一个有效的方法获取反分化脂肪细胞
Summary
We have modified the conditions for DFAT cell generation and provide herein information regarding the use of an improved growth medium for the production of these cells.
Abstract
组织工程和细胞治疗临床上具有很大的希望。在这方面，多能细胞，如间充质干细胞（MSC），可以用于治疗，在不久的将来，恢复功能受损的器官。尽管如此，一些技术问题，包括分离MSC和周围的放大的低效率的高度侵入性过程，目前阻碍潜在临床使用这些治疗方法的。这里，我们引入去分化的脂肪细胞（DFAT），MSC样细胞的产生一种高效的方法。有趣的是，DFAT细胞可以分化成多种细胞类型，包括脂肪形成，成骨和软骨形成细胞。虽然其他团体先前已经提出从成熟脂肪组织产生DFAT细胞的各种方法，我们的方法使我们能够更有效地生产DFAT细胞。在这方面，我们表明，DFAT培养基（DCM）中，FBS的补充有20％，是在产生DFAT细胞比的DMEM，补充有20％FBS的更有效。此外，通过我们的细胞培养方法生产的DFAT细胞可以再分化成几个组织类型。因此，一个非常有趣和有用的组织分化的研究模型。
Introduction
细胞治疗和组织工程是在再生医学1-5领域热点话题。虽然这些治疗方法具有很大的希望，一些技术问题目前阻碍其临床应用。在这方面，如在iPS细胞的产生，所有组织工程的治疗必须产生自由外部基因转导的细胞中，以维持患者的安全。因此，我们成功地制造人类细胞DFAT 6第一组。其他几个研究组已经自从采用我们的方法，以产生哺乳动物来源7-9 DFAT细胞，进一步凸显了模型的有效性。
以上几项研究的过程中，我们发现，细胞培养环境的质量可以通过调节细胞培养基的内容进行修改。这个发现导致增加DFAT电池生产的成功率，提高小区质量;在这两个关键因素有效地产生用于将来的临床试验的细胞。在这方面，一种改进的DFAT培养基（DCM中，一个介质类似于间充质干细胞培养基，其中包含重组人胰岛素，血清白蛋白，L-谷氨酸，几个脂肪酸和胆固醇）和DFAT细胞生成的方法和增殖，开发（约DCM的内容的更多信息可应要求提供）。与分化成多种细胞类型，包括脂肪形成，成骨和软骨形成细胞的能力中产生用此方法的高质量DFAT细胞。总之，这验证了细胞培养协议增强DFAT细胞的质量和可用于增强细胞治疗和组织工程的临床应用中十分有用。
Protocol
Representative Results
Discussion
成熟脂肪细胞的进行体外分化，被称为天花板文化的过程，可以恢复到一个更原始的表型和增殖获得能力。这些细胞被称为去分化脂肪（DFAT）细胞。 DFAT细胞的多向分化潜能进行了评价。流式细胞术分析和基因表达分析表明，DFAT细胞相比的ASC 6是高度均匀的。事实上，DFAT细胞的细胞表面抗原轮廓是非常类似于在携带者6找到。因此，DFAT细胞可能功能类似于干细胞。
<p clas…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This research was supported in part by Program for Creating Start-ups from Advanced Research and Technology (START Program) from the Japan Society for the Promotion of Science (ST261006IP, TM) and by Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (2014-2019) (S1411018, TM) from the Ministry of Education, Sports, Science and Technology.
Materials
| CSTI303-MSC medium | CSTI | 87-671 | This medium is defined as DCM in the text |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | It does not contain Mg2+ and Ca2+ |
| DMEM medium | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma | 172012 | |
| Collagenase type II | Sigma | C-6885 | |
| Scissors | Takasago Medical Industry Co., Ltd | TKZ-F2194-1 | |
| Shaker | TAITEC | Bioshaker V.BR-36 | |
| Falcon Cell Strainer 100um Yellow | CORNING LIFE SCIENCES | DL 352360 | |
| Falcon 12.5cm² Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Blue Vented Screw Cap | CORNING LIFE SCIENCES | 353107 | |
| 18G needle | NIPRO | 02-002 | |
| 20ml Syringe | NIPRO | 08-753 | |
| Z Series Coulter Counter | BECKMAN COULTER | 383550 |
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