geschätzt werden, wurde die vorhersagbare Wirkung der Intensität und der Trägerfrequenz der akustischen Reize auf die Latenz der akustischen Reaktionen beobachtet (d. h. die Latenzabnahme Intensität und Trägerfrequenzerhöhung)52,53,54. Darüber hinaus wurden typische maturationale Veränderungen der Amplitude und der Links-nach-Rechts-Asymmetrie in den Hörpegeln auch beobachtet, wenn Latenzen aus der Phase der ASSR47,55,56 geschätzt werden. , 57 , 58. Bei der Beschreibung der Zeitentwicklung von SSVEP mittels Einzelversuchsanalyse stellten Labecki et al.26 fest, dass die Variabilität der Reaktionsamplituden innerhalb desselben Subjekts zwar erheblich hoch sei, Phase war deutlich weniger ausgeprägt.
Auf der Grundlage ihrer Beobachtungen schlugen Labecki et al.26 vor, dass mindestens 50 Versuche gemittelt werden sollten, um eine zuverlässige Schätzung der mittleren Leistungshülle der Antwort zu erhalten. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass selbst bei der Berechnung der Amplitude der Antwortvariablen in einzelversuchen eine Mittelung (in diesem Fall von Umschlägen) erforderlich ist, um vertrauenswürdige Ergebnisse zu melden. Darüber hinaus deutet die von Labecki et al.26 gemeldete Inter-Trial-Variabilität in der Amplitude von SSVEP darauf hin, dass die Berechnung dieses Parameters in Einzelversuchen stark durch Hintergrundgeräusche beeinflusst werden kann. Unter Berücksichtigung der Entwicklung des in Abbildung 2dargestellten Signal-Rausch-Verhältnisses reduziert die Berechnung der Antwortvariablen im gemittelten Signal anstelle einzelner Versuche die Anzahl der EEG-Segmente, die verarbeitet werden müssen, um zuverlässige Messungen. Darüber hinaus unterstützt die geringe Variabilität in der Phase, die Labecki et al.26 erhalten hat, die Idee, dass die hier vorgestellte säulenweise Mittelung von Epochen ein gültiges Verfahren zur Berechnung der Dynamik oszillatorisch evozierter Potentiale ist.
Die Mittelung der Daten auf verschiedenen Ebenen führt zu einer unterschiedlichen Interpretation der Ergebnisse. In Bezug auf oszillaton evozierte Potentiale bedeutet die Berechnung der Antwortamplitude nach der Zeitbereichsmittelung unabhängiger Durchläufe, dass nur zeitgesperrte Schwingungen analysiert werden (d. h. solche, die die Mittelung überleben). Dieses Verfahren kann relevante Informationen über die Dynamik der Reaktion in einzelnen Versuchen filtern. Sie garantiert jedoch ein ausreichend hohes Signal-Rausch-Verhältnis der Messungen. Dieser Aspekt könnte von Bedeutung sein, wenn die Antworten nahe an der elektrophysiologischen Schwelle liegen, ein Zustand, in dem die Detektion des Einstrangs durch ein geringes Signal-Rausch-Verhältnis der Messung beeinträchtigt werden kann.
The authors have nothing to disclose.
Die Autoren würdigen Luca Zepeda, Grace A. Whitaker und Nicolas Nieto für ihre Beiträge zur Videoproduktion. Diese Arbeit wurde teilweise von den CONICYT-Programmen BASAL FB0008, MEC 80170124 und PhD-Stipendium 21171741 sowie dem National Institute on Deafness and Other Communication Disorders der National Institutes of Health unter der Nummer P50DC015446 unterstützt. Der Inhalt liegt allein in der Verantwortung der Autoren und stellt nicht unbedingt die offizielle Meinung der National Institutes of Health dar.
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