FACS ile Murin Dermal fibroblast İzolasyonu

Fibroblastlar sık ​​plastik yüzeylerde uygun iğ biçimli hücreler olarak morfolojik tanımlanır. Fibroblastlar sentezlenmesi ve embriyonik ve yetişkin organlarının ¹ hücre dışı matriks remodeling sorumlu ilke hücre tipi vardır. Fibroblastlar memeli gelişme dolayısıyla kritik ve her doku ve organda mevcut hücre tipleri komşu davranışını etkileyen hücre dışı ortamın önemli ölçüde katkıda bulunur.

Fibroblastlar de muazzam bir klinik yükünü neden tıbbi koşullar çeşitli bir kümesi arkasında asıl hücre tipi vardır. Patolojik fibroblast aktivitesinin normal doku işlevini bozar ve deri yara iyileşmesi, ateroskleroz, sistemik skleroz, ve damar yaralanması ^2-5 sonra aterom plaklarının oluşumuna aşağıdaki doku ve (örneğin akciğer ve karaciğer gibi), organ fibrozis, skar içerir. Özellikle yara iyileşmesi, hem akut ve kronik, d içerirnormal doku gibi ne benzeyen, ne de işlevleri çevreleyen ve çeşitli patolojik devletler arasında önemli morbidite neden skar dokusunun eposition. Travmalarından sonra, daha sonra, yapısal ECM bileşenleri salgılar hücre tiplerini komşu parakrin etkilere neden ve skar dokusu ⁶ yatırma mekanik istikrarı sağlamak miyofibroblastlar fibroblastların bir geçiş vardır.

Deri dokularda gelişimsel süre boyunca yara onarım kalitesi ve anatomik siteler arasında önemli varyasyon mevcuttur. Yaşamın ilk iki trimesterde fetüs iz bırakmadan iyileşir; Ancak, üzerinde ve yetişkinlik boyunca üçüncü trimesterde, bir yara ile iyileşir insanlarda. Mevkiye-özgü yaşa özgü ek olarak, yara iyileşmesi farklılıklar vardır. Deri yaraların içinde skar dokusu biriktirme ⁹ önemli ise ağız boşluğunda yaralar, minimal skar oluşumu ^7,8 ile pişmanlık. Münakaşa c devamyaş ve konum ^10,11 hem açısından yara iyileşmesi sonucu yerel fibroblast içsel özelliklerinin karşı çevrenin göreceli etkisini oncerning. Deri dermis ve önceki embriyonik (E15) karşı sözlü fare iyileşmesinde önemli farklılıklar göz önüne alındığında vs sonra embriyonik (E18) dermiş, bazı gelişimsel yaşta ve çeşitli anatomik siteler arasında fibroblastların popülasyonlarında içsel farklılıklar var olasıdır .

1986 yılında, Harold F. Dvorak tümörler ¹² iyileşmeyen yaralar vardır oturtulması. Dvorak tümörler vücutta yaralar gibi davranırlar ve konağın yanıtını yaranın iyileşme aktive ederek stroma neden olduğu sonucuna varıldı. Çeşitli çalışmalar beri karsinom ^13-15 ilerlemesine fibroblastların katkısını araştırdık, ama yara iyileşmesi, kimlik ve deri ca stromal bölmesine katkıda fibroblast embriyonik kökenli olduğu gibircinomas yeterince tanımlanmamıştır. Bu sorunun cevabı, anti-kanser terapisi ¹⁶ için potansiyel olarak etkin hedef olarak tümörle ilişkili fibroblast açığa son çalışmalar verilen tıbbi alaka taşımaktadır.

Belirlenmesi ve ileriye dönük in vivo fibrojenik potansiyeli sahip fibroblast soy izole etkin bir akut ve kronik hastalık durumları geniş bir yelpazesinde yaralanma kendi tepkisini manipüle yönelik önemli bir adımdır. 1987 yılında, Cormack papiller ve retiküler dermis ^17,18 içinde biri içinde ikamet eden fibroblast iki alt popülasyonlarını bir gösterdi. Üçüncü ICSI'nin follikül ^19,20 Dermal papilla bölgedeki saç köklerinin ile ilişkili bulunmuştur. Ne zaman kültür, büyüme potansiyeli, morfoloji ve büyüme faktörü / sitokin bu fibroblast alt tiplerinin sergi farkları ^21-24 profilleri.

Bugüne kadar, fibroblast inceleyen çalışmaların oterogeneity ölçüde yeterli in vivo fibroblastlar arasında gelişimsel ve fonksiyonel çeşitlilik karakterize etmek başarısız oldu. Bu, kısmen, kültürlenmiş fibroblast popülasyonları bir güven ve tüm fibroblastlar ²⁵ ile ifade edilen bir kendi kendine yüzey reseptörüne göre hücre kültüründen ya da pozitif bir seçim homojenize etkisinin bir sonucu olduğu. Laboratuarımızda yapılan yeni bir çalışma, derin bir yüzey işaretleyici ve bu yazıda ²⁶ sunulan FACS-bazlı izolasyon metodolojisi ile izole vs kültürlü kültürsüz fibroblast transkripsiyonel vardiya gösterdi.

Daha sonra, kemirgen dorsal dermiş içinde belirli bir fibroblast soy tanımlanmış ve Engrailed-1 embriyonik ekspresyonu ile tanımlanan, bu soy, dorsal, derideki bağ dokusu birikimi için temel olarak sorumlu olduğu tespit edilmiştir. Yara iyileşmesi, kanser stroma oluşumu da dahil olmak üzere fibrozis, akut ve kronik biçimleri boyunca da soy fonksiyonlarıRadyasyon fibrozis ²⁷ uyarılan. Farklı fibroblast soy karakterizasyonu fibrojenik davranışlarını modüle amaçlayan tedaviler için kritik etkileri vardır.

Aksine, hücre izolasyonu ^28,29 ulaşmak için in vitro manipülasyon güvenmek mevcut protokolleri kullanarak daha burada ayrıntılı hasat protokolü (Şekil 1) daha doğru in vivo fenotip ve davranışlarını yakalamak fibroblast verimi bilgilendirici analizlerini yardımcı olacaktır.