يصف لنا طريقة لتقييم أثر الحصانة موجودة مسبقاً ضد فيروس حمى الدنج في عدوى فيروس زيكا باستخدام مصل الدم البشري وخلايا الإنسان الأولية، والكمي العدوى بالكمية في الوقت الحقيقي تفاعل البوليميراز المتسلسل.
وادي ظهور مصفر Zika والمضاعفات العصبية، مثل متلازمة غيلان-باريه وصغر الرأس عند الرضع، الشواغل المتعلقة بالسلامة العامة الخطيرة. من بين عوامل الخطر، يشكل تعزيز تعتمد على جسم (ADE) التهديد الأكثر أهمية، كما الأخيرة ظهور الفيروس Zika (زيكف) أساسا في المجالات التي تعرضت فيها السكان وفي حالة من الحصانة السابقة إلى أخرى وثيقة الصلة flaviviruses، وبخاصة فيروس حمى الدنج (DENV). هنا، يمكننا وصف بروتوكول للتحديد الكمي لأثر أضداد المصل البشري DENV على الإصابة زيكف في الخلايا البشرية الرئيسية أو خطوط الخلايا.
من بين الأمراض الفيروسية المنقولة بالبعوض، العدوى Zika واحد من أكثر سريرياً هامة1. بسبب العدوى مصفر زيكف التي، في معظم الحالات، يستخدم بعوض الزاعجة المصرية ك ناقل الابتدائي1،2. ومع ذلك، هناك الدراسات التي أبلغت عن Aedes albopictus كناقل الأولية في بعض حالات تفشي زيكف3. على الرغم من أن الإصابة أعراض في كثير من الحالات، الأعراض الأكثر شيوعاً هي الحمى والصداع و الأم العضلات2. لا تتوفر أي علاج أو لقاح للإصابة زيكف والعلاج المتاحة في معظمها داعمة. الأخيرة تفشي زيكف في أمريكا الجنوبية أدت إلى الحالات الشديدة من المرض، وزيادة الاضطرابات النمائية في الأجنة يدعى صعل2برنامج تقريبا. كما أن أمريكا الجنوبية منطقة مستوطنة إلى سيتناقش عدة مثل الفيروس DENV وغرب النيل، من الأهمية بمكان للتحقيق في ما إذا كانت الحصانة السابقة إلى أخرى flavivirus(es) يلعب دوراً في شدة زيكف العدوى والمرض.
على مر العصور، تطورت الفيروسات استراتيجيات مختلفة لزيادة فرصهم للعدوى من أجل السيطرة على آليات الخلية المضيفة وقمع استجابة الأدوية المضادة للفيروسات. واحدة من أروع من كل ما هو استخدام الأجسام المضادة المناعية قبل المضيف بالفيروسات لتعزيز تكرارها مع ظاهرة ADE4. ADE عبر جميع اللقاح أربعة من DENV وقد درست بشكل جيد وأظهر زيادة التتر الفيروسية والأمراض نتيجة5،،من67. في دراسة سابقة في المختبر، وقد أظهرنا زيادة كبيرة في زيكف النسخ المتماثل بسبب الموجودة مسبقاً DENV الحصانة في الخلايا المناعية البشرية الأولية8. كما أظهرنا أسلوب ذات صلة في المختبر لقياس قدرة DENV الموجودة من قبل الأجسام المضادة لتحسين النسخ المتماثل زيكف في الخلايا الأولية.
يستخدم البروتوكول الذي وضعنا عينات مصل الدم البشري الذي يتم اختباره لتحييد DENV في تسيد-50 أو فحوصات البلاك الحد من تحييد الاختبار (طباعة)، جنبا إلى جنب مع زيكف في ذات الصلة بيولوجيا الخلايا أو الخلايا المشتقة من الأنسجة التي يمكن أن تصيب زيكف.
وقد أعاق ه DENV الأجسام المضادة مما يؤدي إلى ADE اللقاح DENV الأخرى تطوير لقاح فعال11. وينتمي إلى نفس العائلة، فيروسات مصفرة، زيكف التماثل كبير مع فلافيفيروسيس الأخرى، لا سيما DENV12. والهدف الرئيسي لتحييد الأجسام المضادة لكل من زيكف و DENV هو البروتين المغلف، الذي أسهم الت?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل سخاء 1R21AI129881-01 (إلى وماستريخت)، وأموال بدء التشغيل من الوطني المختبرات الأمراض المعدية الناشئة، وفي كلية الطب بجامعة بوسطن.
Fetal Bovine Serum | GEMINI | 100-106 | |
iCycler | BioRad | 785BR02188 | Model No. CFX96 Optics Module |
Microfuge 18 Centrifuge | Beckman Coulter | 367160 | |
Nanodrop-1000 | Thermoscientific | 1072 | |
Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit | Qiagen | 204154 | Used for 1 step RT-qPCR |
RNeasy RNA Isolation Kit | Qiagen | 74106 | Used for RNA extraction |
RPMI-medium | Gibco | 11875093 |