L'utilisation de l'oropharynx Intratrachéal PAMP administration et lavage broncho-alvéolaire pour évaluer l'hôte une réaction immunitaire chez la souris

Les infections pulmonaires associés aux espèces de bactéries pathogènes sont une cause fréquente de morbidité et de mortalité dans le monde. Déterminer les mécanismes qui conduisent la réponse immunitaire de l'hôte à ces agents pathogènes favorisera le développement de nouvelles stratégies de prévention et des agents thérapeutiques qui atténuent l'impact de ces infections. L'objectif global du protocole décrit ici est de fournir à l'utilisateur une méthode flexible pour évaluer l'hôte réponse immunitaire innée à l'infection par des agents pathogènes en utilisant un modèle de l'agent pathogène associé moléculaire (PAMP) comme un substitut pour les bactéries vivantes. La majorité des études antérieures évaluant l'hôte réponse immunitaire innée aux bactéries ont mis l'accent sur les modèles péritonéale en raison de la relative facilité d'exécution. Bien que ces modèles sont très utiles et ont donné lieu à des avancées significatives dans le domaine des interactions hôte-pathogène et l'inflammation systémique, les données générées à partir de ces modèles ne sont pas toujours appropriés pour les études involving le système respiratoire. Ici, un modèle d'inflammation pulmonaire aiguë du poumon est proposé comme une extension pratique et cliniquement pertinente de l'intra-péritonéale (ip), les modèles d'injection classiques. La technique proposée permet l'évaluation locale de la réponse immunitaire innée dans un système de modèle spécifique d'organe.

Les méthodes décrites ici sont conçues pour fournir une technique simple et robuste pour permettre aux utilisateurs d'évaluer la réponse immunitaire de l'hôte au LPS, qui est un PAMP commun. Les méthodes sont basées sur intratrachéale (it) instillation de LPS, ce qui induit une réponse immunitaire innée robuste dans les poumons de souris et imite de nombreuses caractéristiques physiopathologiques observés chez des patients humains souffrant d'infections respiratoires et de lésions pulmonaires aiguës ^1. Un avantage principal de cette technique est qu'elle permet à l'utilisateur d'évaluer la réponse immunitaire de l'hôte sans les facteurs de confusion et des problèmes de sécurité liés à la réalisation des études in vivoà l'aide de bactéries vivantes. De même, l'administration de ce parcours oropharyngée de l'exposition décrite dans ce protocole présente des avantages significatifs par rapport aux autres techniques couramment utilisées, y compris par voie intranasale (dans) l'administration et la gestion de ce chirurgical. Par exemple, l'administration du dosage, il permet oropharyngée relativement précise et dépôt dans les poumons, comparativement à l'administration, qui souffre généralement d'une augmentation de la variabilité de dépôt dans les poumons à cause de la perte d'agents dans la cavité nasale, des sinus ^{de 2-4.} La voie d'administration de ces cavités, il contourne et permet un accès direct à la trachée et les voies respiratoires. De même, l'approche chirurgicale est une méthode d'administration beaucoup plus morbide et nécessite une formation approfondie à maîtriser. Les protocoles décrits ici comprennent également une description des techniques courantes et des marqueurs de substitution utilisés pour évaluer la progression de l'inflammation et se terminer par un protocole décrivant les techniques appropriées pour la préparation de la luNGS pour l'évaluation de l'histopathologie. Ces protocoles sont concentrés sur la réduction du nombre de souris requis pour chaque étude en maximisant les données générées à partir de chaque animal individuel.

Les protocoles décrits sont très flexibles et peuvent être facilement modifiés pour évaluer une diversité PAMP de gamme et des modèles moléculaires de dommages associé (atténue). En outre, moyennant quelques modifications supplémentaires, ces protocoles peuvent également être appliqués à des études évaluant allergique des voies aériennes progression de la maladie ou des interactions hôte-pathogène avec des bactéries vivantes, des virus ou des champignons ^5-10.