الجزيئي يشير من خلال كل من الاستروجين وmicroRNAs حاسمة في تطوير سرطان الثدي والنمو. الاستروجين ينشط مستقبلات هرمون الاستروجين، والتي هي عوامل النسخ. يمكن أن العديد من عوامل النسخ تنظيم التعبير عن microRNAs، وmicroRNAs التنظيم الاستروجين يمكن لمحة باستخدام تقنيات مختلفة واسعة النطاق.
هرمون الاستروجين يلعب دورا حيويا في التنمية الغدة الثديية وتطور سرطان الثدي. انها تتوسط ظيفتها ملزمة لوتفعيل مستقبلات هرمون الاستروجين (المتطلبات البيئية)، ERα، وERβ. وكثيرا ما upregulated ERα في سرطان الثدي ويدفع انتشار خلايا سرطان الثدي. يعمل المتطلبات البيئية بوصفها عوامل النسخ وتنظيم التعبير الجيني. في حين تم تأسيس التنظيم ERα من الجينات الترميز البروتين بشكل جيد، وتنظيمها من غير المكودة الرنا الميكروي (ميرنا) هو أقل استكشافها. miRNAs تلعب دورا رئيسيا في تنظيم مرحلة ما بعد النسخي من الجينات، مما يعوق ترجمتها أو المهينة مرنا بهم. يمكن miRNAs تعمل كما المسرطنة أو المكثفات ورم واعدة أيضا المؤشرات الحيوية. بين المقايسات ميرنا المتاحة، ميكروأري والكمي في الوقت الحقيقي تفاعل البلمرة المتسلسل (QPCR) وقد استخدمت على نطاق واسع لكشف وتحديد مستويات ميرنا. لتحديد miRNAs ينظمها هرمون الاستروجين في سرطان الثدي إشارات، الوتمت مقارنة التعبير EIR في خطوط خلايا سرطان الثدي ERα إيجابية قبل وبعد الاستروجين التنشيط باستخدام كل من ميكروأرس μParaflo-ميكروفلويديك ومزدوجة وصفت تحقيقات منخفض الكثافة صفائف. تم التحقق من صحة النتائج باستخدام فحوصات QPCR محددة، وتطبيق كل من Cyanine قائم على الأصباغ ومزدوجة وصفت الكيمياء أساس تحقيقات. وعلاوة على ذلك، تم استخدام مقايسة الوقت نقطة لتحديد الأنظمة مع مرور الوقت. مزايا النهج فحص ميرنا المستخدمة في هذه الدراسة هو أنه تمكن الفحص السريع للأنظمة ميرنا ناضجة في عينات عديدة، حتى مع كميات عينة محدودة. التخطيط، بما في ذلك شروط محددة لزراعة الخلايا وعلاج هرمون الاستروجين، ومكررات البيولوجية والتقنية، وفحص واسعة النطاق تليها في العمق تأكيد باستخدام تقنيات منفصلة، يضمن الكشف عن لوائح قوية ميرنا، ويلغي ايجابيات كاذبة وغيرها من الأعمال الفنية. ومع ذلك، miRNAs تحور أو غير معروفة، أو لوائح في LEVE نص الابتدائية والسلائفل، لن يتم الكشف عنها. طريقة المقدمة هنا يمثل تحقيق شامل بوساطة الاستروجين التنظيم ميرنا.
هرمون الاستروجين هو الهرمون الذي هو مهمة خلال التنمية الغدة الثديية. هرمون الاستروجين يلعب أيضا دورا هاما في تطوير وصيانة، والمخاطر، والعلاج من سرطان الثدي 1. الاستروجين تمارس وظيفتها عن طريق الربط بين المتطلبات البيئية، والتي هي عوامل النسخ وتنظيم الجينات المستهدفة المحددة. اثنين من المتغيرات مستقبلات، ERα أمر ضروري لانتشار تعتمد على هرمون الاستروجين من خلايا سرطان الثدي. معظم سرطانات الثدي هي ERα إيجابية ويعتمد على هرمون الاستروجين للنمو. جعلت هذه إشارات هرمون الاستروجين وERα هدفا للعلاج في هرمون مستقبلات سرطان الثدي إيجابية. فهم الآلية الكامنة وراء ERα المهم لتحسين نتائج العلاج، والتغلب على مقاومة العلاج، وفهم كيفية تطور سرطان الثدي.
