Avaliação de Biomateriais para ampliação vesical utilizando análises cistométricos Em modelos de roedores Vários

Os métodos cirúrgicos 1. Preparação Cirúrgica e Anestesia Configure o campo cirúrgico estéril com os instrumentos necessários cirúrgicos: tesouras de barbear, pinças com dentes, finas pinças atraumáticas, motorista agulha fina, gaze, tesoura, tesoura Metzenbaum tenotomia, lâmina de bisturi, agulha hipodérmica calibre 30, encheu salina seringa de 1 mL, quatro 6-0 de polipropileno, poliglactina 7-0 sutura, sutura poliglactina 4-0. Anestesiar o animal com a inalação de isoflurano na câmara de indução. Confirme indução completa do animal antes de transferir para o campo cirúrgico. Assegure-se que o tubo de anestesia por inalação está na posição apropriada para ter anestesia contínua. Coloque o animal em decúbito dorsal a cortina estéril. [Para a análise cistométrica, consulte a seção abaixo na tunelização do cateter de cistostomia.] Use a tesoura de corte para remover a pele da parte inferior do abdômen. Preparação do abdômen com atadine e etanol a 70%. Antes da incisão, um analgésico tal como buprenorfina (0,05-0,1 mg / kg) pode ser injectado por via subcutânea para controlo da dor perioperatória. 2. Incisão e exposição da Bexiga Fazer um centímetro 1-2 (dependente do tamanho do animal e se rato ou ratinho) incisão na linha média inferior com o bisturi através da pele. Aprofundar a incisão na porção inferior da incisão através do músculo rectus tomando cuidado para não ferir o intestino subjacente ou da bexiga. Utilizando uma pinça dentada, elevar o músculo reto e dissecar a superfície livre posterior do músculo com uma tesoura Metzenbaum finas. Incisão no restante do músculo na linha média para o comprimento de toda a sua incisão da pele. Entregar a bexiga através da ferida incisional (Figura 1). A bexiga é geralmente o órgão mais dependente na pelve. (No homem, a próstata é realmente mais dependente e é maior do que obexiga descomprimido.) O local de estadia sutura uma através da parede posterior da bexiga, e em seguida uma outra através da parede anterior da bexiga usando 6-0 fio de polipropileno. Coloque pontos adicionais lateralmente. Não amarrar essas suturas. Quando as suturas são mantida esticada, a bexiga terá uma configuração quadrada medindo aproximadamente 1 cm 2 (Figura 2). Tenha cuidado para não ter muita tensão sobre estas suturas como eles podem facilmente ser puxado através do tecido da bexiga. Incisão da bexiga longitudinalmente através da parede anterior da bexiga (apenas inferior à cúpula da bexiga) na linha média para cerca de 1 cm (1,5-2 cm na bexiga de rato). 3. Anastomose do andaime Com uma tesoura fina, cortar o andaime de seda para a área aproximada da lesão da bexiga. Usando sutura de poliglactina 7-0, começar em um canto do andaime e sutura da bexiga em um processo contínuo, executandomoda para criar uma vedação estanque a toda a volta do defeito (Figura 3). Testar a integridade da anastomose por enchimento da bexiga com uma solução salina estéril por incutir-lo através da parede da bexiga com uma agulha hipodérmica de calibre 30. Se um vazamento for encontrado, este pode ser fechado com uma sutura de poliglactina adicional interrompido 7-0 para fechar a lacuna. Reduzir a volta da bexiga reconstruída no abdômen. 4. Encerramento Incisional Antes do encerramento da parede abdominal, injectar o músculo rectus e tecido subcutâneo com bupivicaine para anestesia local (<3 mg / kg de 0,25%). O músculo reto Reapproximate com uma sutura contínua de poliglactina, correndo por 4-0. Feche a pele com uma sutura contínua de poliglactina, correndo por 4-0. Limpar e secar a incisão (Figura 4). Transfira o animal em uma gaiola, morna limpa para o despertar da anestesia. </ol> Os passos para a colocação do cateter cistostomia para análise cistométrica são como se segue: 5. Tunelização do cateter de cistostomia Configure o campo cirúrgico