Recolección de sangre a través de punción venosa Subclaviana en ratones
Summary
Aquí, presentamos un protocolo para tomar muestras de sangre de la vena subclaviana de los ratones.
Abstract
El ratón es el modelo de mamíferos más importante para el estudio de las enfermedades humanas y la salud humana. Sin embargo, la recolección de muestras de sangre de ratones es desafiante en trabajos de investigación. La recolección de sangre de cola es un método popular cuando se necesita una pequeña cantidad de muestras de sangre. La arteria orbital podría considerarse si se necesita una gran cantidad de sangre, pero este método de recolección de sangre tiene problemas éticos. Anteriormente, demostramos la viabilidad y seguridad de la recolección de muestras de sangre a través de la punción de las venas subclavias en ratas, y aquí investigamos si este método podría ser utilizado en ratones. Informamos que este método es seguro y práctico para la recolección de sangre en ratones. La recolección de sangre a través de la punción venosa subclaviana en ratones puede ser un método conveniente en trabajos de investigación diarios.
Introduction
La recolección de muestras de sangre de ratones es esencial en la mayoría de laboratorios de investigación. Los enfoques convencionales para la recolección de sangre en ratones son el corte de cola cuando se necesita menos de 100 μL de muestra1. Sin embargo, si se requieren más de 100 μl de sangre en un punto de tiempo no terminal, el sangrado retroorbital, submandibular o la recolección de sangre submentonianos son las técnicas más comúnmente consideradas2. En algunas ocasiones, el cateterismo de la vena yugular a través de una incisión quirúrgica se adoptó como un método alternativo3.
Sin embargo, los métodos anteriores son perjudiciales para los ratones. Al mejor de nuestro conocimiento, el método retroorbital no es ampliamente aceptado debido al riesgo potencial de complicaciones4,5. El trauma relacionado con la operación no solo ocurre en la zona visible6,7, sino también en la órbita6. Además, la recolección de sangre submandibular es estresante8 y puede estar asociada con un sangrado excesivo de2,9. Basándonos en nuestra investigación anterior10,11, aquí presentamos una nueva estrategia para la recolección de sangre de la vena subclana en ratones. Se presentan y discuten la seguridad, la viabilidad y el volumen sanguíneo obtenido con esta técnica.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este informe representa una extensión de investigaciones previas sobre el muestreo de sangre a través de la punción de la vena subclana en ratas11. Como el ratón es el animal de investigación más comúnmente utilizado, sería valioso para ver si esta técnica también se puede aplicar a los ratones. El desafío proviene del diámetro relativamente más pequeño de la vena subclaviana.
En la presente investigación, descubrimos que la punción subclaviana en ratones es una forma factible y confiable de recolectar sangre. En comparación con los métodos convencionales como el corte de la vena de cola o la recolección de sangre orbital, no hay problemas éticos del método actual. Todos los animales sobrevivieron después de este procedimiento sin suplementos líquidos después de alrededor de 200 μL de extracción de sangre, y los animales podrían ser utilizados para otros estudios experimentales. Teóricamente, la extracción total de la muestra no pudo llegar a más del 10% del volumen total circulante de la sangre cada vez y el volumen total de un animal adulto es de 55 a 70 mL/kg de peso corporal5. Para los ratones utilizados en esta investigación (21,6-28.3 g), la extracción de volumen máximo debe ser de alrededor de 200 μL. Por lo tanto, hemos fijado la cantidad de muestreo de sangre alrededor de 200 μL para cada ratón. La incapacidad para medir la presión arterial, la frecuencia cardíaca y otros parámetros de estrés son las principales limitaciones de este informe.
La anestesia general suficiente es otro problema importante para garantizar el éxito de la punción. Los ratones deben permanecer en silencio durante el procedimiento de punción para evitar el riesgo de lesionar el recipiente por la aguja. Descubrimos que el pentobarbital sódico a 60 mg/kg para la anestesia general podría satisfacer la profundidad ideal de la anestesia. Una desventaja de este agente es el tiempo de recuperación relativamente largo (promediando unos 30 minutos). En algunos institutos, la inhalación de isoflurano se utiliza para el tiempo de recuperación corto y debe tenerse en cuenta como una opción de anestesia alternativa15.
La ubicación de la vena subclaviana se muestra en la figura 4. Debido a la pared delgada y a la baja presión en la vena, la pared anterior y posterior de la vena subclática se acoplaría entre sí bajo la presión de una aguja mientras la aguja avanza (figura 5A). Mientras retira el émbolo lentamente hacia atrás, las paredes adjuntas se separarán espontáneamente, y la punta de la aguja podría entrar en la cavidad verdadera del recipiente y la sangre podría drenar en la jeringa bajo presión negativa sostenida (figura 5b). El uso de un sistema de recolección de sangre al vacío16 también podría favorecer la recolección de sangre. Debido al diámetro relativamente pequeño de la vena subclana de los ratones, puede haber fallas incluso para un operador experimentado. Para un principiante, recomendamos la punción venosa subclaviana en ratas según lo reportado11. Después de varios intentos de perforación exitosos en ratas, la tasa de éxito de la punción de la vena subclaviana en ratones podría mejorarse significativamente. Asegúrese de que la ubicación exacta de la punción es sólo caudal a la mitad del hueso de la clavícula. La aguja que se mueve hacia arriba y craneal a la fosa esternal superior son otros puntos clave para garantizar una punción exitosa.
En conclusión, la punción venosa subclana es un método seguro y eficaz para la recolección de sangre en ratones. Además del corte de la vena de la cola y la recolección de sangre del plexo retro-orbital, este método es factible, seguro y adecuado para investigaciones observacionales en varios momentos en ratones.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por la subvención de la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China no. 81670269, no. 81500355 y no. 81500226.
Materials
| 1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
| 75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
| adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
| canvas gloves | for anesthesia | ||
| electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
| epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
| heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
| mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
| needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
| pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
| physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
| stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
| tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C | |
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