Farelerde subclavian ven delinme yoluyla kan toplama
Summary
Burada, fare subklavian ven kan örnekleri almak için bir protokol sunuyoruz.
Abstract
Fare insan hastalığı ve insan sağlığını incelemek için en önde gelen memelilerden modeldir. Ancak, farelerden kan numune toplama araştırma çalışmaları zordur. Kuyruk kanı toplama küçük bir miktar kan örneği gerektiğinde popüler bir yöntemdir. Orbital arter kan büyük miktarda gerekli ancak bu kan toplama yöntemi etik konularda düşünülebilir. Eskiden, biz farelerde subklavian ven delinme yoluyla kan numune toplama fizibilite ve güvenlik göstermiştir, ve burada bu yöntemin fareler kullanılabilir olup olmadığını araştırmak. Bu yöntemin farelerde kan toplama için güvenli ve pratik olduğunu bildiriyoruz. Farelerde subklavian ven delinme yoluyla kan toplama günlük araştırma çalışmaları uygun bir yöntem olabilir.
Introduction
Farelerden kan numunesi toplama çoğu araştırma laboratuarında esastır. Farelerde kan toplama için konvansiyonel yaklaşımlar, 100 μL örneğinden az1gerektiğinde kuyruk kesmesi olur. Ancak, terminal dışı bir zaman noktasında 100 μL ‘den fazla kan gerekiyorsa, retroorbital, submandibular kanama veya submental kan toplama en yaygın olarak kabul edilen tekniklerdir2. Bazı durumlarda, cerrahi kesi yoluyla juguler ven kateterizasyon alternatif bir yöntem olarak kabul edildi3.
Bununla birlikte, yukarıdaki Yöntemler fareler için zararlı. Bilgimizin en iyisini yapmak için, arkasındaki Yöntem4,5komplikasyonların potansiyel riski nedeniyle yaygın olarak kabul edilmez. Operasyon ile ilgili travma sadece görünür alan6,7, aynı zamanda yörünge6içinde derin olur. Ayrıca, submandibular kan toplama stresli8 ve aşırı kanama ile ilişkili olabilir2,9. Bizim önceki araştırma dayanarak10,11, burada farelerde subklavian ven kan toplama için yeni bir strateji tanıtmak. Bu teknikle güvenlik, fizibilite ve elde edilen kan hacmi sunulmuştur ve tartışılmaktadır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu rapor, sıçan11‘ de subklavian ven delinmesi yoluyla kan örnekleme konusunda önceki araştırmaların bir uzantısını temsil eder. Fare en sık kullanılan araştırma hayvanı olduğu için, bu tekniğin fareler için de uygulanabilir olup olmadığını görmek değerli olacaktır. Zorluk subklavian ven nispeten daha küçük çaplı gelir.
Şu anda araştırmada, farelerde subklavian delinmesi kan toplamak için uygulanabilir ve güvenilir bir yoldur. Kuyruk ven kesme veya orbital kan toplama gibi konvansiyonel yöntemlerle karşılaştırıldığında, mevcut yöntemin etik sorunları yoktur. Bu prosedürün ardından tüm hayvanlar hayatta kalan sıvı takviyeleri yaklaşık 200 μL kan ekstraksiyon ve hayvanlar daha deneysel çalışmalar için kullanılabilir. Teorik olarak, toplam örnek hacim ekstraksiyon toplam dolaşım kan hacmi her zaman% 10 ‘ dan fazla ulaşamadı ve bir yetişkin hayvanın toplam hacmi 55 olduğunu 70 mL/kg vücut ağırlığı5. Bu araştırmada kullanılan fareler için (21.6-28.3 g), maksimum hacim ekstraksiyon 200 μL civarında olmalıdır. Böylece her fare için 200 μL civarında kan örnekleme miktarını ayarlayacağız. Kan basıncı, kalp hızı ve diğer stres parametreleri ölçmek için yetersizlik bu raporun ana sınırlamalardır.
