Evaluatie van biomaterialen voor Blaas Vergroting van het gebruik Cystometrische analyses in verschillende diermodellen

Chirurgische methoden 1. Chirurgische Voorbereiding en Anesthesie Stel de steriele chirurgische veld met de nodige chirurgische instrumenten: scheren scharen, tangen met tanden, fijne atraumatische tang, fijne naald bestuurder, gaas, Metzenbaum schaar, tenotomy schaar, scalpel, 30 gauge injectienaald, zoutoplossing gevuld 1 ml spuit, vier 6-0 polypropyleen hechtingen, 7-0 polyglactine hechtdraad, 4-0 polyglactine hechtdraad. Verdoof het dier met isofluraan inademing in de inductie kamer. Bevestig volledige inductie van het dier voordat het overbrengen van de chirurgische veld. Zorg ervoor dat de inhalatie-anaesthesie buis in de juiste positie om continue verdoving te hebben. Leg het dier op de rug steriel laken. [Voor Cystometrische analyse, zie hieronder in de ondertunneling van de cystostomy katheter.] Gebruik het scheren schaar om de haren te verwijderen uit de onderbuik. Bereid de buik met zijntadine en 70% ethanol. Voorafgaand aan insnijding een analgeticum zoals buprenorfine (0,05-0,1 mg / kg) kan subcutaan voor PO pijnbestrijding. 2. Incisie en blootstelling van de blaas Maak een 1-2 cm (afhankelijk van de grootte van de dieren en of de rat of muis) lager middellijn incisie met de scalpel door de huid. Verdiep de incisie in het onderste gedeelte van de incisie door de rectus spier zorg ervoor dat u de onderliggende darm of blaas verwonden. Met behulp van getande tang, verheffen de rectus spieren en ontleden gratis het achterste oppervlak van de spier met fijne Metzenbaum schaar. Incisie de rest van de spier in de middellijn voor de gehele lengte van de incisie in de huid. Lever de blaas via de incisie wond (figuur 1). De blaas is meestal het meest afhankelijk orgaan in het bekken. (In de man de prostaat eigenlijk afhankelijke en groter is dan degedecomprimeerd blaas.) Plaats een verblijf hechtdraad door de achterste wand van de blaas, en dan nog door de voorste wand van de blaas met behulp van 6-0 polypropyleen hechtdraad. Zijdelings Plaats extra hechtingen. Bind deze hechtingen. Wanneer de hechtingen worden strak gehouden wordt de blaas een vierkante vorm van ongeveer een cm 2 (figuur 2). Wees voorzichtig niet te veel spanning op deze hechtingen hebben als zij gemakkelijk kunnen worden getrokken door de blaas weefsel. Lengterichting incisie van de blaas via de voorste blaaswand (net inferieur aan de koepel van de blaas) in de middellijn van ongeveer 1 cm (1,5-2 cm in de rat blaas). 3. Anastomose van de steiger Met behulp van fijne schaar, knip de zijde steiger aan de oppervlakte van ongeveer de blaas defect. Met behulp van 7-0 polyglactine hechtdraad, beginnen bij een hoek van het schavot en hechten aan de blaas in een continue, hardlopenmode tot een waterdichte afdichting geheel rondom het defect (figuur 3). Test de integriteit van de anastomose vult de blaas steriele zoutoplossing door prenten het door de wand van de blaas 30 gauge injectienaald. Als er een lek wordt gevonden, kan dit worden afgesloten met een extra onderbroken 7-0 polyglactine hechtdraad tot de kloof te dichten. Verminder de gereconstrueerde blaas terug in de buik. 4. Incisie Sluiting Voorafgaand aan de sluiting van de buikwand, injecteer de rectus spier en onderhuids weefsel met bupivicaine voor lokale anesthesie (<3 mg / kg van 0,25%). Reapproximate de rectus spier met een continue, hardlopen 4-0 polyglactine hechtdraad. Sluit de huid met een continue, hardlopen 4-0 polyglactine hechtdraad. Reinig en droog de ​​incisie (figuur 4). Breng het dier in een warme, schone kooi voor het ontwaken uit de narcose. </ol> De stappen voor het cystostomy katheter plaatsing voor Cystometrische analyse zijn als volgt: 5. De ondertunneling van de cystostomy Katheter Stel de steriele chirurgische veld met de nodige chirurgische