miRNAs تلعب أدوارا حاسمة في وظائف الخلية وذلك بسبب تأثير كبير في تنظيم الجينات في مرحلة ما بعد النسخي. miRNAs هي 19-24 النيوكليوتيدات قصيرة، الذين تقطعت بهم السبل واحد، غير المكودة الرنا التي يتم نسخها أول من الحمض النووي الريبي بوليميراز الثاني في النصوص ميرنا الابتدائي (الحزب الثوري المؤسسي ميرنا). يتم معالجتها في النواة عن طريق دروشة حيز miRNAs السلائف القصير دبوس (ما قبل ميرنا) ومن ثم معالجتها بواسطة المقامر وفصلها إلى خيوط واحد لتشكيل miRNAs ناضجة في السيتوبلازم. يتم نقل miRNAs ناضجة واحد الذين تقطعت بهم السبل على البروتينات Argonaute لتشكيل معقدة RISC. ثم، يمكن للهجن miRNAs إلى المناطق 3'-غير مترجمة (3'-UTR) من مرنا الهدف، مما يؤدي إلى تنظيم مرحلة ما بعد النسخي من خلال منع ترجمة أو المهينة مرنا الهدف 2.
نظرا للدور الهام الذي يقوم به كل من الاستروجين وmiRNAs في تطور الورم، وتحديد miRNAs المرتبطة العادي أو تعطلت إشارات هرمون الاستروجين مهم من أجل تعزيز فهمنا لتطوير وتحسين العلاج من سرطان الثدي. في حين أن هناك فهم جيد لكيفية ينظم ERα الجينات ترميز البروتين، وتمديدوتفاصيل غير المكودة اللوائح RNA يبقى أن تحقيق شامل. وقد أسفرت الدراسات الأولية التي تهدف إلى توضيح اللوائح ERα من ميرنا في خطوط الخلايا سرطان الثدي نتائج متضاربة، حتى عندما يكون خط الخلية نفسها تم تحليلها 3-6. وهذا قد يكون نتيجة لعلاجات مختلفة، والاختلافات البيولوجية، واستخدام تقنيات مختلفة، وحقيقة أن صغر حجم لل miRNAs جعلها تحديا لتحليلها. هنا، يوصف بروتوكول الذي يتحكم عن الاختلافات والتحف الأسلوب.
لتحديد أي وينظم miRNAs بواسطة هرمون الاستروجين، والتنميط من الثدي نموذج سرطان محددة جيدا من النشاط ERα هو الخطوة الأولى. وقد ولدت العديد من خطوط الخلايا من الأورام سرطان الثدي ERα إيجابية الإنسان، التي تعتمد على هرمون الاستروجين مماثلة لغالبية سرطانات الثدي السريري. الخصائص الجزيئية لاثنين من هذه خطوط الخلايا، T47D وMCF7، بما في ذلك التعبير عن ERα وهدفه المصب،هرمون مستقبلات هرمون البروجسترون (PR)، والافتقار إلى التعبير عن مستقبلات HER2 الغشاء، جنبا إلى جنب مع التعبير عن الجينات التي تستجيب للتمايز الاستروجين واللمعية الظهارية، وجعلها مناسبة كنماذج للسلالة اللمعية من أورام الثدي 7-10. 17β استراديول (E2) هو الشكل السائد من هرمون الاستروجين، واتسمت تركيزات والنقاط الزمنية لتفعيل النسخي الأمثل للERα في دراسات متعددة. في هذا البروتوكول 10 نانومتر E2 العلاج لمدة 24 ساعة ويستخدم T47D وMCF7 كنماذج للنشاط ERα في خلايا سرطان الثدي 1. بالإضافة إلى ذلك، لوائح ميرنا تعتمد على الوقت يمكن تحليلها على وجه التحديد في فترة زمنية من مثل 1-72 ساعة.
