Herpes simplex virus (HSV) peut provoquer une série de maladies chez l'homme des lésions cutanéo-muqueuses de simples doux aux infections mortelles. HSV de type 1 (HSV-1) est dominante associée à des infections oro-faciales et l'encéphalite, tandis que le HSV de type 2 (HSV-2) provoque plus susceptibles infections génitales ^1. Bien qu'il y ait des progrès significatifs dans la compréhension comment HSV pénètre dans les cellules en culture, déclenche l'infection et produit descendance virale, nous savons peu de choses sur la voie d'invasion virale (s) dans les tissus au niveau cellulaire ^2. Pour les études de HSV peau ou des infections des muqueuses, les souris, les lapins et les cochons d'Inde ont été utilisés comme modèles animaux. Infection de la peau a été établie par une injection intradermique ou par grattage de la peau en la présence du virus, et développement de la maladie a été corrélée avec la production de virus. Ces méthodes ont permis de comprendre les différents aspects de la pathogenèse de la maladie, et sont utilisés pour évaluer les médicaments antiviraux. Pour étudier l'infection HSV au tissue niveau, les modèles organotypiques de peau humaine ont été appliquées. Comme le taux d'infection est limité dans ces cultures en radeau, seul un nombre limité d'études portant sur ​​l'infection, la propagation virale et les effets des composants antiviraux ont été publiées ^3-6.

Afin de caractériser les déterminants cellulaires qui jouent un rôle lors de HSV-1 infection dans l'épithélium intact, nous avons établi un protocole pour les ex vivo des études d'infection de l'épiderme murins ^7. Peau été préparé à partir des nouveau-nés ou des queues de souris adultes. Depuis HSV-1 n'a pas pu infecter des échantillons de peau qui ont été effectués, dans un milieu submergées contenant le virus, nous avons séparé l'épiderme du derme par la dispase II traitement. Après flottant des feuilles épidermiques sur un milieu contenant le virus, les cellules infectées peuvent être visualisés dans la couche épidermique de base à différents moments après l'infection (pi) ^7. Pour visualiser le début de l'infection dans des cellules individuelles avant une réplication viralend production de virus, nous avons coloré avec un anticorps dirigé contre la protéine de cellule infectée 0 (ICP0), qui est l'une des premières protéines exprimées au cours de l'infection par HSV-1. La localisation cellulaire de ICP0 passe par des phases distinctes lors d'une infection précoce. Bien que ICP0 est présent dans des foyers nucléaires pendant un stade précoce de l'expression virale de gènes, de relocalisation ICP0 vers le cytoplasme indique une phase ultérieure de l'infection ^8.

Nous avons utilisé le test infection ex vivo de feuilles épidermiques à partir de différents modèles de souris pour tester le rôle potentiel de divers facteurs cellulaires lors de l'infection. Pour faire face à l'impact de Rac1 comme un régulateur clé de la dynamique de l'actine, nous avons infecté des souris de l'épiderme avec une deletion spécifique de kératinocyte du gène ⁹ Rac1. Ce modèle nous a permis d'étudier les conséquences de Rac1 déficiente sur l'efficacité du HSV-1 chez les couches de kératinocytes épidermiques. La comparaison de l'épiderme infectées de la même portée de contrôle rémis au jour de pas de différence significative, ce qui indique que l'absence de Rac1 n'a eu aucun effet sur ​​l'initiation de l'infection dans la couche basale de l'épiderme ^7. L'utilisation de modèles supplémentaires de souris nous a permis d'aborder des récepteurs cellulaires qui médiatisent l'entrée dans l'épiderme. Infecter les feuilles épidermiques à partir de soit nectin-1 ou des souris déficientes en HVEM avec HSV-1 a révélé que la première entrée du virus dans les tissus dépend fortement de la présence d'une ^10-nectine. De plus, nos résultats démontrent que HVEM peut également servir de récepteur dans l'épiderme de souris, bien que moins efficacement que nectin-1 ^10.

Pour répondre à la répartition spatiale des cellules infectées dans les couches épidermiques, on visualise de ICP0 expression dans des coupes de tissus épidermiques et montures entières (figure 1). Dans cryocoupes de peau complet, pas de cellules exprimant ICP0 sont détectés (figure 1). En revanche, les cryosections de feuilles épidermiques démontrent cytoplasmiqueICP0 expression dans la couche basale déjà à trois heures pi (Figure 1). Au temps plus tard, la propagation virale à suprabasale couches peuvent être visualisés. La répartition spatiale des cellules infectées dans la couche basale peut être facilement suivie dans épidermiques montures entières (Figure 1). Lors de l'infection par le HSV-1 à 100 PFU / cellule, environ 50% des kératinocytes basales de l'épiderme interfolliculaires montrer expression ICP0 à 1,5 h pi A ce point de temps la plupart des cellules infectées expriment ICP0 nucléaire. La relocalisation de ICP0 vers le cytoplasme indiquant un stade ultérieur de l'expression du gène précoce est présente dans presque toutes les cellules à 3 h pi (Figure 1). Ces modes de visualisation de cellules infectées ex vivo sur HSV-1 infection fournissent un test puissant pour étudier l'effet des inhibiteurs ou des composants cellulaires mutées supprimés / sur l'entrée virale et la propagation dans le tissu.