instrumenten: scheren scharen, tangen met tanden, fijne atraumatische tang, fijne naald bestuurder, gaas, Metzenbaum schaar, tenotomy schaar, kleine gebogen klem, scalpel, 6-0 polypropyleen, 4-0 polyglactine hechtdraad, 3-0 zijden hechtdraad (4-0 zijden hechtdraad voor muizen), 18G naald, 22G stompe punt naald, 25G naald, 1 ml fysiologische zoutoplossing gevulde injectiespuit, polyethyleen buis 50 (PE-50) gesneden voor een lengte van ~ 10 cm. Flare het einde van de PE-50 buis voorzichtig bloot te stellen aan een vlam. Zorg ervoor dat aan het einde smelten uit of af te sluiten het lumen (dit kan worden geverifieerd door het injecteren van een zoutoplossing door middel van een 25G naald aangesloten op de "niet-uitlopende" einde en het waarborgen van stroom). Dit dient als anker voor de buis in de blaas (figuur 5) te handhaven. <li> Verdoof het dier zoals hierboven in stap 1.2. Gebruik het scheren schaar om de vacht te verwijderen uit het dorsale gedeelte van het dier tussen het schouderblad en de onderbuik van de ventrum. Prep de gebieden met betadine en 70% ethanol. Plaats het dier gevoelig op het laken. Maak een 1 cm incisie op de rug tussen het schouderblad. Met behulp van de Metzenbaum schaar, het ontwikkelen van een vliegtuig tussen de huid en de onderliggende spier door het plaatsen van de uiteinden van de schaar in het vliegtuig en verspreiden ze een tunnel maken om naar de ventrale buik. Plaats het dier rug. Maak uw incisie in de buikwand en bloot de blaas, zoals hierboven in stappen 2.1-2.4. Terug Verminder de blaas in de buik. Plaats een kleine klem in je onderhuidse tunnel gemaakt in stap 5.6 vanaf uw dorsale incisie in de huid. Met behulp van uw vingers om de intra-abdominale inhoud, prikken beschermen door de buikwand met de toppen van de klem in de buik. Pak de smooth einde van de PE-50 buis met de klem en trek het terug door de dorsale incisie. Controleer de bulbed einde niet wordt getrokken langs de buikwand (figuur 6). 6. Het plaatsen van de cystostomy Tube Lever de blaas via de incisie. Vanaf dit punt, moet de blaas worden behandeld met een fijne tang om trauma te voorkomen dat de blaas dat schade of ontsteking kunnen veroorzaken dat kan tot gevolg hebben uw Cystometrische resultaten of leiden tot een extra ongemak voor het dier na de operatie. Noteer de voorgestelde locatie voor de cystostomy buis. Het moet worden geplaatst op de koepel van de blaas (superieur aan de augment segment). Dit voorkomt knikken of occlusie van de buis. Met behulp van de 6-0 polypropyleen hechtdraad, plaats een pursestring steek aan de koepel van de blaas op de volgende manier: plaats de eerste worp door de wand van de blaas longitudinaal, lateraal van de voorgestelde locatie voor de cystostomy buis. Laat een kleine klem op het losse uiteinde, zodat de hechting niet per ongeluk helemaal door getrokken. Plaats de volgende worp in een dwarsrichting, begin van de eerste in te gaan op de blaaswand een beetje lateraal naar de uitgang van je eerste worp. Trek niet aan de hechtdraad strak. Plaats uw volgende hechtdraad parallel aan de eerste (longitudinaal) in te gaan op de blaas net craniale naar de uitgang site van uw laatste, dwars hechtdraad. De vierde worp begint lateraal naar de uitgang van de laatste steek en het einde naast de ingang voor uw allereerste worp. Correct gedaan, vormt dit een omtrek vierkant rond de voorgestelde katheter site (figuur 7). Met een 18G naald de blaas doorboren in het midden van de hechtdraad pursestring. Wees voorzichtig niet te doorboren te diep (net genoeg om intraluminale). Plaats de toppen van je fijn pincet in de opening en voorzichtig te verspreiden om het gat te vergroten. Plaats het bulbed einde van de katheter in het defect in deblaas tot het intraluminale. Trek de pursestring hechting strak om de katheter en bind het op. Dit cinch de blaas rondom de catheter hem in plaats (figuur 8). Neem een ​​uiteinde van de hechtdraad en wikkelen rond de katheter eenmaal binden dit aan verder te verzekeren de katheter. 