ثانيا، تحليل ميرنا يواجه تحديات منفصلة، ويرجع ذلك جزئيا إلى أحجامها قصيرة. لا يتم الاحتفاظ miRNAs جيدا في إجمالي إعداد الحمض النووي الريبي عند تنفيذ Guanidinium thiocyanate-phenol/chloroform/isopropanol الأمطار RNA العادية، أو عندما الحادي ووتستخدم التنقيات العمود ANDARD. يجب أن تؤخذ للحفاظ على إثراء أو لجزء أصغر من الرنا احتياطات خاصة. عن طريق زيادة حجم الأيزوبروبانول، وتخفيض درجة الحرارة قبل الطرد المركزي (-80 ° C)، وإهمال الغسيل في الايثانول 70٪، يمكن تعزيز الاحتفاظ لل miRNAs أثناء هطول الأمطار. أو، يمكن أن تستخدم الأعمدة ومخازن محددة لذات جودة عالية وقوية إعداد الحمض النووي الريبي مجموع المحتوية ميرنا. أيضا لتحليل نفسها، أحجامها قصيرة إنشاء التحديات. لالجينوم على نطاق ميرنا الفرز، وهناك ثلاث تقنيات التنميط ميرنا المشتركة للاختيار من بينها: ميكروأرس، QPCR، والجيل القادم التسلسل. كل تقنية يمكن القيام بها باستخدام منصات مختلفة متعددة، ويطلب من الاستعدادات عينة مختلفة، مع كل المخاطر المختلفة لإدخال الأعمال الفنية. ميرنا في ميكروأري، ورصدت شريحة أو توليفها مع الآلاف من أليغنوكليوتيد]. وتستخدم هذه أليغنوكليوتيد] وتحقيقات، ولكل من لجنة التحقيقتم تصميم و لهجن لتسلسل ميرنا معينة. إعداد نموذج لميكروأرس، كما أجريت في هذه الدراسة، يثري الأول لmiRNAs ثم يدخل Cy5 وCY3 وضع العلامات على miRNAs. ميكروأري يعطي الفرصة لمراقبة مستويات التعبير النسبية لعدد كبير من الجينات في وقت واحد، هو سريع ومناسب لفحص عدد كبير من العينات، ولكن يمكن تحليل متواليات فقط موجودة على ميكروأري وسوف لا يكشف مثل التغيرات في غير معروف أو تحور miRNAs. تحليل ميكروأري كما أجريت في هذا البروتوكول يتطلب أيضا كميات كبيرة نسبيا، حوالي 5 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي مجموع لكل عينة لتحليلها. منخفض الكثافة QPCR ميرنا التنميط يتطلب مواد أقل (700 نانوغرام / عينة وتكرار)، ويسمح للكشف والقياس الكمي لل miRNAs. يمكن تحديد مستويات النص، والكمية التي يمكن أن تكون القيمة المطلقة أو كمية نسبية. يتطلب تحليل QPCR الأولى تحويل ميرنا في [كدنا]، وهنا باستخدام يحلقالتمهيدي لكل ميرنا محددة ضمان تحليل فقط ناضجة ميرنا. هذا يولد قالب أطول التي يمكن تضخيمها باستخدام التمهيدي إلى الأمام ميرنا محددة والتمهيدي عكس عالمية مكملة لتسلسل يحلق، ويمكن أن تؤوي إدراج دقق المزدوج إعتبر للخصوصية. QPCR يمكن استخدامها في شكل منخفض الكثافة حيث يمكن الكشف عن مئات لل miRNAs بالتوازي باستخدام واحد أو عدة لوحات 384 جيدا مع أزواج التمهيدي الفردية في كل بئر 11. الجيل القادم التسلسل، من ناحية أخرى، هو فقط من هذه التقنيات التي تسمح لاكتشاف الرواية، miRNAs تحور أو تحريرها، وجميع الرنا في عينة يمكن أن تكون متسلسلة 11. هذه التقنية، ولكن يتطلب خطوات متعددة لإثراء الرنا الصغيرة وانتاج مكتبة الحمض النووي الريبي الصغيرة باستخدام عدة خطوات عملية ربط رابط والتنقيات مع المخاطر المعززة اللاحقة من تحوير مستويات التعبير النسبية بين العينات. فإنه يتطلب أيضا bioinformati كبيرةتحليل خدمات العملاء. نظرا للتقنيات مختلفة لميرنا التنميط، والتقنية الأنسب يعتمد على التطبيقات. ميكروأرس هي الأكثر مناسبة عندما المواد وفيرة نسبيا والفائدة لتحديد التعبير التفاضلية لل miRNAs معروفة بالفعل. منخفض الكثافة صفائف QPCR هي الأكثر مناسبة عندما كمية محدودة من عينة متاحة ومطلوب حساسية عالية لل miRNAs المنخفضة التي أعرب عنها. التسلسل هو الأكثر ملاءمة عندما يكون مطلوبا تحليل لل miRNAs المجهول، أو تحور الأشكال الإسوية مختلفة من ميرنا.
