ひと初代細胞におけるジカの抗体依存性強化の定量化
Summary
量的なリアルタイムのポリメラーゼの連鎖反応による感染症の定量化、ひと初代細胞、ひと血清を用いたデング ウイルスに対する耐性が既存のジカ ウイルス感染に及ぼす影響を評価する方法について述べる。
Abstract
フラビ ウイルス ジカとギランバレー症候群や乳児、小頭症などの神経合併症の最近の出現は深刻な公共の安全の懸念をもたらしています。ジカ ウイルス (ZIKV) の最近の再出現は、地域人口がさらされているし、他の密接に関連する事前の免疫の状態は、主に、最も重要な脅威となる抗体依存的な増強 (ADE) 危険因子のうち発現、特にデング熱ウイルス (DENV)。ここでは、ひと初代細胞または細胞株における ZIKV 感染 DENV に対する血清抗体の効果を定量化するためのプロトコルについて述べる。
Introduction
蚊媒介性ウイルス疾患、間ジカ感染症は臨床的に最も重要な1であります。感染は、ほとんどの場合、その主要なベクトル1,2としてネッタイシマカを使用する ZIKV フラビ ウイルスによって引き起こされます。ただし、いくつかの ZIKV の発生3の主要なベクトルとしてヒトスジシマカを報告している研究もあります。感染症は多くの場合無症候性であるが、最も一般的な症状は発熱、頭痛、筋肉痛2。治療法やワクチン使用可能なありません ZIKV 感染症のため、利用できる治療法は主に支持。南アメリカの ZIKV の最近の発生は、重症の病気と小頭症2という名前の胎児の神経発達障害で、約 20 倍の増加をもたらした。南アメリカは、DENV と西ナイル ウイルスなどいくつかのアルボ ウイルスに固有の領域は、他の flavivirus(es) に前の免疫が ZIKV 感染症と疾患の重症度の役割を果たしているかどうかを調査することが重要です。
昔からウイルスは宿主の細胞機構を引き継ぐし、抗ウイルス応答を抑制するために感染の機会を増やすにさまざまな戦略を進化してきました。すべての中で最も魅力的なの 1 つは、ADE4現象とのレプリケーションを強化するウイルスによるホスト前免疫抗体の使用です。よく学び、ウイルス抗体価と疾患の結果5,6,7を向上させる実証 DENV の 4 血清型すべてにわたって ADE がされています。以前の in vitro の研究では、既存のプライマリひと免疫細胞8DENV 免疫のために ZIKV レプリケーションの重要な拡張機能を示しました。また、初代培養細胞で ZIKV のレプリケーションを強化する DENV 既存抗体の機能を定量化する関連する in vitro 法を示した。
私たちが開発したプロトコル使用テスト、血清サンプル TCID 50 DENV 中和または生体関連セルまたは ZIKV に感染することができます組織由来細胞の ZIKV と共に、プラック減数中和試験 (PRNT) の試金。
Protocol
Representative Results
Discussion
その他 DENV 血清型の ADE につながる DENV 抗体の交差反応性は、効果的なワクチン11の開発を阻害しています。ZIKV は同じ、フラビに属し、他の発現、特に DENV12とかなり相同性を持っています。ZIKV、DENV 中和抗体の主なターゲットは、2 つのウイルス13,14,15間非常に高い構造と第四紀のシー?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、1R21AI129881-01 (T.M.C.) へ、国立新興感染症研究所とボストン大学医学部からスタートアップ資金によって支えられた寛大。
Materials
| Fetal Bovine Serum | GEMINI | 100-106 | |
| iCycler | BioRad | 785BR02188 | Model No. CFX96 Optics Module |
| Microfuge 18 Centrifuge | Beckman Coulter | 367160 | |
| Nanodrop-1000 | Thermoscientific | 1072 | |
| Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit | Qiagen | 204154 | Used for 1 step RT-qPCR |
| RNeasy RNA Isolation Kit | Qiagen | 74106 | Used for RNA extraction |
| RPMI-medium | Gibco | 11875093 |
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