96ウェルプレートに細胞遊走/創傷治癒を行う装置
Summary
ここでは、96ウェル細胞培養プレートに半ハイスループット細胞遊走アッセイを実行するためのプロトコルを提示します。このプロトコルは、細胞単層上で一貫性のあるスクラッチ傷を作成するには、高速、シンプルかつ経済的な方法です。
Abstract
細胞遊走は/アッセイを負傷して細胞遊走および血管新生および腫瘍転移などの他の生物学的プロセスを研究するために一般的に用いられる方法です。このアッセイでは、細胞は、コンフルエントな単層を形成するために増殖させ、機械的な傷は、デバイスとのスクラッチによって作成されます。次いで、露出領域に向かって細胞の移動速度は、イメージングによってモニターすることができます。当社の8チャンネル機械wounderは、細胞遊走アッセイに関連する問題の多くに対処するように設計されています。まず、私たちのwounderは簡単にオートクレーブ処理によって、あるいは共通の消毒剤で滅菌することができます。第二に、個別の調整可能なピンでもシャープで再現性の創傷を作成することができるように、細胞培養プレートとの接触を可能にします。第三に、wounderの両側の案内バーは、各ウェル中に一貫性のある創傷の位置を確認してください。さらにwounderのより良いハンドリングを提供できるだけでなく、クロスcontaminatを最小限に抑えるために負傷のための使い捨てのプラスチック製ピペットチップの使用イオン。結論として、我々の細胞wounderは、標準的な96ウェル培養プレートを用いて細胞遊走アッセイを行うためのユーザーフレンドリーで再現可能なデバイスと研究者に提供することができます。
Introduction
細胞遊走は、胚発生、神経発生、血管新生、創傷治癒、粘膜修復、正常な発達と病気の状況1下上皮-間葉遷移などの細胞プロセスにおいて重要な役割を果たしています。これは、シグナル伝達分子間相互作用、細胞極性、細胞骨格の再編成、マトリックスリモデリング、膜の突起と動的細胞間接着の変調2を含む多数の間および細胞内のイベントの調整を必要とする複雑なプロセスです。細胞遊走を研究することによって、細胞運動およびその関連する生化学的経路をもたらす化学物質または生体分子の発見および検証を決定することができます。この基本的なプロセスは、このような疾患の治療および薬物標的化のような種々の用途のためのプロキシとして有利に使用することができます。
創傷アッセイは、細胞遊走アッセイ3の一つです。ここでは、細胞の個々のサンプルは、部分的に、細胞が領域をカバーするように移動する露出領域を生成するために機械的手段によって除去されます。特定の時点で回収率が監視されます。多数のサンプルを取り扱う場合、そのようなサンプル内の実験的なコストと交差汚染などの問題は、問題となる可能性があります。多くの商用ツールおよびアッセイは、細胞遊走4、5、6を研究するために利用可能であるが、それらの多くは、高価で精巧な装置を必要とし、改善が依然として必要とされています。これらの理由のために、8チャンネル機械細胞wounder（ 図1）が開発されています。
我々の8チャンネル機械細胞wounderは、上記課題を解決するにいくつかのユニークな特徴を組み込んでいます。これは、96ウェル培養プレートフォーマットでの細胞遊走/創傷アッセイを実行するための柔軟性を提供します。調整可能な区idingバーのデザインは、スクラッチ領域は、各ウェルの中央の位置にあることを保証します。 wounder培養プレートの様々なブランドのために適用可能であるように、また、ガイドバーの高さを調整することができます。最後に、調整可能な創傷ピンの設計は、同時かつ再現性の創傷7、8を達成するために、培養皿の表面にピペットチップであっても接触を可能にします。
Protocol
Representative Results
Discussion
私たちの細胞wounderは、従来の細胞遊走アッセイの問題を解決するにはいくつかのユニークな特徴を持っています。 8チャンネル機械細胞wounderは、オートクレーブにより滅菌することができる長寿命で高品位のステンレス鋼（スチール304）で構成されています。市販の96ウェル培養プレートのほとんど全ての商業ブランドがあるため、調整可能なガイドバーのこの機械的な細胞wounderと共に使用…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、このwounderのプロトタイプを製造する際に氏タムポー・レオン氏ウォンチー金武とその技術的なスキルのための科学学部ワークショップの技術スタッフ、香港バプティスト大学、アドバイスに感謝したいと思います。
Materials
| 96-well cell culture plate | Nunc | 167008 | Other brands of 96-well cell culture plate can also be used |
| P10 pipette tips | Axygen | 301-03-051 | Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound |
| Wounder | R&P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Fetal bovine serum | Gibco | 26140079 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140122 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3393 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Gelatin from bovine skin | Sigma | G9391 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
References
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