في دراسة لل miRNAs التنظيم هرمون الاستروجين في سرطان الثدي، وتستخدم اثنين من خطوط الخلايا نموذج، T47D وMCF7، حيث كميات كبيرة من الحمض النووي الريبي متاحة بسهولة. تم تحليل كل سطر الخلية في مزارع الخلايا المنسوخة باستخدام مقاطع مختلفة، كل في مكررات التقنية من العلاج. وهذا يسمح للكشف قوية من بتكاثر، miRNAs ERα التنظيم. وتمت مقارنة مستويات التعبير النسبية ميرنا باستخدام كل من ميرنا ميكروأري وتحقيقات مزدوجة إعتبر – صفائف منخفض الكثافة (DLP-LDA) والتحقق من صحة النتائج مع QPCR محددة باستخدام كل cyanine الصبغة وكيمياء DLP. ثم تم تحليل أنظمة ميرنا أخرى في السلاسل الزمنية لتحديد التنظيم الدقيق على مر الزمن، والتي يمكن أن تساعد في التفريق الاختلافات عشوائي أو الإيقاعية من اللوائح التي يسببها هرمون الاستروجين، وتشير الآثار الأولية من الآثار الثانوية. يمكن مقارنات مع Bioinformatical الدراسات ملزم لونين من ERα المزيد من المساعدات في التفريق بين الابتدائي مقابل الآثار الثانوية. أسفر الفحص في تقييم يعول عليه لوائح ميرنا حيث يمكن ثبت أن بعد 24 ساعة العلاج E2 النصوص البروتين الترميز تم تنظيمها بسهولة ولكن تم miRNAs ناضجة لا تتأثر 1. ومع ذلك، فمن الممكن أن miRNAs تنظم في وقت لاحق نقاط الوقت، كما هو موضح في تحليل السلاسل الزمنية المحددة لل miRNAs 1. التفاصيل تحتاج إلى مزيد من استكشاف وبروتوكول المعروضة هنا يوفر robusر وسيلة لدراسة التنظيم الهرموني لل miRNAs ناضجة في خطوط خلايا سرطان الثدي.
يمكن تحديد آلية التنظيم الهرموني من ميرنا في خلايا سرطان الثدي توفير منصة لفهم هذا المرض ويمكن تقديم العلاج المحتملة لسرطان الثدي. زراعة هذه الخلايا لتوفير الظروف المثلى للعمل هرمون مهم جدا. هنا، وقد وصفت البروتوكول الذي يضمن أن هرمون الفائدة (الاستروجين) تم استبعاد قبل العلاج والذي تم استخدامه جرعة الأمثل للE2 لوقت مناسب خلال فترة العلاج. بقيت آثار أخرى عامل الهرمونية والنمو في الحد الأدنى عن طريق خفض مستويات المصل تدريجيا واستخدام DCC-FBS، وهو FBS التي تم تجريده من معظم الهرمون لها، السيتوكينات وعوامل النمو. تم استخدام الفينول الحمراء الخالية وسائل الإعلام أخرى لتقليل الآثار nonhormonal أخرى، بالنظر إلى أن الفينول الحمراء تم الإبلاغ عن أن يكون نشاطا للاستروجين وتؤثر على وظائف معينة في خطوط الخلايا 20،21. وقت تعرض الخلايا لهرمون له أهمية كبيرة. لتنظيم المرتبطة الاستروجين من الجينات، فإنه قد ثبت في وقت سابق ان 24 hrexposure تنتج استجابة كبيرة من الجينات المستهدفة مباشرة في خلايا سرطان الثدي 1،18. منذ وكتب miRNAs بواسطة الحمض النووي الريبي بوليميراز الثاني، مثل mRNAs و، فمن المتصور أن هذه النقطة الوقت المناسب للكشف عن التنظيم المباشر أيضا لل miRNAs. فمن لم يتحدد بعد إذا، وكيف تؤثر هذه miRNAs التعبير عن هذه الأهداف ER المعروفة في خلايا سرطان الثدي.