estéril com os instrumentos necessários cirúrgicos: tesouras de barbear, pinças com dentes, finas pinças atraumáticas, motorista agulha fina, gaze, tesoura Metzenbaum, tesoura tenotomia, pinça curva pequena, lâmina de bisturi, de polipropileno 6-0, 4-0 poliglactina sutura, 3-0 sutura de seda (sutura de seda 4-0 para ratos), agulha 18G, 22G a ponta da agulha romba, agulha 25G, 1 mL de seringa preenchida salina, tubagem de polietileno 50 (PE-50) cortada para um comprimento de 10 ~ cm. Incendiar o final do tubo de PE-50 por suavemente expondo-o a uma chama. Tenha cuidado para não derreter o final desligado ou ocluir a luz (isto pode ser verificado pela injeção de solução salina através de uma agulha 25G conectado ao "não-queimado" final e garantindo o fluxo). Isto serve como uma âncora para manter o tubo dentro da bexiga (Figura 5). <li> Anestesie o animal, tal como acima no passo 1.2. Use as tesouras de corte para remover o pêlo, tanto do dorso do animal entre a escápula e parte inferior do abdómen na ventrum. Prep as áreas com betadine e etanol a 70%. Coloque o animal deitado no pano. Faça uma incisão de 1 cm no dorso entre a escápula. Usando o tesoura Metzenbaum, desenvolver um plano entre a pele eo músculo subjacente, colocando as pontas dos tesoura no plano e espalhando-los para criar um túnel em torno do abdómen ventral. Reposicionar o supino animal. Fazer a sua incisão abdominal e expor a bexiga como acima nos passos 2,1-2,4. Reduzir a bexiga volta para o abdômen. Coloque um grampo pequeno em seu túnel subcutâneo criado em 5,6 passo a partir de sua incisão na pele dorsal. Usando os dedos para proteger o conteúdo intra-abdominais, perfuram através da parede abdominal com as pontas da pinça no abdômen. Segure a sMooth final do tubo de PE-50 com a braçadeira e puxá-lo de volta através da incisão dorsal. Assegurar que a extremidade bulbed não é puxado após a parede abdominal (Figura 6). 6. Colocar o tubo Cistostomia Entregar a bexiga através da incisão. Deste ponto em diante, a bexiga deve ser tratado com pinças finas para evitar trauma à bexiga que poderia causar lesão ou inflamação que pode distorcer os resultados cistometria ou resultar em desconforto adicional para o animal no pós-operatório. Anote o local proposto para o tubo de cistostomia. Ele deve ser colocado na cúpula da bexiga (superior ao segmento augment). Isto irá evitar acotovelamento ou oclusão do tubo. Usando o fio de polipropileno 6-0, colocar um ponto em bolsa na cúpula da bexiga, da seguinte maneira: lugar a reposição primeiro através da parede da bexiga longitudinalmente, lateral para o local proposto para o tubo de cistostomia. Deixar um grampo pequeno na extremidade solta de modo que a sutura não seja inadvertidamente puxado todo o caminho através. Coloque o próximo lançamento numa direcção transversal, começando primeiro entrar na parede da bexiga ligeiramente lateral para a saída do seu primeiro lance. Não puxe o fio esticado. Coloque o seu paralelo sutura ao lado de seu primeiro (longitudinalmente) vai para a bexiga apenas cranialmente ao local de saída de sua sutura, última transversal. A reposição quarto começará lateral à saída do último ponto final e ao lado da entrada para a sua reposição muito primeiro. Feito correctamente, isto forma um quadrado circunferencial em torno do local do cateter proposto (Figura 7). Utilizando uma agulha de 18G, perfurar a parede da bexiga, no centro da sutura em bolsa. Tenha cuidado para não furar muito profundamente (apenas o suficiente para ser intraluminal). Coloque as pontas de seus pinça fina na abertura e espalhar suavemente para alargar o buraco. Introduza a extremidade bulbed do cateter dentro do defeito nobexiga até que seja intraluminal. Puxe a sutura em bolsa apertada ao redor do cateter e amarrá-lo para baixo. Isto deve cinch da parede da bexiga em torno do cateter, mantendo-o no lugar (Figura 8). Pegue uma das extremidades da sutura e envolvê-la em torno do cateter e uma vez amarrar esse baixo para proteger ainda mais o cateter. 