7. Het testen van de katheter en sluiten van de incisie in de buikwand Met een 1 ml spuit en naald 25G, steek de naald in de slang en injecteer langzaam zoutoplossing om de blaas opgerekt. Let op voor lekken rond de katheter. Zodra u lekt uit de plasbuis, zuigen de zoutoplossing om de blaas weer te decomprimeren. Sluiten buikoperatie hierboven in stappen 4.1-4.4. 8. Het sluiten van de Dorsale incisie en Beveiliging van de katheter (voor ratten) Plaats het dier gevoelig. Snijd de katheter slangen op het niveau van de huid met de schaar. Plaats een 22G botte tip naald in de slang. Sluit de huid over de slang met 4-0 polyglactine in een actieve manier. Laat de naald hub extruderen van de huid. Plaats een intraveneuze lijn dop aan de stompe naald. Met behulp van 3-0 zijde hechtdraad, zet de katheter tip om de huid (Figuur 9). Maak de incisie. Breng de rat in een warme, schone kooi voor het ontwaken uit de narcose. 8. * Het sluiten van het dorsale incisie en Beveiliging van de katheter (voor muizen of ratten) * Omsluiten het distale einde van de katheter door knikken noch met een vlam aan het einde smelten. * Rol het einde van de slang en laat het in de onderhuidse zakje op de rug van het dier (niet knippen slang om het te verkorten) (figuur 10). * Sluit de huid over de slang met 4-0 polyglactine in een actieve manier (figuur 11). * Op de dag van cystometry, voorbereiding van de dorsale incisie met betadine en 70% ethanol. Open de dorsale incisie onder narcose en verwijder de opgerolde slang van de subcutane zakje. Sluit de incisie. Ontwaak het dier van anesthesie en het uitvoeren van cystometry als het helemaal wakker. 9. Representatieve resultaten – chirurgische methoden De gereconstrueerde blaas moet zo waterdichte mogelijk complicaties een significante urine lek (figuur 3) te vermijden. Pijn of ongemak meestal manifesteren als rillingen of krabben en knagen aan de incisie in de buikwand. Dit kan worden beheerd met de dagelijkse subcutane injecties van een niet-steroïdale anti-inflammatoire, zoals meloxicam (0,5-1,0 mg / kg subcutaan). Kenmerkend is dat de dieren alleen eisen dat de injecties voor de eerste 3 dagen na de operatie. Dit kan worden aangevuld met een opioïde, zoals buprenorfine (0,05-0,1 mg / kg subcutaan per 8-12 uur) nodig. De dieren moeten gecontroleerd worden 3 maal per dag gedurende de eerste 3 postoperatieve dagen, twijs per dag voor post-operatieve dag 3-5 en vervolgens per dag daarna te evalueren voor pijn, tekenen van infectie, adequate wondgenezing, activiteit, het verzorgen, en de huid turgor. Antibiotica (Baytril, 5mg/kg subcutaan om de 24 uur in een volume van ten hoogste 0,1 ml) worden gegeven voor de eerste 72 uur na de operatie, als chirurgische profylaxe tegen infecties. Tekenen van normaal herstel zijn normale beweeglijkheid en activiteit, passende voeding en drinken, de afwezigheid van pijn of ongemak (geen vocalisatie) en normale socialisatie met lotgenoten. Een hersteltijd van minimaal 5-7 dagen moet worden gegeven voordat Cystometrische analyse, om te zorgen voor blaas genezing en minder ontstekingen die mogelijk van invloed kunnen zijn op de resultaten. Cystometrische Analyses 10. Awake Cystometrische Analyse Setup beschreven met MLT844 ADInstruments met data-acquisitie en-analyse met LabChart v6 (ADInstruments) en infusie met een Harvard-22 spuitpomp (Harvard Apparatus, Holliston, MA), hoewel andere vergelijkbare systemen beschikbaar zijn (figuur 12). Kalibreer zowel in volume en de druk op basis van de specificaties van de gebruikte Cystometrische systeem. Plaats de dieren in metabole kooien (kooien met een gaas vloer), die zijn opgehangen over een schaal. De schaal is verbonden met een transducer. Spoel het systeem van eventuele luchtbellen en zorgen voor voortdurende