효율적인 방법은 탈분화 지방 세포를 얻는 방법
Summary
We have modified the conditions for DFAT cell generation and provide herein information regarding the use of an improved growth medium for the production of these cells.
Abstract
조직 공학 및 세포 치료는 임상 적으로 큰 약속을 잡으십시오. 이와 관련하여, 이러한 중간 엽 줄기 세포 (MSC들)와 같은 다 능성 세포가 손상된 장기 기능을 복원하기 위해, 가까운 미래에, 치료 학적으로 이용 될 수있다. 그럼에도 불구하고, 중간 엽 줄기 세포의 증폭과 그 주변의 비 효율성을 분리하는 매우 침습적 등 여러 가지 기술적 인 문제는 현재 이러한 치료 양식의 잠재적 임상 사용을 방해. 여기서, 우리는 탈분화 지방 세포 (DFAT) MSC 유사 세포의 생성을위한 매우 효율적인 방법을 소개한다. 흥미롭게도, DFAT 세포는 지방 세포, 골 세포, 연골 세포 및 세포를 포함한 여러 세포 유형으로 분화 될 수있다. 다른 그룹이 이전 성숙한 지방 조직에서 DFAT 세포를 생성하는 다양한 방법을 제시하였으나, 우리의 방법이보다 효율적으로 DFAT 세포를 생성 할 수있다. 이러한 관점에서, 우리는 보여 DFAT 배지 (DCM)는, 20 % FBS로 보충 된 것을20 % FBS 보충 된 DMEM보다 DFAT 세포를 생성하는데보다 효과적이다. 또한 우리의 세포 배양 방법에 의해 제조 DFAT 세포는 여러 조직 유형으로 재분화 될 수있다. 따라서, 조직의 탈분화의 연구를위한 매우 흥미롭고 유용한 모델이 제시된다.
Introduction
세포 치료 및 조직 공학 재생 의학 1-5의 분야에서 뜨거운 주제이다. 이러한 치료 양식은 큰 약속을 보유하지만, 몇 가지 기술적 인 문제는 현재 임상 사용을 방해. 이와 관련하여, IPS 세포의 생성과 모든 조직 공학 요법은 환자의 안전성을 유지하기 위해 외부 유전자 transductions없는 세포를 생산한다. 따라서, 우리는 성공적 DFAT 인간 세포 (6)를 제조하는 첫 번째 그룹이었다. 다른 여러 연구 그룹은 이후 더 우리의 모델의 유용성을 강조, 포유 동물 기원 7-9의 DFAT 세포를 생성하는 우리의 방법을 채택하고있다.
여러 연구의 과정 동안, 우리는 세포 배양 환경의 품질이 셀 매체의 내용을 조정함으로써 수정 될 수 있음을 발견 하였다. 이 발견은 DFAT 셀 생산 성공률의 증가를 이끌고 셀의 품질을 개선하고있다; 모두 중요한 요인효율적으로 향후 임상 시험에 대한 세포를 생성하는 단계를 포함한다. 이와 관련하여, 그리고 DFAT 셀 생성하는 방법 (유사한 매체 세포 재조합 인간 인슐린, 혈청 알부민, L- 글루탐산, 여러 지방산이 포함 매체 및 콜레스테롤 유래 간엽하는 DCM) 개선 DFAT 배지 및 확산 (DCM의 내용에 대한 자세한 정보는 요청시 사용 가능)을 개발했다. 사용 방법이 고품질 DFAT 세포는 지방 세포, 골 세포, 연골 세포 및 세포를 포함한 여러 세포 유형으로 분화하는 능력을 생성 하였다. 요컨대,이 검증 세포 배양 프로토콜 DFAT 셀의 품질을 향상시켜 세포 치료 및 조직 공학의 임상 적용을 향상시키기위한 매우 유용 할 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
시험관 탈분화에 천장 문화로 알려진 과정을 거쳐 성숙한 지방 세포는 더 원시적 인 표현형으로 되돌아와 증식 능력을 얻을 수 있습니다. 이 세포로 탈분화 지방 (DFAT) 세포라고합니다. DFAT 세포의 multilineage 분화 잠재력을 평가 하였다. 분석 및 유전자 발현 분석 DFAT 세포의 ASC (6)에 비해 매우 균일 한 것으로 확인 유동 세포 계측법. 사실, DFAT 세포의 세포 표면 항원 프로파일의 ASC <su…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This research was supported in part by Program for Creating Start-ups from Advanced Research and Technology (START Program) from the Japan Society for the Promotion of Science (ST261006IP, TM) and by Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (2014-2019) (S1411018, TM) from the Ministry of Education, Sports, Science and Technology.
Materials
| CSTI303-MSC medium | CSTI | 87-671 | This medium is defined as DCM in the text |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | It does not contain Mg2+ and Ca2+ |
| DMEM medium | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma | 172012 | |
| Collagenase type II | Sigma | C-6885 | |
| Scissors | Takasago Medical Industry Co., Ltd | TKZ-F2194-1 | |
| Shaker | TAITEC | Bioshaker V.BR-36 | |
| Falcon Cell Strainer 100um Yellow | CORNING LIFE SCIENCES | DL 352360 | |
| Falcon 12.5cm² Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Blue Vented Screw Cap | CORNING LIFE SCIENCES | 353107 | |
| 18G needle | NIPRO | 02-002 | |
| 20ml Syringe | NIPRO | 08-753 | |
| Z Series Coulter Counter | BECKMAN COULTER | 383550 |
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