בידוד, שילוב אנטנות קציר-אור של צורניות Cyclotella Meneghiniana בתוך ליפוזומים עם שומנים תילקואיד
Summary
כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבודד fucoxanthin כלורופיל a/c מחייב חלבונים (FCP) מ- diatoms ועד לשלב אותם בתוך ליפוזומים עם יצירות השומנים טבעית ללמוד עירור העברת אנרגיה על שינויים בהרכב יון.
Abstract
הביצועים פוטוסינתטיים של צמחים, אצות, diatoms בחוזקה תלוי התקנה מהירה ויעילה של אור קציר, אנרגיה בתהליכי העברה קרום תילקואיד של מהכלורופלסט. האור קציר האנטנה של diatoms, שנקרא fucoxanthin כלורופיל a/c איגוד החלבונים (FCP), נדרשים עבור בליעת אור ומרכזי יעיל להעברת התגובה פוטוסינתטיים גם לגבי צילום-הגנה מפני אור מוגזמת. הבורר בין שתי פונקציות הוא עניין ארוכת שנים של מחקר. רבים מהמחקרים הללו בוצעו עם FCP ב הקזאין דטרגנט. ללימודים אינטראקציה, דטרגנטים הוסרו, מה שהוביל את מצבור לא ספציפי של מתחמי FCP. בגישה זו, קשה יותר להפלות בין חפצים נתונים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית. לפיכך, ניתן לקבל מידע בעל ערך רב יותר אודות FCP ואור ממברנה מאוגד אחרים קציר מתחמי על ידי לימוד אינטראקציות חלבון-חלבון, העברת אנרגיה ותכונות ספקטרוסקופיות אחרים אם הם מוטבעים בסביבתם השומנים מקורית. היתרון העיקרי הוא שיש ליפוזומים בגודל מוגדר, יחס של ליפיד/חלבונים מאת אשר נשלטת היקף FCP קיבוץ באשכולות. עוד יותר, שינויים בהרכב pH ויון המסדירים אור קציר ויוו יכול בקלות להיות מדומה. בהשוואה ממברנה תילקואיד, ליפוזומים הם הומוגני יותר ומורכב פחות, מה שהופך אותו קל יותר להשיג ולהבין נתונים ספקטרוסקופיות. הפרוטוקול מתאר את ההליך של בידוד FCP, טיהור, הכנה ליפוזום תיאגוד FCP לתוך ליפוזומים להרכב השומנים הטבעיים. היא תוצאה של יישום אופייני הם נתנו ודן.
Introduction
אורגניזמים פוטוסינתטיים כגון diatoms חייב להתמודד עם המשתנה לתנאי תאורה ולהגיב עם מנגנונים מתוחכמים להתאקלמות יעילות גבוהה פוטוסינתטיים ומפלגות להגן מפני נזק חמצוני-צילום הנגרמת על ידי האור מוגזמת. תהליך אור-מגן הגדולות ב פרוקריוטים פוטוסינתטיים הוא אנרגיה גבוהה quenching (qE) האור נספג המתרחשת כמו התרומה העיקרית-פוטו אטמוספרי quenching (NPQ) תחת מתח אור תנאים1,2 ,3. האור האיסוף מתחמי אנטנות (LHC) מעורבים בוויסות עירור אנרגיה העברת מסלולים. בתגובה אור גבוהה המושרה נמוך- pH של לומן כלורופלסט, מתגי מערכת אנטנה מן האור קציר למדינה המדינה quenching. מדינה dissipative אנרגיה מגן photosystems (PS) ואת שאר מכלולי ממברנה תילקואיד צילום-חמצון. ב פוטוסינתטיים פרוקריוטים, ה-qE בדרך כלל הנגרמת על ידי שני גורמים1,2,3. גורם אחד הוא האור מיוחדים קציר חלבון המגיב ה- pHנמוך. החלבון PsbS מעוררת את קיוE צמחים גבוהים יותר4. LhcSRs5, מווסת על ידי פעילות PsbS, זירוז שE אצות6. Diatoms בעלי חלבונים כמו Lhcx אשר לארגונם הקשורים LHCSRs7,8,9,10.