Yeterli genel anestezi, delinme başarısını garanti etmek için önemli bir konudur. Fareler, iğne tarafından gemi yaralanması riskini önlemek için delinme prosedürü sırasında sessiz kalmalı. Biz 60 yılında pentobarbital sodyum bulundu genel anestezi için mg/kg anestezi ideal derinlemesine tatmin olabilir. Bu ajanın dezavantajı nispeten uzun iyileşme süresi (yaklaşık 30 dakika ortalaması). Bazı enstitülerde, isofluran inhalasyonu kısa iyileşme süresi için kullanılır ve alternatif anestezi seçimi olarak dikkate alınmalıdır15.
Subklavian ven konumu Şekil 4‘ te gösterilir. İnce duvar ve damardaki düşük basınç nedeniyle, subklavian ven anterior ve posterior duvara iğne ileri hareket ederken bir iğne basıncı altında birbirine iliştirmek (Şekil 5A). Piston yavaşça geriye doğru çekilirken, bağlı duvarlar kendiliğinden ayrılır ve iğne ucu damar ve kanın gerçek boşluğuna girebilir ve sürekli negatif basınç altında şırınga içine drenaj olabilir (Şekil 5B). Bir vakum kan toplama sisteminin kullanımı16 da kan toplama lehine olabilir. Fareler subklavian ven nispeten küçük çapı nedeniyle, deneyimli bir operatör için bile arızalar olabilir. Bir acemi için,11bildirilen gibi fareler subklavian ven delinme öneririz. Fareler birkaç başarılı delinme girişimleri sonra, farelerde subklavian ven delinme başarı oranı önemli ölçüde geliştirilebilir. Tam delinme konumu sadece köprücük kemik ortasına kaudal olduğundan emin olun. Üstün sternal fossa yukarı ve kranial hareket iğne başarılı bir delinme garanti etmek için diğer önemli noktalarıyla.
Sonuç olarak, subklavian ven delinme fareler kan toplama için güvenli ve etkili bir yöntemdir. Kuyruk ven kesme ve Retro orbital plekkana kan toplama yanı sıra, bu yöntem, uygulanabilir, güvenli ve farelerde birkaç zaman noktalarında gözlemsel araştırmalar için uygundur.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Çin No. 81670269, No. 81500355 ve No. 81500226 Ulusal Doğal Bilim Vakfı ‘ndan hibe tarafından destekleniyordu.
Materials
| 1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
| 75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
| adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
| canvas gloves | for anesthesia | ||
| electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
| epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
| heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
| mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
| needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
| pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
| physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
| stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
| tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C | |
References
- McCosh, R. B., Kreisman, M. J., Breen, K. M. Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion. Journal of Visualized Experiments. (137), (2018).
- Regan, R. D., Fenyk-Melody, J. E., Tran, S. M., Chen, G., Stocking, K. L. Comparison of Submental Blood Collection with the Retroorbital and Submandibular Methods in Mice (Mus musculus). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 55 (5), 570-576 (2016).
- Park, A. Y., et al. Blood collection in unstressed, conscious, and freely moving mice through implantation of catheters in the jugular vein: a new simplified protocol. Physiological Reports. 6 (21), e13904 (2018).
- Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage. Laboratory Animals. 43 (3), 255-260 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
- van Herck, H., et al. Orbital sinus blood sampling in rats as performed by different animal technicians: the influence of technique and expertise. Laboratory Animals. 32 (4), 377-386 (1998).
- Tsai, P. P., et al. Effects of different blood collection methods on indicators of welfare in mice. Lab Anim (NY). 44 (8), 301-310 (2015).
- Holmberg, H., Kiersgaard, M. K., Mikkelsen, L. F., Tranholm, M. Impact of blood sampling technique on blood quality and animal welfare in haemophilic mice. Laboratory Animals. 45 (2), 114-120 (2011).
- Yang, H., et al. Safety and efficacy of a modified axillary vein technique for pacemaker implantation. Cardiology Plus. 3, 104-107 (2018).
- Yang, H., et al. Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats. Journal of Visualized Experiments. (141), (2018).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Laboratory Animals. 44 (4), 377-378 (2010).
- Research, I. f. L. A. . Guide for the care and use of laboratory animals. , (1996).
- Redel, A., et al. Impact of ischemia and reperfusion times on myocardial infarct size in mice in vivo. Experimental Biology and Medicine (Maywood, N.J.). 233 (1), 84-93 (2008).
- Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