7. Testando o cateter e fechar a incisão abdominal Com uma agulha de seringa de 1 mL e 25G, inserir a agulha no tubo e, lentamente, injectar solução salina para distender a bexiga. Observe se há vazamento ao redor do cateter. Depois de ver vazando pela uretra, aspirar o soro fisiológico para descomprimir a bexiga novamente. Feche o incisão abdominal como acima nos passos 4.1-4.4. 8. Fechamento da incisão dorsal e protegendo o cateter (para ratos) Reposicionar o animal propenso. Cortar o tubo do cateter ao nível da pele com a tesoura. Insira um 22G contundente tip agulha no tubo. Feche a pele sobre o tubo com poliglactina 4-0 de uma forma em execução. Deixar o cubo da agulha de extrusão a partir da pele. Coloque uma tampa linha intravenosa na agulha sem corte. Utilizando 3-0 sutura de seda, proteger a ponta do cateter para a pele (Figura 9). Limpar a incisão. Transfira o rato em uma gaiola, morna limpa para o despertar da anestesia. 8. * Fechamento da incisão dorsal e protegendo o cateter (para camundongos ou ratos) * Ocluir a extremidade distai do cateter por torção ou utilizando uma chama para derreter o fim. Bobina * o fim da tubagem e deixá-lo na bolsa subcutânea no dorso do animal (não cortar tubos para o encurtar) (Figura 10). * Feche a pele sobre o tubo com poliglactina 4-0 em uma forma de corrida (Figura 11). * No dia da cistometria, preparar a incisão dorsal com betadine e etanol a 70%. Abrir a incisão dorsal sob anestesia e remover o tubo enrolado a partir da bolsa subcutânea. Feche o incisão. Desperte o animal de anestesia e executar cistometria quando estiver completamente acordado. 9. Resultados representante – Métodos Cirúrgicos A bexiga reconstituídas deve ser tão estanque a água quanto possível para evitar complicações relacionadas com um vazamento urinária significativa (Figura 3). Dor ou desconforto geralmente se manifestar como tremores ou arranhando e mordendo a incisão abdominal. Isso pode ser gerenciado com injeções diárias subcutâneas de um não-esteróides anti-inflamatórios, como meloxicam (0,5-1,0 mg / kg por via subcutânea). Tipicamente, os animais requerem apenas as injecções para os primeiros 3 dias pós-operatório. Isto pode ser suplementado com um opióide, tal como a buprenorfina (0,05-0,1 mg / kg por via subcutânea a cada hr 8-12), conforme necessário. Os animais devem ser monitorizados 3 vezes por dia durante os primeiros 3 dias pós-operatório, TWgelo por dia para o pós-operatório 3-5 e, em seguida, depois diariamente para avaliar a dor, sinais de infecção, cicatrização adequada, atividade, grooming, e turgor da pele. Antibióticos (Baytril, 5mg/kg subcutânea cada hr 24 num volume não superior a 0,1 mL) são dadas para a cirurgia hr primeiro 72 a seguir, como profilaxia contra a infecção cirúrgica. Os sinais de recuperação normal são deambulação normal e os níveis de atividade, alimentação adequada e beber, ausência de dor ou desconforto (sem vocalização) e socialização normal com cagemates. Um tempo de recuperação de pelo menos 5-7 dias deve ser dada antes da análise cistométrica, para permitir a cura da bexiga e diminuição da inflamação que poderiam potencialmente afectar os resultados. Análises cistométricos 10. Análise cistométrica Awake Configuração descrita com MLT844 ADInstruments com captura de dados e análise com LabChart v6 (ADInstruments) e infusão com uma bomba de seringa Harvard 22 (Harvard Apparatus, Holliston, MA), embora outros sistemas comparáveis ​​estão disponíveis (Figura 12). Calibrar o volume e pressão com base nas especificações do sistema cistométrica usado. Colocar os animais em gaiolas metabólicas (gaiolas com um chão de rede de arame), que são suspensas sobre uma escala. A escala é ligada a um transdutor. Purga-se o sistema de quaisquer bolhas de ar e assegurar o fluxo contínuo a partir da bomba de