הגורם השני של קיוE הוא מחזור xanthophyll בהם קרוטנואידים של האנטנה המרה לצורה צילום-מגן על ידי דה-epoxidation, חזר על-ידי epoxidation. צמחים, אצות, violaxanthin מומר וזאקסנטין. ב- diatoms, diadinoxanthin מומר diatoxanthin, אשר לאחר מכן עולה בקנה אחד עם מידת NPQ11. האור צורניות קציר אנטנה בעלת כמה מוזרויות למרות שזה אבולוציונית הקשורים LHCs בשאריות אצות וצמחים. מתג האור קציר להגנה-צילום מהיר מאוד, הקיבולת NPQ גבוה יותר לעומת צמחים12. זו יכולה להיות סיבה אחת למה diatoms מצליחים מאוד בתוך נישות אקולוגיות שונות כך הם אחראים עד 45% של אושיאניק הייצור הראשוני נטו13. לכן, צורניות אור קציר מערכות הן אובייקט מעניין של מחקר פוטוסינתזה.
Diatoms, כאילו המין ממוקדת Cyclotella meneghiniana, בעלי אור פנימי תילקואיד קציר מערכות קרוי הפיגמנטים הם לאגד – fucoxanthin, כלורופיל (קלוא) ו- c, ולכן האור FCP. קציר חלבונים, כגון FCPs, הם מוטבע במערכת ממברנה תילקואיד המורכבת ממספר שכבות קרום. Diatoms יוצרים להקות של שלושה thylakoids. מתחם זה המצב מקשה ללמוד אותן ברמה המולקולרית בתוך הקרומית תילקואיד. בנוסף, רכיבים רבים לתרום ברגולציה של אור קציר (ראה לעיל). לכן, בגישות רבות, מתחמי הם בודדו אותנו מהמתרחש קרום באמצעות דטרגנטים קלים, כגון n-Dodecyl-β-D-maltopyranoside (β-DDM), אשר solubilize את הקרום אבל לשמור את מתחמי FCP ללא שינוי. מחקרים רבים ספקטרוסקופיות בוצעו באמצעות solubilized FCP לחקור את התפלגות האנרגיה העברת14,15,16,17. עם זאת, גישה זו לשעבר הייתה מוגבלת מאחר ברגולציה של העברת האנרגיה צריך excitonic אינטראקציה עם מתחמי אנטנות או photosystems אחרים. לפיכך, אלו סוגים של מחקרים לא יכול להתבצע עם מתחמי solubilized כי האינטראקציה בין מתחמי אובד.
תכונה חשובה בתקנה האנטנה הוא “מולקולרי הצפיפות” של האנטנה, photosystems קרום תילקואיד18. . לשעבר, בגישה פשוטה בוצע כדי לדמות את האפקט הזה במבחנה. ? הנוזל הוסר, מה שמוביל צבירה אקראי של מתחמי אנטנות. למרות שחלק מהנתונים סביר היה מתקבל על ידי17,זו הגישה19, הסרת דטרגנט אינו משקף את המצב ויוו , יש כמה מגבלות מאז מתחמי לא אינטראקציה בעוד השלישון הרגיל שלהם מבנה.