ميرنا التعبير التنميط يمكن أن يكون تحديا بسبب صغر حجم النسبي لميرنا، والحقيقة أن تسلسل ميرنا ناضجة يمكن العثور عليها أيضا في الحزب الثوري المؤسسي، ميرنا وقبل ميرنا، وبسبب عدم التجانس في المحتويات الخاصة بهم GC 22. وقد استخدمت العديد من التقنيات التنميط وكيمياء للتغلب على هذه الصعوبة. ومن بين هذه المناهج المختلفة من ميكروأري والتحليل QPCR (الشكل 2). على الرغم من أن تحظى بقبول واسع ميكروأري لكامل الجينوم الشرجysis، فإنه يمكن توفير السلبيات كاذبة وتوجد اختلافات بين المنابر المتاحة، بدءا من الكيمياء إلى تكنولوجيا الطباعة 23. كما يعرض عملية التطبيع تحديا عند تحليل عدد قليل نسبيا من الجينات ميرنا، التي تحسب بالآلاف مقارنة مع عشرات الآلاف من النصوص مرنا. QPCR، من ناحية أخرى، هي أكثر حساسية، ويتم تطبيقها على نحو أفضل عندما ينبغي أن ينظر فيها أقل الجينات. ومع ذلك، عندما أجريت في لوحات كبيرة 384 جيدا، مع تكرار تقني واحد فقط لكل لوحة، لوحات متعددة تحتاج إلى تحليل لكل عينة مما يجعل تحليل مكلفة. أيضا، في أيدينا، تم الحصول على العديد من النتائج السلبية أكثر كاذبة باستخدام تحليل DLP-LDA مقارنة ميكروأري. بالنظر إلى أن تسلسل ميرنا ناضجة موجود في الحزب الثوري المؤسسي، ميرنا ومتواليات قبل ميرنا، فإنه من مصلحة للتمييز بين هذه النصوص باستخدام تقنيات PCR 24. هي تحقيقات DLP متوفرة أيضا لمرحلة ما قبل miRNAs، وسويمكن أيضا الاشعال ecific تكون مصممة لاستبعاد مختلفة ناضجة أو السلائف المتغيرات باستخدام Cyanine صبغ التكنولوجيا QPCR.
QPCR هو المعيار الذهبي للتأكد من صحة التعبير التفاضلية من التنميط النتائج. فعالية QPCR، ومع ذلك، يعتمد على العديد من المعلمات بما في ذلك استخراج الحمض النووي الريبي، سلامة الحمض النووي الريبي (جودة)، والتوليف [كدنا]، والتصميم التمهيدي، وطريقة الكشف عن (الكيمياء)، وهذا الجين مرجعية لتطبيع البيانات 1،22،25. خيارات التصميم التمهيدي للتحليل ميرنا محدودة للغاية، منذ قصيرة طول تسلسل ميرنا لا يعطي مجالا للبكثير تصميم التمهيدي البديلة، ويمكن آوى التمهيدي واحد فقط في هذا التسلسل القصير. وبالتالي، فإن الحاجة إلى التلاعب البديلة كما هو موضح في الشكل 2. مكررات التقنية مهمة للتحقق من صحة متانة الأسلوب والتضخيم، وعملية توظيف. ويلزم مكررات البيولوجية لتمثيل variatio البيولوجية العامةن، بما في ذلك الاستجابة متغير ليجند العلاج، وتبين أن الآثار ينظر في زنزانة هي استنساخه. بناء على تجربتنا، يمكن أن يحدث تغيرات في التعبير ميرنا بين الثقافات الخلية. عادة ما تكون هذه الخلافات هي أقل من 1.3 أضعاف، ومتوسط القيم والمقابلة SD يحدد الاختلاف الطبيعية والتكنولوجية. هذا الاختلاف يمكن أن تنجم عن عوامل مختلفة بما في ذلك، كثافة الخلية، وحقيقة أن وظائف الخلية يمكن أن تتغير من مرور لمرور. لتحديد تعبيرات هامة إحصائيا الناتجة عن المعالجة يجند، أهمية قبلت على نطاق واسع هو عندما القيمة ع أقل من 0.05. هنا، وقد استخدمت اختبار t للطالب على مكررات البيولوجية والتقنية باستخدام التوزيع ثنائي الطرف وعينة معلمتين الفرق غير متكافئة. المعلمات اختبار t الأخرى موجودة، والاختيار يعتمد على الإعداد التجريبية 26.
بروتوكول مفصلة في تقييم الأنظمة الهرمونية ناضجة ميروقدمت NA في خلايا سرطان الثدي. وقد أوضح التكنولوجيات الهامة والكيمياء في التنميط والتحقق من صحة هذه ميرنا التعبير بوضوح. التكنولوجيا المختارة للدراسات ميرنا في خلايا سرطان الثدي يعتمد في النهاية على ماذا بالضبط يجري التحقيق فيها.
The authors have nothing to disclose.