infusão. Ligue o sistema de captação de dados para um computador e observar os traçados de dados. Ajuste a escala em conformidade. A pressão da bexiga e do volume de urina será continuamente registrado. O acesso dos cateteres suprapúbicas com uma agulha de 27G ligado através de um tubo em T para o transdutor de pressão e da bomba de infusão. Iniciar a infusão de solução salina fisiológica a 12,5 mL / min para o rato e 100 uL / ​​min para o rato. Permitir que o padrão de micção rastreio para estabilizar (aumento da bexiga pressão, seguido por um vazio). Isso normalmente leva aproximadamentemadamente 10-20 minutos. Registre os ciclos de micção para 45-120 minutos ou, pelo menos, ciclos de esvaziamento 3-4. Observar procedimento completo em tempo real para solucionar problemas de complicações que levam ao artefato (ou seja, acotovelamento cateter, obstrução, etc, veja abaixo discussão). Parar a infusão, desligar o cateter a partir do sistema, e devolver o animal para a sua gaiola. 11. Análise cistométrica Inconsciente (Nenhum cateter suprapúbica) Anestesiar o animal com uretano (1-2 g / kg) de injecção intraperitoneal (IP). Expor a bexiga como acima nos passos 1.3-2.4. Calibrar o sistema como no passo 9.2. Prepare o sistema como no passo 9,4-9,5. Inserir uma agulha 27G ligado através de um tubo em T para o transdutor de pressão e uma bomba de infusão no aspecto lateral da bexiga. Registre os ciclos de micção para 45-90 minutos. Parar a infusão, remover a agulha da bexiga e euthanize do animal. </ Li> 12. Resultados representativos – Análises cistométricos Traçados urodinâmicos podem ser analisados ​​para derivar parâmetros, tais como volumes anulados, conformidade, picos de pressão miccional, intervalo entre a contração, o tempo de ciclo de micção e volumes pós vazios residuais. Cystometrogram pode ser dividido em um recheio e uma fase de esvaziamento. Uma fase de enchimento normal é a porção do ciclo em que a micção bexiga enche-se com muito pouca alteração na pressão intravesical. Uma fase de esvaziamento normal do traçado consiste de um aumento constante da pressão intravesical correspondente à contracção do detrusor. A maior pressão alcançada durante a fase de esvaziamento do traçado é chamado de pressão miccional pico. A pressão miccional elevado pico poderia sugerir um padrão miccional obstrutivo, uma bexiga hipercontrátil ou uma torção no cateter SP. A conformidade pode ser calculada através da aquisição de a razão entre o volume instilado during a fase de enchimento e da mudança de pressão (respeito = AV / AP). A bexiga hypocompliant é aquele que é incapaz de acomodar adequados volumes urinários a baixas pressões. O intervalo de intercontraction pode ser calculada através da análise do tempo entre duas contracções como visto na cystometrogram. Um intervalo curto intercontraction é sugestivo de uma bexiga irritável. O tempo de ciclo de micção refere-se ao tempo que leva para um enchimento completo ea micção fase para completar e pode facilmente ser verificado por análise do traçado. Na conclusão do cistometria, pós-void residual (PVR) pode ser obtido. Isto é feito por aspiração do cateter suprapúbica após a conclusão de uma contracção do detrusor. Estes parâmetros ajudar o investigador objetiva estudar a dinâmica da bexiga como a bexiga enche e esvazia. Figura 1. Fotografia da incisão abdominale extrusão da bexiga. Figura 2. Incisão da bexiga com a exposição do lúmen da bexiga. Figura 3. Integração do implante para a parede da bexiga. Figura 4. Fotografia da incisão fechada. Figura 5. Extremidade alargada do tubo PE-50. Figura 6. PE-50 tubagem (cateter) através da incisão dorsal. Figura 7.Sutura em bolsa. Figura 8. Fixação do cateter para a bexiga. Figura 9. Hub cateter Secured. Figura 10. Coiled tubo na bolsa subcutânea. Figura 11. Fechamento incisional dorsal. Figura 12. Exemplo cistométrica set-up. Figura 13. Cistometria Representante de rastreamento.