Использование ротоглотки интратрахеального PAMP администрации и бронхоальвеолярного лаважа для оценки иммунного ответа хозяина у мышей

Легочные инфекции, связанные с патогенными бактериями вида являются частой причиной глобального заболеваемости и смертности. Определение механизмов, которые управляют иммунного ответа на эти патогенов будет способствовать развитию новых стратегий профилактики и терапевтических агентов, которые будут уменьшить воздействие этих инфекций. Общая цель протокола, описанного здесь, чтобы предоставить пользователю с гибким методом для оценки хоста врожденной иммунной реакции на возбудителя инфекции с использованием патогенных микроорганизмов, связанное молекулярную модель (PAMP) в качестве суррогата живых бактерий. Большинство предшествующих исследований по оценке хоста врожденной иммунной реакции на бактерии были сосредоточены на перитонеальных моделей из-за относительной легкости исполнения. В то время как эти модели являются очень полезными и привели к значительным достижениям в области хозяин-патоген взаимодействий и системного воспаления, данные, полученные от этих моделей не всегда подходят для исследований involviнг дыхательную систему. Здесь, легочной модели острого воспаления легких, предлагается в качестве практического и клинически значимого расширения классических внутрибрюшинного (IP) моделей инъекций. Предложенный способ позволяет локальной оценки врожденного иммунного ответа в модельной системе конкретного органа.

Методы, описанные здесь были разработаны для обеспечения простой и надежный метод, позволяющий пользователям оценить иммунного ответа на ЛПС, которая является общей ПАМП. Методы основаны на интратрахеального (это) закапывания ЛПС, который вызывает устойчивую врожденную иммунную реакцию в легких мышей и имитирует многих патофизиологических особенностей, наблюдаемых у больных людей, страдающих от респираторных инфекций и острого повреждения легких ^1. Основное преимущество этого метода в том, что он позволяет пользователю оценить иммунного ответа без сопутствующих факторов и проблем безопасности, связанных с проведением в естественных условиях исследованияиспользуя живые бактерии. Аналогично, ротоглотки это управление путь воздействия, описанного в данном протоколе имеет значительные преимущества по сравнению с другими обычно используемыми способами, в том числе интраназального (в) введения и введения хирургического он. Например, ротоглотки администрация это позволяет относительно точное дозирование и отложение легких по сравнению с в администрации, которая, как правило, страдает от повышенной изменчивости отложения в легких в связи с потерей средств в полости носа и придаточных пазух ^2-4. Маршрут его администрация обходит эти полости и обеспечивает прямой доступ к трахее и дыхательных путей. Кроме того, хирургическое это подход является методом значительно более болезненный администрация и требует серьезной подготовки к хозяину. Протоколы, описанные здесь, также включают в себя описание общих методов и суррогатные маркеры, используемые для оценки прогрессирования воспаления и заканчиваться протокола, описывающего правильные методы для подготовки луNGS для оценки гистопатология. Эти протоколы сосредоточены на минимизации количества мышей, необходимых для каждого исследования путем максимизации данные, полученные от каждого животного.

Протоколы, описанные очень гибкие и могут быть легко изменены, чтобы оценить разнообразную PAMPs дальности и ущерба, связанных молекулярных моделей (DAMPS). Кроме того, с несколькими дополнительными модификациями, эти протоколы могут также применяться для исследований, оценивающих развитие аллергической дыхательных путей заболевания или хост-патогенных взаимодействия с живыми бактериями, вирусами или грибами ^5-10.