השימוש ליפוזומים מתגבר על כמה מן המגבלות לשעבר. מבנה שלישוני הוא עדיין מלא ללא פגע. קרום ליפוזום מספק סביבה ומעין מקורית מתחמי אנטנות. הקרום מפריד את החלק הפנימי של ליפוזום מהסביבה שבחוץ. באמצעים אלה, ליפוזומים מספקים שני תאים התגובה ללימודים של יון ו- pH מעברי צבע כמו גם לגבי תחבורה תהליכים. עוד יותר, הפרמטרים של המערכת ניסיוני יכול להיות נשלט בקלות רבה יותר ללימודי תילקואיד ממברנה. ליפוזומים הוצגו כבר להיות כלי מצוין ללמוד מתחמי פוטוסינתטיים. מוקד מרכזי בעבר היה על צמח LHC שבו ההשפעה של הרכב השומנים שינו נבחנה ב- LHC II20. גישות אחרות, אינטראקציית חלבון בין II LHC שונים היו ובדוקים21. כמו כן, מחקרים באצות בוצעו המתארים קיבוץ באשכולות ספונטני בין LHC22. בהתחשב החשיבות של diatoms עבור המערכת האקולוגית הימית, בוצעו מחקרים מעטים יחסית עם מתחמי אנטנות של diatoms. שני מחקרים חקרו את מתחמי אנטנות של ממוקדת Cyclotella meneghiniana, איפה קיבוץ באשכולות של האנטנה FCP23 ואת ההיענות של FCP-מעברי צבע אלקטרוכימי24 הוצגו. לפיכך, ליפוזומים הינם כלי מצוין ללמוד צורניות אנטנות, שלהם אינטראקציה, תקנה בתנאים כמעט מקורי. ליפוזומים רב-תכליתי מאז תנאים רבים כמו הרכב השומנים, גודל ליפוזום, חלבון צפיפות, יכול להיות נשלט השלב מימית שמסביב. יתר על כן, השיטה דורשת כמויות נמוכות של דגימות. מערכת ניסיונית היא מאוד לשחזור ועמיד. מידור של ליפוזומים מאפשר ללמוד pH, יון מעברי צבע, אשר חשובים גורמים ברגולציה של מתחמי אנטנות.
כאן נתאר את ניתוקה של מתחמי אנטנות FCP מ ג meneghiniana ואת ההתאגדות שלהם בתוך ליפוזומים להרכב השומנים תילקואיד טבעי. בנוסף, אנחנו מספקים נתונים למופת ספקטרוסקופיות פלואורסנציה solubilized FCP ולהשוות אותם עם FCP בליפוזומים. השיטה מסכמת ידע ופרוטוקולים סטנדרטיים המתקבל השיפורים של Gundermann ו- Büchel 201223, נטלי ואח 201622אחמד ו-2017 Dietzel24.
איור 1: ייצוג סכמטי של זרימת העבודה. (1) מתייחס פסקה 1 המתאר צמיחת תאים, הפרעה ובידוד תילקואיד עם בעקבות ההפרדה FCP סוכרוז צפיפות מעברי צבע; מ ג -תאיםCyclotella meneghiniana . (2) הכנת התערובת השומנים תילקואיד טבעי (MGDG, DGDG ו- SQDG) שמתואר בפיסקה 2 ויצירת השומנים-דטרגנט הקזאין עם octylglycoside (OG). גודל מוגדר השומנים-מיצלה מושגת על ידי ההבלטה באמצעות ממברנות של קוטר נקבובית מוגדרים. FCP ואת השומנים-הקזאין האחידה-ליפופרוטאין מוגדרות מראש: יחס חלבון ודטרגנטים ו β-DDM הם מוסרים דרך מבוקר דיאליזה ויוצרים FCP proteoliposomes. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Protocol
Representative Results
Discussion
ליפוזומים FCP להרכב השומנים הטבעיים מספקים כלי שימושי, פשוט לשחזור לחקור את מאפייני ספקטרוסקופיות במבחנה. הסביבה השומנים ב FCP ליפוזומים דומה המצב בתוך קרום תילקואיד, והוליד תוצאות ניסויית כי הם קרובים יותר בתנאי הטבע.
ישנם מספר יתרונות של שימוש meneghiniana ג מערכת מודל ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים רנא אורנה חריטן אחמד לסיוע FCP טיהור. פרופסור קלאודיה Büchel הוא הודה המועיל דיונים, לקרוא את כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי קרן מחקר גרמני כדי LD (DI1956-1/1) ושל קרן הומבולדט עבור מלגת פיודור-Lynen LD.