stroom van de infuuspomp. Sluit de data capture-systeem op een computer en observeren voor data traces. Dienovereenkomstig aan te passen schaal. Blaasdruk en urine volume continu worden geregistreerd. Toegang tot de suprapubische catheters met een 27G naald via een T-buis naar de druksensor en infusiepomp. Begin de infusie van fysiologische zoutoplossing tegen 12,5 pL / min voor de muis en 100 pL / min voor de rat. Laat de plassen patroon tracing te stabiliseren (blaas drukverhoging, gevolgd door een vide). Dit duurt meestal ongeveerongeveer 10-20 minuten. Noteer de mictie cycli voor 45-120 minuten of minimaal 3-4 plassen cycli. Let op hele procedure in real-time aan het oplossen van problemen op complicaties die leiden tot artefact (dat wil zeggen katheter knikken, obstructie, etc, zie hieronder discussie). Stop de infusie, koppelt u de katheter uit het systeem en breng het dier naar zijn kooi. 11. Onbewuste Cystometrische Analyse (Geen suprapubische katheter) Verdoven dier met urethaan (1-2 g / kg) intraperitoneale injectie (IP). Ver blaas hierboven stappen 1.3-2.4. Kalibreer het systeem in stap 9.2. Bereid het systeem als in stap 9.4-9.5. Plaats een 27G naald via een T-buis aan de druksensor en de infuuspomp in de laterale aspect van de blaas. Noteer de mictie cycli voor 45-90 minuten. Stop de infusie, verwijder de naald uit de blaas en laten inslapen van het dier. </ Li> 12. Representatieve resultaten – Cystometrische Analyses Urodynamische traces kunnen vervolgens worden geanalyseerd voor het afleiden van parameters zoals vervalt volumes, compliance, piek ongeldig druk, onder krimp interval, mictie cyclustijd en post ongeldig resterende volumes. Cystometrogram kan worden onderverdeeld in een vul-en een ongeldig fase. Een normale vullen fase is het deel van de mictiecyclus waarin blaas gevuld met weinig verandering in intravesicale druk. Een normale urinelozing fase van de opsporing bestaat uit een gestage stijging van de intravesicale druk die overeenkomt met de detrusor contractie. De hoogste druk bereikt tijdens het plassen aan fase van de opsporing wordt aangeduid als de piek plassen druk. Een hoge piek plassen druk zou kunnen wijzen op een obstructieve mictie patroon, een hypercontractile blaas of een knik in de SP katheter. Naleving kan worden berekend door het verwerven van de verhouding tussen het volume doordrongen During de vulfase en de verandering in druk (naleving: AV / AP). Een hypocompliant blaas is er een die niet in staat is om voldoende urine-volumes bieden bij lage druk. De intercontraction interval kan worden berekend door het analyseren van de tijd tussen twee weeën zoals te zien op de cystometrogram. Een korte intercontraction interval is suggestief voor een prikkelbare blaas. De mictie cyclustijd verwijst naar de tijd die nodig is voor een volledige vulling krijgen en kan fase in te vullen en kan gemakkelijk worden vastgesteld door analyse van de tracering. Aan het einde van de cystometry, kan na de ongeldig overblijvende (PVR) worden verkregen. Dit wordt gedaan door opzuigen van de suprapubische katheter na de voltooiing van een detrusor contractie. Deze parameters helpen de onderzoeker objectief de blaas dynamiek te bestuderen als de blaas zich vult en leegt. Figuur 1. Foto van de incisie in de buikwanden extrusie van de blaas. Figuur 2. Blaas incisie met de blootstelling van de blaas lumen. Figuur 3. De integratie van het implantaat op de blaaswand. Figuur 4. Foto van de gesloten insnijding. Figuur 5. Uitlopende einde van de PE-50 buis. Figuur 6. PE-50 buis (catheter) door de dorsale incisie. Figuur 7.Pursestring hechtdraad. Figuur 8. Het beveiligen van de katheter naar de blaas. Figuur 9. Secured katheter hub. Figuur 10. Spiraal slang in subcutane zakje. Figuur 11. Dorsale incisie sluiting. Figuur 12. Voorbeeld Cystometrische set-up. Figuur 13. Vertegenwoordiger cystometry tracing.