Eine Vorrichtung zur Durchführung Zellmigration / Wundheilung in einer 96-Well-Platte
Summary
Hier stellen wir ein Protokoll eine halb hohem Durchsatz Zellmigrationsassay auf einer 96-well Zellkulturplatte durchzuführen. Dieses Protokoll ist eine schnelle, einfache und wirtschaftliche Verfahren in Übereinstimmung Kratzwunden auf einer Zell-Monoschicht zu erzeugen.
Abstract
Die Zellmigration / Test verwunden ist eine häufig verwendete Methode der Zellmigration und andere biologische Prozesse, wie Angiogenese und Tumormetastasierung zu studieren. In diesem Assay werden die Zellen gezüchtet eine konfluente Monoschicht und eine mechanische Verwundung durch Kratzen mit einem Gerät erzeugt wird, zu bilden. Dann wird die Migrationsrate der Zellen gegenüber dem entblößten Bereich kann durch Bildgebung überwacht werden. Unsere 8-Kanal-mechanischen wounder soll die meisten Probleme mit der Zellmigrationsassay zugeordnet zu bewältigen. Zum einen können unsere wounder leicht durch Autoklavieren oder mit üblichen Desinfektionsmittel sterilisiert werden. Zweitens erlauben die individuell einstellbare Stifte auch mit der Zellkulturplatte in Verbindung, damit scharf und reproduzierbar Wunden geschaffen werden kann. Drittens sorgen die Führungsstäbe auf beiden Seiten der wounder konsistente Verwundung Position in jeder Vertiefung. Die Verwendung von Einweg-Kunststoff-Pipettenspitzen für Verwundung weiter eine bessere Handhabung des wounder bieten kann sowie Quer VERSCHMUTZ zu minimierenIon. Abschließend kann unsere Zelle wounder Forscher bieten mit einer benutzerfreundlichen und reproduzierbare Vorrichtung zur Durchführung des Zellmigration Test, um die Standard-96-Well-Kulturplatte verwendet.
Introduction
Zellmigration spielt eine wichtige Rolle bei der zellulären Prozessen, wie der Embryonalentwicklung, der Neurogenese, Angiogenese, Wundheilung, Schleimhautreparatur, epithelial-mesenchymalen-Übergänge unter normalen Entwicklung und Krankheitslage 1. Es ist ein komplizierter Prozess, der die Koordination zahlreicher inter- und intrazelluläre Ereignisse , einschließlich Signalmolekül – Wechselwirkungen, Zellpolarisation, Zytoskelett – Reorganisation, Matrixumbau, Membran Vorsprung und dynamische Zell-Zell – Adhäsion Modulation 2 beinhaltet. Durch das Studium der Zellmigration, die Entdeckung und Validierung von Chemikalien oder Biomoleküle, die zu Zellbewegung und seine verwandten biochemischen Wege bestimmt werden. Dieser grundlegende Prozess kann für verschiedene Anwendungen, wie zum Beispiel der Behandlung von Krankheiten und Drug-Targeting-nutzbringend als Proxy verwendet werden.
Die Verwundung Assay ist einer der Zellmigrationsassays 3. Hier wird eineinzelne Probe von Zellen teilweise durch mechanische Mittel entfernt werden, um ein entblößten Bereich zu produzieren, wo Zellen, die den Bereich abdecken wird migrieren. Der Prozentsatz der Rückgewinnung zu einem bestimmten Zeitpunkt wird überwacht werden. Wenn eine große Anzahl von Proben Umgang mit Themen wie der experimentellen Kosten und Kreuzkontamination innerhalb Proben kann problematisch sein. Obwohl viele kommerzielle Tools und Tests für 4 Migration Studium Zelle vorhanden sind, 5, 6, benötigt viele von ihnen teure und komplizierte Ausrüstung und Verbesserungen werden noch benötigt. Aus diesen Gründen ist ein 8-Kanal mechanischen Zell wounder (Abbildung 1) entwickelt.
Unsere 8-Kanal-mechanischen Zell wounder hat bei der Lösung der oben genannten Probleme einige einzigartige Eigenschaften eingearbeitet. Es bietet die Flexibilität, die Zellmigration / Verwundung Assays in 96-Well-Kulturplattenformat durchzuführen. Der einstellbare guIding Bar-Design sorgt dafür, dass die Kratzfläche in der zentralen Position jedes gut ist. Auch kann die Höhe der Führungsstangen verstellt werden, so dass die wounder für verschiedene Marken von Kulturplatten anwendbar ist. Schließlich ermöglicht die einstellbare Verwundung Pin – Design einen noch Kontakt der Pipettenspitzen mit der Kulturplatte Oberfläche zu erreichen gleichzeitige und reproduzierbare Verwundung 7, 8.
Protocol
Representative Results
Discussion
Unsere Zelle wounder hat einige einzigartige Eigenschaften in die Probleme der traditionellen Zellmigration Assays zu lösen. Der 8-Kanal-mechanischen Zell wounder ist aus hochwertigem Edelstahl (Stahl 304) mit einer langen Lebensdauer hergestellt, die im Autoklaven sterilisiert werden kann. Fast alle Handelsmarken von 96-Well-Kulturplatten auf dem Markt mit dieser mechanischen Zell wounder verwendet werden, da der verstellbaren Führungsstange. Die Konstruktion der verstellbaren Führungsleiste gewährleistet auch, das…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchten sich Herr Tam Po Leung, Mr. Wong Chi Kin und das technische Personal der Fakultät Werkstatt, Hong Kong Baptist University, für ihre technischen Fähigkeiten und Beratung bei der Herstellung der Prototyp dieser wounder danken.
Materials
| 96-well cell culture plate | Nunc | 167008 | Other brands of 96-well cell culture plate can also be used |
| P10 pipette tips | Axygen | 301-03-051 | Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound |
| Wounder | R&P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Fetal bovine serum | Gibco | 26140079 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140122 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3393 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Gelatin from bovine skin | Sigma | G9391 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
References
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