L'utilizzo di orofaringea intratracheale PAMP Amministrazione e lavaggio broncoalveolare per valutare la risposta immunitaria nei topi Host

Infezioni polmonari associate a batteri patogeni specie sono una causa comune di morbilità e mortalità a livello mondiale. Determinare i meccanismi che guidano la risposta immunitaria a questi agenti patogeni promuoverà lo sviluppo di strategie di prevenzione e nuovi agenti terapeutici che attenuare l'impatto di queste infezioni. L'obiettivo generale del protocollo qui descritto è di fornire all'utente un metodo flessibile per valutare l'host risposta immunitaria innata all'infezione patogeno utilizzando un modello patogeno associato molecolare (PAMP) come surrogato batteri vivi. La maggior parte degli studi precedenti che valutano l'host innata risposta immunitaria ai batteri si sono concentrati su modelli peritoneali causa della relativa facilità di esecuzione. Anche se questi modelli sono molto utili e hanno portato a significativi progressi nel campo delle interazioni ospite-patogeno e infiammazione sistemica, i dati generati da questi modelli non sono sempre appropriati per gli studi involving il sistema respiratorio. Qui, un modello polmonare di infiammazione polmonare acuta si propone come un ampliamento pratico e clinicamente rilevante delle intraperitoneale (ip) modelli ad iniezione classici. La tecnica proposta consente la valutazione locale della risposta immunitaria innata in un sistema modello specifico organo.

I metodi qui descritti sono progettati per fornire una tecnica semplice e robusto per consentire agli utenti di valutare la risposta immunitaria a LPS, che è un PAMP comune. I metodi sono basati su endotracheale (it) instillazione di LPS, che induce una risposta immunitaria innata robusto nei polmoni dei topi e imita molte delle caratteristiche fisiopatologiche osservate in pazienti umani affetti da infezioni respiratorie e danno polmonare acuto ^1. Un vantaggio principale di questa tecnica è che permette all'utente di valutare la risposta immunitaria senza i fattori di confusione e problemi di sicurezza associati alla realizzazione di studi in vivoutilizzando batteri vivi. Allo stesso modo, la via orofaringea che la somministrazione di esposizione descritto in questo protocollo ha vantaggi significativi rispetto ad altre tecniche comunemente utilizzate, tra cui intranasale (in) amministrazione e l'amministrazione è chirurgica. Ad esempio, la somministrazione è orofaringea permette dosaggio in vasca relativamente accurato e deposizione polmonare rispetto al somministrazione, che soffre tipicamente da una maggiore variabilità di deposizione polmonare dovuta alla perdita di agenti nella cavità nasale e dei seni ^2-4. L'instradamento somministrazione elude queste cavità e consente l'accesso diretto alla trachea e vie aeree. Allo stesso modo, l'approccio chirurgico si tratta di un metodo di gestione molto più morboso e richiede una formazione da padroneggiare. I protocolli descritti qui includono anche una descrizione delle tecniche più comuni e marcatori surrogati utilizzati per valutare la progressione infiammazione e terminare con un protocollo che descrive le tecniche adeguate per la preparazione del luNGS per la valutazione istopatologica. Questi protocolli sono focalizzati sulla riduzione del numero di topi richiesti per ciascuno studio massimizzando i dati generati da ogni singolo animale.

I protocolli descritti sono estremamente flessibili e possono essere facilmente modificati per valutare una diversa PAMPs gamma e modelli molecolari di danno associato (smorza). Inoltre, con alcune modifiche supplementari, questi protocolli possono essere applicati anche a studi che hanno valutato la progressione della malattia delle vie respiratorie allergiche o interazioni ospite-patogeno con batteri vivi, virus o funghi ^5-10.