Materials
| 500 ml centrifuge vials | |||
| high speed centrifuge | Heraeus | ||
| Bead Mill VI 2 | Edmund-Bühler (edmund-buehler.de) | newer version: Vibrogen-Zellmühle Vl 6 | |
| Silibeads S 400 µm | Sigmund-Lindner.com | 5223-7 | |
| Silibeads S 1,-1,3 mm | Sigmund-Lindner.com | 4504 | |
| VitraPOR filter funnel – por1 | ROBU GmbH | 21121 | |
| polycarbonate ultracentrifuagtion vials (30 mL) for T-865 | Beranek Laborgeräte (Laborgeraete-beranek.de) | 314348 | |
| Ultracentrifuge Discovery 90SE | Sorvall | n.a. | |
| rotor T 865 | ThermoFisher Scientific (thermofisher.com) | 51411 | |
| Neubauer Cell Counter Chamber (improved) | Carl Roth Laborbedarf (Carlroth.com) | T729.1 | |
| Zeiss Mikroskop Primostar (7) | Optik-Pro (optik-pro.de) | 51428 | |
| optical glass cuvettes (6040-OG) | Hellma Analytics (hellma-analytics.com) | "6040-10-10" | |
| V-630 UV-VIS Spectrophotometer (incl. software) | Jasco (jasco.de) | V-630 | |
| n-Dodecyl-β-D-Maltopyranoside | ANATRACE (anatrace.com) | D310LA | |
| Ultra-Clear tubes 17 ml for AH629 | Beranek Laborgeräte (Laborgeraete-beranek.de) | 344061 | |
| rotor AH629-17-mL | ThermoFisher Scientific (thermofisher.com) | 54285 | |
| Membrane concentrator_Centriprep 30 kDa cutoff | Millipore (merckmillipore.com) | 4307 | |
| Biometra Minigel-Twin | Analytik Jena AG (analytik-jena.de) | 846-010-100 | |
| Silver Stain Plus Kit | Bio-Rad (bio-rad.com) | 1610449 | |
| libre office spread sheet | The document foundation | https://de.libreoffice.org/download/libreoffice-still/ | |
| special glass cuvettes for fluorescence (101-0S) | Hellma Analytics (hellma-analytics.com) | 101-10-20 | |
| Spectrofluorometer FP-6500 (incl. Software) | Jasco (jasco.de) | FP-6500 | |
| SDS-loading buffer Roti-Load | ROTH (carlroth.com) | K929.1 | |
| n-octyl β-D-glucopyranoside | ANATRACE (anatrace.com) | O311 | |
| Monogalactosyl Diaclyglycerol (MGDG) | Larodan AB (larodan.com) | 59-1300 | make stock solution in chloroform |
| Digalactosyl Diacylglycerol (DGDG) | Larodan AB (larodan.com) | 59-1310 | make stock solution in chloroform |
| Sulphoquinovosyl Diacylglycerol (SQDG) | Larodan AB (larodan.com) | 59-1230 | make stock solution in chloroform |
| L-alpha-Phosphatidylglycerol (PG) | Larodan AB (larodan.com) | 37-0150 | make stock solution in chloroform |
| L-α-Phosphatidylcholine | Sigma-Aldrich (sigmaaldrich.com) | P3782 SIGMA | make stock solution in chloroform |
| sonicator bath S-50TH | Sonicor (getmedonline.com | SONICOR-S-50TH | |
| mini-Extruder | Avanti Polar Lipids (Avanti.com) | 610000 | |
| Nuleopore polycarbonate membrane | Avanti Polar Lipids (Avanti.com) | 610005 | |
| dialysis membrane Visking 14 kDa cutoff | ROTH (carlroth.com) | 0653.1 | boil in destilled water before use |
| Biobeads SM2 Adsorbent | Biorad (Bio-rad.com) | 152-3920 | |
| sucrose epichlorhydrin copolymer – Ficoll 400 | Sigma-Aldrich (sigmaaldrich.com) | F4375 | |
| Polycarbonate ultracentrifuagtion vials (2.7 mL) for TFT 80.4 | Beranek Laborgeräte (Laborgeraete-beranek.de) | 252150 | |
| rotor TFT 80.4 | Millipore (merckmillipore.com) | 54356 | |
| material listed in order of appearance | |||
| For specific safety instructions please refer to material safety sheets and repective manuals. | |||
| Standard lab material and substances are not listed. |
References
- Eberhard, S., Finazzi, G., Wollman, F. A. The Dynamics of Photosynthesis. Annual Review of Genetics. 42, 463-515 (2008).
- Li, Z. R., Wakao, S., Fischer, B. B., Niyogi, K. K. Sensing and Responding to Excess Light. Annual Review of Plant Biology. 60, 239-260 (2009).
- Niyogi, K. K., Truong, T. B. Evolution of flexible non-photochemical quenching mechanisms that regulate light harvesting in oxygenic photosynthesis. Current Opinion in Plant Biology. 16 (3), 307-314 (2013).
