Purificación de proteínas de superficie celular biotiniladas de<em> Rhipicephalus microplus</em> Células epiteliales intestinales

Rhipicephalus microplus es la ectoparásita más significativa en términos de impacto económico en la industria ganadera de las regiones tropicales y subtropicales, ya que vectores de la fiebre de la garrapata bovina (babesiosis), la anaplasmosis y la piroplasmosis equina ^{1 , 2 , 3 , 4} . Sin embargo, los métodos convencionales como el uso de acaricidas químicos tienen inconvenientes implícitos, como la presencia de residuos químicos en la leche y la carne, y el aumento de la prevalencia de garrapatas químicamente resistentes ^{5 , 6 , 7} . En consecuencia, se ha estudiado el desarrollo de métodos alternativos de control de garrapatas, como el uso de resistencia natural bovina, el control biológico (biopesticidas) y la vacunaInes ^{4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9} .

En la búsqueda de proteínas capaces de ser utilizadas como vacunas candidatas, la investigación actual se centra en la garrapata intestinal. La pared del intestino medio se construye a partir de una sola capa de células epiteliales descansando sobre una fina lámina basal, con el exterior de la lámina basal formando una red de músculos. Las observaciones del microscopio electrónico y de luz indican que el intestino medio consiste en tres tipos de células: reserva (indiferenciada), secretora y digestiva. El número de tipos de células varía considerablemente dependiendo de la fase fisiológica. Las células secretoras y digestivas proceden de células de reserva ^{18 , 19 , 20} .

La construcción de bibliotecas de cDNAPara examinar la composición de la tripa de la garrapata ha llevado a la identificación de proteínas antigénicas, como Bm86, como potencial vacuna candidatos ^{2 , 3 , 4} . La glicoproteína Bm86 se localiza en la superficie de las células de la garrapata e induce una respuesta inmune protectora contra la garrapata del ganado vacuno ( R. microplus ). Las IgG anti-Bm86 producidas por el huésped inmunizado son ingeridas por la garrapata, reconocen este antígeno en la superficie de las células del intestino de garrapatas y, posteriormente, alteran la función e integridad del tejido del intestino de garrapata. Las vacunas basadas en antígenos Bm86 han mostrado un control efectivo de R. microplus y Rhipicephalus annulatus, al reducir el número, el peso y la capacidad reproductora de las hembras engorciadoras, lo que resulta en una infestación larval reducida en las generaciones subsiguientes de garrapatas ⁴ . Sin embargo, las vacunas basadas en Bm86 no son eficaces contra todas lasDemostró una eficacia insatisfactoria frente a algunas cepas geográficas de R. microplus , por lo que las industrias lecheras y de vacuno han adoptado mal estas vacunas ^{2 , 4} .

La capacidad de aislar las células epiteliales de la tripa de la garrapata es una innovación significativa que permitiría la progresión de la investigación para determinar la composición de la membrana de proteínas, incluyendo la morfología y la fisiología en diferentes condiciones ambientales. El método aquí descrito utiliza el agente quelante ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y el agente reductor tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP) para liberar el epitelio de sus tejidos de soporte subepitelial ¹⁰ . El epitelio se recupera tras la interrupción mecánica de los tejidos por agitación, seguido de centrifugación discontinua en gradiente en Percoll. Este artículo describe una técnica factible y novedosa para el aislamiento de la epi de garrapatasLas células celulares. Las proteínas de superficie celular biotiniladas, aisladas de la superficie de estas células epiteliales pueden analizarse subsiguientemente en aplicaciones aguas abajo tales como análisis FACS y / o LC-MS / MS.