Мышиные Кожные фибробластов Изоляция FACS

Фибробласты часто определяется морфологически веретенообразных клеток, которые придерживаются пластиковых подложках. Фибробласты принцип тип клеток отвечает за синтез и реконструкции внеклеточного матрикса в эмбриональных и взрослых органов ^1. Фибробласты, таким образом, решающее значение для развития млекопитающих и вносят существенный вклад в внеклеточной среде, которая влияет на поведение соседних типов клеток, присутствующих в каждой ткани и органа.

Фибробласты также основной тип клеток за разнообразный набор медицинских условий, которые вызывают огромный клинический бремя. Патологические активности фибробластов ухудшает нормальную функцию ткани и включает в себя тканей и органов фиброз (например, легких и печени), рубцевание следующую кожного заживления ран, атеросклероз, системный склероз, и формирование атероматозных бляшек после травмы сосудов ^2-5. Заживление ран, в частности, как остро и хронически, включает Deposition рубцовой ткани, что ни походит ни функционирует подобно нормальной ткани, окружающей его, и приводит к значительной заболеваемости в самых разнообразных патологических состояниях. После травмы, происходит переход фибробластов в миофибробластами, который затем выделяют структурные компоненты ECM, оказывают воздействие на паракринные соседних типов клеток, и восстановить механическую стабильность путем осаждения рубцовой ткани ^6.

В кожных тканей существует значительное изменение в качество заживления ран через время развития, а также между анатомических участков. В первых двух триместров жизни плод лечит без рубцов; Однако, начиная с третьего триместра на протяжении взрослой жизни и, люди исцелить со шрамом. Сайт-специфическая, в дополнение к возрасту конкретного различия в заживлении ран существует. Раны в ротовой полости переделывать с минимальным образованием рубцов ^7,8, в то время как осаждение рубцовой ткани в кожных ран ^{значительным} 9. Споры сохраняется грoncerning относительное влияние окружающей среды по сравнению с внутренними свойствами местных фибробластов на исход заживления ран в отношении как возраст и место ^10,11. Учитывая значительные различия в исцелении мыши устной против кожных дермы и ранее эмбриональных (E15) против позже эмбриональных (E18) дермы, вполне вероятно, что внутренние различия в популяциях фибробластов в определенном возрасте развития и среди различных анатомических существует ,

В 1986 году Гарольд Ф. Дворжак положено опухоли раны, которые не заживают ^12. Dvorak к выводу, что опухоли ведут себя как раны в организме и вызывают их стромы путем активации заживления раны ответ хозяина. Многочисленные исследования, так как исследовали вклад фибробластов к прогрессированию рака ^13-15, но как и в случае заживления раны, идентичности и эмбрионального происхождения фибробластов, которые способствуют стромы отсеке кожного CArcinomas не были должным образом определены. Ответ на этот вопрос носит медицинскую значимость данной недавние исследования, разоблачающие опухолеассоциированные фибробластов как потенциально эффективного мишени для противораковой терапии ^16.

Выявление и перспективно изоляции фибробластов клоны наделены фиброгенной потенциала в естественных условиях является важным шагом на пути к эффективной манипуляции их ответ на повреждение в широком диапазоне острых и хронических болезненных состояний. В 1987 году Кормак продемонстрировал два субпопуляции фибробластов, один проживающий в папиллярного и один в ретикулярной дермы ^17,18. Третий субпопуляции был найден, связанные с волосяных фолликулов в волосяной сосочек области фолликула ^19,20. При культивировании, эти различия фибробластов подтипы проявляют в потенциал роста, морфологии и факторов роста / цитокинов анкеты ^21-24.

На сегодняшний день, исследования по изучению фибробластов онterogeneity в значительной степени удалось адекватно характеризуют развития и функционального разнообразия среди фибробластов в естественных условиях. Это, в частности, является результатом зависимости от культивируемых популяций фибробластов и гомогенизации эффекта клеточной культуре или позитивной селекции на основе поверхностного рецептора себя не экспрессируется всеми фибробластов ^25. Недавнее исследование, из нашей лаборатории показали глубокое поверхностный маркер и транскрипции сдвиг в культуре фибробластов против некультурных изолированных на FACS на основе методологии, представленной в изоляции этой рукописи ^26.

Впоследствии, мы определили конкретный фибробластов происхождение в пределах мышиных спинных дермы и решил, что это линия, определяется эмбриональной экспрессии Engrailed-1, в первую очередь отвечает за отложение соединительной ткани в коже спинной. Линии функции при острых и хронических форм фиброза в том числе заживление ран, образование стромы рака, иизлучение фиброз ^27. Характеристика различных фибробластов линий имеет критические последствия для лечения, направленных на модуляции фиброгенную поведение.

Вместо того чтобы использовать существующие протоколы, которые полагаются на манипуляции в пробирке для достижения изоляции клеток ^28,29, протокол урожай (Рисунок 1) подробно здесь, поможет урожая информативные анализы фибробластов, которые более точно захватить фенотип и поведение в естественных условиях.