- Li, X. -. P., et al. A pigment-binding protein essential for regulation of photosynthetic light harvesting. Nature. 403 (6768), 391-395 (2000).
- Peers, G., et al. An ancient light-harvesting protein is critical for the regulation of algal photosynthesis. Nature. 462 (7272), 518-521 (2009).
- Correa-Galvis, V., et al. Photosystem II Subunit PsbS Is Involved in the Induction of LHCSR Protein-dependent Energy Dissipation in Chlamydomonas reinhardtii. The Journal of biological chemistry. 291 (33), 17478-17487 (2016).
- Bailleul, B., et al. An atypical member of the light-harvesting complex stress-related protein family modulates diatom responses to light. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (42), 18214-18219 (2010).
- Taddei, L., et al. Multisignal control of expression of the LHCX protein family in the marine diatom Phaeodactylum tricornutum. Journal of experimental botany. 67 (13), 3939-3951 (2016).
- Lepetit, B., et al. The diatom Phaeodactylum tricornutum adjusts nonphotochemical fluorescence quenching capacity in response to dynamic light via fine-tuned Lhcx and xanthophyll cycle pigment synthesis. New Phytologist. 214 (1), 205-218 (2017).
- Büchel, C. Evolution and function of light harvesting proteins. Journal of Plant Physiology. 172, 62-75 (2015).
- Lavaud, J., Rousseau, B., van Gorkom, H. J., Etienne, A. -. L. Influence of the Diadinoxanthin Pool Size on Photoprotection in the Marine Planktonic Diatom Phaeodactylum tricornutum. Plant Physiology. 129 (3), 1398-1406 (2002).
- Ruban, A., et al. The super-excess energy dissipation in diatom algae: comparative analysis with higher plants. Photosynthesis Research. 82 (2), 165-175 (2004).
- Mann, D. G. The species concept in diatoms. Phycologia. 38 (6), 437-495 (1999).
- Papagiannakis, E., van Stokkum, I. H. M., Fey, H., Büchel, C., van Grondelle, R. Spectroscopic Characterization of the Excitation Energy Transfer in the Fucoxanthin-Chlorophyll Protein of Diatoms. Photosynthesis Research. 86 (1-2), 241-250 (2005).
- Premvardhan, L., Robert, B., Beer, A., Büchel, C. Pigment organization in fucoxanthin chlorophyll a/c2 proteins (FCP) based on resonance Raman spectroscgopy and sequence analysis. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1797 (9), 1647-1656 (2010).
- Gildenhoff, N., Herz, J., Gundermann, K., Büchel, C., Wachtveitl, J. The excitation energy transfer in the trimeric fucoxanthin-chlorophyll protein from Cyclotella meneghiniana analyzed by polarized transient absorption spectroscopy. Chemical Physics. 373 (1), 104-109 (2010).
- Ramanan, C., et al. Exploring the mechanism(s) of energy dissipation in the light harvesting complex of the photosynthetic algae Cyclotella meneghiniana. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1837 (9), 1507-1513 (2014).
- Haferkamp, S., Kirchhoff, H. Significance of molecular crowding in grana membranes of higher plants for light harvesting by photosystem II. Photosynthesis Research. 95 (2-3), 129-134 (2008).
- Wahadoszamen, M., et al. Stark fluorescence spectroscopy reveals two emitting sites in the dissipative state of FCP antennas. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1837 (1), 193-200 (2014).
- Zhou, F., et al. Effect of monogalactosyldiacylglycerol on the interaction between photosystem II core complex and its antenna complexes in liposomes of thylakoid lipids. Photosynthesis Research. 99 (3), 185-193 (2009).
- Moya, I., Silvestri, M., Vallon, O., Cinque, G., Bassi, R. Time-resolved fluorescence analysis of the photosystem II antenna proteins in detergent micelles and liposomes. Biochemistry. 40 (42), 12552-12561 (2001).
- Natali, A., et al. Light-harvesting Complexes (LHCs) Cluster Spontaneously in Membrane Environment Leading to Shortening of Their Excited State Lifetimes. Journal of Biological Chemistry. 291 (32), 16730-16739 (2016).