نحن ممتنون للدكتور شياو ليان غاو، جامعة هيوستن، لتقديم المشورة إلى منصة ميكروأري LC العلوم ميرنا، للدكتور كارين Edvardsson، معهد كارولينسكا بالسويد، والدكتور Eylem Aydogdu، جامعة هيوستن، لتبادل الخبرات ميرنا بهم . وأيد البحوث التي أعلن عنها في هذا المنشور من قبل المعهد الوطني للسرطان التابع لمعاهد الصحة الوطنية في إطار جائزة عدد R01CA172437. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعاهد الوطنية للصحة. وأيد هذا العمل أيضا من المنح المقدمة من صندوق التكنولوجيا الناشئة تكساس، في إطار اتفاق لا. 300-9-1958.
DMEM | Life Technologies | 11885092 |
F12 | Life Technologies | 11765054 |
FBS | Sigma-Aldrich | F0926-500ML |
Penicillin Streptomycin | Life Technologies | 15140122 |
phenol red-free DMEM | Life Technologies | 11054020 |
Ultrapure Water | EMD Millipore | Specific equipment |
DCC-FBS | Sigma-Aldrich | F6765-500ML |
100X L-glutamine | Life Technologies | 25030081 |
PBS tablet | Medicago, Accurate chemicals | Accurate (BF092051-100), Medicago (09-9400-100) |
17β-estradiol | Sigma-Aldrich | E2758 |
ICI 182,780 | Sigma-Aldrich | I4409 |
Ethanol | Sigma-Aldrich | E7023-600ML |
T47D or MCF7 cells lines | American Type Culture Collection (ATCC) | T47D (ATCC HTB-133) and MCF7 (ATCC HTB-22) |
T-75 flask | VWR International LLC | BD353136 (vented cap) |
Trypsin-EDTA | Life Technologies | 25300062 |
Serological pipet | VWR International LLC | 53300. For 5mL (53300-421) |
Countess Cell Counting chamber | Life Technologies | C10228 |
Countess Automated Cell Counter | Life Technologies | C10227 |
100 mm plates | VWR International LLC | 25382-166 |
Guanidinium thiocyanate-Phenol solution (TRizol) | Life Technologies | 15596026 |
Rubber cell scraper | VWR International LLC | 82050-470 |
Guanidinium thiocyanate-Phenol-Chloroform method (miRNeasy Mini Kit/Trizol) | Qiagen | 217004 |
Rnase-Free DNase I kit (DNA degradation) | Qiagen | 79254 |
RNase-free water (Nuclease-free water) | Thermoscientific | SH30538.02 |
Nanodrop 1000 Spectrophotometer | Thermoscientific | ND-1000 |
Agilent RNA 6000 Nano Assay kit | Agilent | 5067-1512 |
Agilent 2100 Bioanalyzer | Agilent | G2938C and for software (G2946) |
All primers (except TaqMan primers) | Integrated DNA Technologies | Specific per order for each gene/miRNA |
First strand buffer, DTT, dNTPs, superscript III (Superscript III cDNA synthesis kit) | Life Technologies | 18080085 |
MicroAmp Fast 96-Well reaction plate | Life Technologies | 4346906 |
Fast Optical Adhesive Covers | Life Technologies | 4311971 |
2X SYBR green PCR master mix (Cyanine dye) | Life Technologies | 4385612 |
7500 Fast Real-Time PCR System and software | Life Technologies | 4351106 |
μParaflo Microfluidic Biochip Technology | LCSciences | MRA-1001 and AS-2001(for result analysis) |
DLP-LDA (TLDA) Megaplex Pools Assay (Rt primers/Human pool set) | Life Technologies | 4400928 |
Dual Labeled Probes (TaqMan) miRNA RT kit | Life Technologies | 4366596 |
GeneAmp PCR System 9700 thermocycler | Life Technologies | 4310899 |
Dual Labeled Probes (TaqMan) 2X Universal PCR Master Mix-No AmpErase UNG | Life Technologies | 4324018 |
7900HT Fast Real-Time PCR system | Life Technologies | 4329001 |
SDS and RQ manager softwares | Life Technologies | 4444202 |
NCode miRNA First-Strand cDNA Synthesis and qRT-PCR Kit | Life Technologies | MIRC-50 |
10X DPL (TaqMan) RT primers | Life Technologies | Specific for each miRNA |
20X DPL (TaqMan) real-time assay primer | Life Technologies | Specific for each miRNA |