Эффективный метод получения Дедифференцированные жировых клеток
Summary
We have modified the conditions for DFAT cell generation and provide herein information regarding the use of an improved growth medium for the production of these cells.
Abstract
Тканевая инженерия и клеточная терапия весьма перспективны клинически. В связи с этим, мультипотентных клетки, такие как мезенхимальные стволовые клетки (МСК), может быть использовано в терапевтических целях, в ближайшем будущем, для восстановления функции поврежденных органов. Тем не менее, некоторые технические вопросы, в том числе весьма инвазивной процедуры выделения MSCs и неэффективностью окружающих их усиление, в настоящее время препятствуют потенциальное клиническое применение этих терапевтических методов. Здесь мы вводим высокоэффективный метод для генерации дедифференцированных жировых клеток (DFAT), МСЦ-подобных клеток. Интересно отметить, что DFAT клетки могут быть дифференцированы в нескольких типах клеток, включая Adipogenic, остеогенных и хондрогенных клеток. Хотя другие группы ранее были представлены различные методы для создания клеток DFAT из зрелой жировой ткани, наш метод позволяет более эффективно производить клетки DFAT. В связи с этим, мы показали, что DFAT культуральную среду (ДХМ), дополненной 20% ФБС,более эффективен в создании клеток DFAT чем DMEM, дополненной 20% FBS. Кроме того, клетки, полученные DFAT нашим методом культивирования клеток может быть повторно дифференцироваться в несколько типов ткани. Таким образом, очень интересная и полезная модель для изучения дифференцировке тканей представлена.
Introduction
Клеточная терапия и тканевая инженерия являются горячие темы в области регенеративной медицины 1-5. В то время как эти терапевтические методы весьма перспективны, несколько технических вопросов, в настоящее время препятствуют их клинического применения. В связи с этим, как и в поколении плюрипотентных клеток, все тканевой инженерии терапии должны продуцировать клетки в отсутствие внешних каскадов, генов для того, чтобы поддерживать безопасность пациента. Соответственно, мы были первой группой , чтобы успешно производить клетки DFAT человека 6. Несколько других исследовательских групп , так как принят наш метод для создания DFAT клетки млекопитающего 7-9, дополнительно подчеркивая полезность нашей модели.
В течение нескольких исследований, мы обнаружили, что качество окружающей среды для культивирования клеток, может быть изменена путем корректировки содержания клеточной среды. Это открытие привело к увеличению скорости успеха производства DFAT клеток и улучшение качества клеток; оба решающими факторамиэффективно создания клеток для будущих клинических испытаний. В связи с этим, улучшенной DFAT культуральной среды (ДХМ, среду, подобную мезенхимальных стволовых клеток среду, которая содержит рекомбинантный человеческий инсулин, сывороточный альбумин, L-глутаминовую кислоту, несколько жирных кислот и холестерина), и способ для генерации DFAT клеток и пролиферация была разработана (более подробную информацию о содержании DCM предоставляется по запросу). С помощью этого метода высокого качества DFAT клетки генерировались с возможностью дифференцироваться в несколько типов клеток, в том числе Adipogenic, остеогенных и хондрогенных клеток. В целом, это подтверждено протоколом культуры клеток повышает качество клеток DFAT и может быть весьма полезным для повышения клинического применения клеточной терапии и тканевой инженерии.
Protocol
Representative Results
Discussion
Зрелые адипоциты , которые проходят в пробирке дедифференциации, процесс , известный как потолок культуры, может вернуться к более примитивным фенотипа и получить пролиферативные способности. Эти клетки называются дедифференцируются жир (DFAT) клеток. Мультилинейной дифференциаци…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This research was supported in part by Program for Creating Start-ups from Advanced Research and Technology (START Program) from the Japan Society for the Promotion of Science (ST261006IP, TM) and by Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (2014-2019) (S1411018, TM) from the Ministry of Education, Sports, Science and Technology.
Materials
| CSTI303-MSC medium | CSTI | 87-671 | This medium is defined as DCM in the text |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | It does not contain Mg2+ and Ca2+ |
| DMEM medium | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma | 172012 | |
| Collagenase type II | Sigma | C-6885 | |
| Scissors | Takasago Medical Industry Co., Ltd | TKZ-F2194-1 | |
| Shaker | TAITEC | Bioshaker V.BR-36 | |
| Falcon Cell Strainer 100um Yellow | CORNING LIFE SCIENCES | DL 352360 | |
| Falcon 12.5cm² Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Blue Vented Screw Cap | CORNING LIFE SCIENCES | 353107 | |
| 18G needle | NIPRO | 02-002 | |
| 20ml Syringe | NIPRO | 08-753 | |
| Z Series Coulter Counter | BECKMAN COULTER | 383550 |
References
- Lanzoni, G., et al. Concise review: clinical programs of stem cell therapies for liver and pancreas. Stem Cells. 31 (10), 2047-2060 (2013).
- de Girolamo, L., et al. Mesenchymal stem/stromal cells: a new “cells as drugs” paradigm. Efficacy and critical aspects in cell therapy. Curr. Pharm. Des. 19 (13), 2459-2473 (2013).
- Lindroos, B., Suuronen, R., Miettinen, S. The potential of adipose stem cells in regenerative medicine. Stem Cell. Rev. 7 (2), 269-291 (2011).
- Yan, J., Tie, G., Xu, T. Y., Cecchini, K., Messina, L. M. Mesenchymal stem cells as a treatment for peripheral arterial disease: current status and potential impact of type II diabetes on their therapeutic efficacy. Stem Cell. Rev. 9 (3), 360-372 (2013).
- Ringden, O., Keating, A. Mesenchymal stromal cells as treatment for chronic GVHD. Bone Marrow Transplant. 46 (2), 163-164 (2011).
- Matsumoto, T., et al. Mature adipocyte-derived dedifferentiated fat cells exhibit multilineage potential. J. Cell. Physiol. 215 (1), 210-222 (2008).
- Lessard, J., et al. Generation of human adipose stem cells through dedifferentiation of mature adipocytes in ceiling cultures. J. Vis. Exp. (97), (2015).
- Lessard, J., et al. Characterization of dedifferentiating human mature adipocytes from the visceral and subcutaneous fat compartments: fibroblast-activation protein alpha and dipeptidyl peptidase 4 as major components of matrix remodeling. PLoS One. 10 (3), 0122065 (2015).
- Peng, X., et al. Phenotypic and Functional Properties of Porcine Dedifferentiated Fat Cells during the Long-Term Culture In Vitro. Biomed. Res. Int. 2015, 673651 (2015).
- Kono, S., Kazama, T., Kano, K., Harada, K., Uechi, M., Matsumoto, T. Phenotypic and functional properties of feline dedifferentiated fat cells and adipose-derived stem cells. Vet. J. 199 (1), 88-96 (2014).
- Bellin, M., Marchetto, M. C., Gage, F. H., Mummery, C. L. Induced pluripotent stem cells: the new patient. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (11), 713-726 (2012).
