Генетическое изучение регенерации аксонов с искусственного взрослых нейронов ганглиев

Хорошо известно, что зрелые нейроны в центральной нервной системе (ЦНС), не может восстановить свои аксоны после травмы в связи со снижением внутреннего способность поддерживать рост аксонов и враждебной среде, в зрелом ^1,2 ЦНС. В отличие от зрелых нейронов в периферической нервной системы (ПНС) легко восстанавливать после травм ^3. Взрослые спинномозговых ганглиев (DRG) нейронов хорошо известны надежно восстанавливать после повреждений периферических нервов. Каждый нейрон DRG растет один аксон из клетки сомы, которая разделяется на две ветви аксонального: периферические ветви, иннервирующие периферический цели и центральный филиал распространяются на спинной мозг. Травмы периферических DRG результаты аксонов в регенерации аксона существенное, в то время как центральные аксоны в спинной мозг восстанавливает плохо после травмы. Однако, если периферическое аксонального повреждения происходит до травмы спинного мозга (этот процесс называется кондиционирования поражения), регенерацию аксонов центральной greatlу улучшилось ^4. Кроме того, центральные аксоны DRG нейроны одни и те же враждебном окружении как убыванию кортикоспинальных аксонов в спинном мозге. Вместе, он предположил, что молекулярные механизмы, контролирующие регенерацию аксонов взрослых нейронов DRG могут быть использованы для повышения ЦНС Аксон регенерации. В результате взрослые нейроны DRG настоящее время широко используются в качестве модельной системы для изучения восстановительного роста аксонов ^5-7.

Здесь мы опишем метод взрослых DRG нейрона культуры, которая может быть использована для генетического исследования регенерации аксонов в пробирке. В этой модели для взрослых DRG нейронов генетически модифицированных с помощью электропорации опосредованной трансфекции гена ^6,8. По трансфекции нейронов с ДНК плазмиды или Si / ShRNA, такой подход позволяет как усиление и потерей функции экспериментов по исследованию роли любого гена интересов, в аксон роста у взрослых нейронов DRG. Когда нейроны трансфицированных Si / ShRNA, целевой белок является эндогеннымОбычно обедненного через 3-4 дня в области культуры, во время которых высокие темпы роста аксонов уже произошло, в результате чего с потерей функциональных исследований менее эффективными. Чтобы решить эту проблему, метод, описанный здесь, включает в себя повторное приостановление и повторное покрытие шаг после трансфекции, которая позволяет аксонам повторно вырастить из нейронов в отсутствие целевого белка. Наконец, мы приведем пример использования этой модели в пробирке для изучения роли аксона регенерации связанных генов, с-Jun, в качестве посредника аксона роста у взрослых DRG нейронов ^9.