- Gundermann, K., Büchel, C. Factors determining the fluorescence yield of fucoxanthin-chlorophyll complexes (FCP) involved in non-photochemical quenching in diatoms. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1817 (7), 1044-1052 (2012).
- Ahmad, R. A., Dietzel, L. Relaxation of cellular K+ gradients by valinomycin induces diatoxanthin accumulation in Cyclotella meneghiniana cells and alters FCPa fluorescence yield in vitro. Physiologia Plantarum. , 171-180 (2017).
- Provasoli, L., McLaughlin, J. J. A., Droop, M. R. The development of artificial media for marine algae. Archiv für Mikrobiologie. 25 (4), 392-428 (1957).
- Jeffrey, S., Humphrey, G. New spectrophotometry equations for determining chlorophyll a, chlorophyll b, chlorophyll c-1 and chlorophyll c-2 in higher plants, algae and natural phytoplankton. Biochemie und Physiologie der Pflanzen. 167, 191-194 (1975).
- Beer, A., Gundermann, K., Beckmann, J., Büchel, C. Subunit Composition and Pigmentation of Fucoxanthin−Chlorophyll Proteins in Diatoms: Evidence for a Subunit Involved in Diadinoxanthin and Diatoxanthin Binding. Biochemistry. 45 (43), 13046-13053 (2006).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Analytical Biochemistry. 166 (2), 368-379 (1987).
- Büchel, C. Fucoxanthin-Chlorophyll Proteins in Diatoms: 18 and 19 kDa Subunits Assemble into Different Oligomeric States. Biochemistry. 42 (44), 13027-13034 (2003).
- Vieler, A., Wilhelm, C., Goss, R., Süß, R., Schiller, J. The lipid composition of the unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii and the diatom Cyclotella meneghiniana investigated by MALDI-TOF MS and TLC. Chemistry and Physics of Lipids. 150 (2), 143-155 (2007).
- Gundermann, K., Büchel, C. The fluorescence yield of the trimeric fucoxanthin-chlorophyll-protein FCPa in the diatom Cyclotella meneghiniana is dependent on the amount of bound diatoxanthin. Photosynthesis Research. 95 (2-3), 229-235 (2008).
- Miloslavina, Y., et al. Ultrafast fluorescence study on the location and mechanism of non-photochemical quenching in diatoms. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1787 (10), 1189-1197 (2009).
- Grouneva, I., Jakob, T., Wilhelm, C., Goss, R. The regulation of xanthophyll cycle activity and of non-photochemical fluorescence quenching by two alternative electron flows in the diatoms Phaeodactylum tricornutum and Cyclotella meneghiniana. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1787 (7), 929-938 (2009).
- Chukhutsina, V. U., Büchel, C., van Amerongen, H. Disentangling two non-photochemical quenching processes in Cyclotella meneghiniana by spectrally-resolved picosecond fluorescence at 77 K. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1837 (6), 899-907 (2014).
- Ghazaryan, A., Akhtar, P., Garab, G., Lambrev, P. H., Büchel, C. Involvement of the Lhcx protein Fcp6 of the diatom Cyclotella meneghiniana in the macro-organisation and structural flexibility of thylakoid membranes. Biochimica Et Biophysica Acta-Bioenergetics. 1857 (9), 1373-1379 (2016).
- Darley, W. M. Biochemical composition. The biology of diatoms. 13, 198-223 (1977).
- Milsman, M. H. W., Schwendner, R. A., Weder, H. G. Preparation of large single bilayer liposomes by a fast and controlled dialysis. Biochimica Et Biophysica Acta. 512 (1), 147-155 (1978).
- Zumbuehl, O., Weder, H. G. Liposomes of controllable size in the range of 40 to 180 nm by defined dialysis of lipid-detergent-mixed micelles. Biochimica Et Biophysica Acta. 640 (1), 252-262 (1981).
- Verchere, A., Broutin, I., Picard, M. Photo-induced proton gradients for the in vitro investigation of bacterial efflux pumps. Scientific Reports. 2 (306), (2012).
- Chevallet, M., Luche, S., Rabilloud, T. Silver staining of proteins in polyacrylamide gels. Nature Protocols. 1 (4), 1852-1858 (2006).
