Évaluation des biomatériaux pour l'augmentation de la vessie à l'aide des analyses cystométriques dans des modèles rongeurs Divers

Méthodes chirurgicales 1. Préparation chirurgicale et d'anesthésie Mettre en place le champ opératoire stérile des instruments nécessaires chirurgicaux: cisailles, pinces à raser avec des dents, fines pinces atraumatiques, chauffeur à l'aiguille fine, de la gaze, des ciseaux, des ciseaux Metzenbaum ténotomie, lame de scalpel, 30 aiguille hypodermique de calibre, une solution saline rempli seringue de 1 ml, quatre 6-0 points de suture en polypropylène, 7-0 suture polyglactine, sutures polyglactine 4-0. Anesthésier l'animal à l'inhalation d'isoflurane dans la chambre d'induction. Confirmez induction complète de l'animal avant de les transférer dans le domaine chirurgical. Assurez-vous que le tube anesthésie par inhalation est dans la position appropriée pour avoir une anesthésie continue. Placez le dos des animaux sur le champ stérile. [Pour une analyse cystomanométrique, voir la section ci-dessous dans un tunnel du cathéter cystostomie.] Utilisez des cisailles de rasage pour enlever la fourrure du bas ventre. Préparation de l'abdomen avec êtreTadine et de l'éthanol 70%. Avant l'incision, un analgésique comme la buprénorphine (0,05-0,1 mg / kg) peut être injecté par voie sous cutanée pour le contrôle de la douleur périopératoire. 2. Incision et exposition de la vessie Faire un 1-2 cm (dépend de la taille de l'animal et si le rat ou la souris) l'incision médiane inférieure avec le scalpel à travers la peau. Approfondir l'incision à la partie inférieure de l'incision à travers le muscle grand droit en prenant soin de ne pas blesser l'intestin ou de la vessie sous-jacente. En utilisant une pince à griffes, élever le muscle droit et de disséquer sans la face postérieure du muscle avec des ciseaux de Metzenbaum fines. Incisez le reste du muscle sur la ligne médiane pendant toute la durée de votre incision de la peau. Livrer la vessie à travers la plaie par incision (figure 1). La vessie est généralement l'organe le plus à charge dans le bassin. (Chez le mâle, la prostate est en réalité plus dépendant et est supérieure à lavessie décompressé.) Suture séjour Placez une à travers la paroi postérieure de la vessie, et puis un autre à travers la paroi antérieure de la vessie à l'aide 6-0 suture en polypropylène. Placez sutures supplémentaires latéralement. Ne pas attacher ces sutures. Lorsque les sutures sont tendus, la vessie aura une configuration carrée mesurant environ 1 cm 2 (Figure 2). Soyez prudent de ne pas avoir trop de tension sur ces sutures car ils peuvent facilement être tiré à travers le tissu de la vessie. Incisez la vessie longitudinalement à travers la paroi antérieure de la vessie (à peine inférieure à la coupole de la vessie) sur la ligne médiane d'environ 1 cm (1,5-2 cm de la vessie chez le rat). 3. Anastomose de l'échafaudage L'aide de ciseaux fins, coupez l'échafaud de la soie à la superficie approximative du défaut de la vessie. Utilisation de 7-0 suture polyglactine, commencez dans un coin de l'échafaud et le suturer à la vessie de manière continue, en cours d'exécutionla mode pour créer un joint étanche à l'eau tout autour de l'anomalie (Figure 3). Testez l'intégrité de l'anastomose par remplissage de la vessie avec une solution saline stérile par elle inculquer à travers la paroi de la vessie avec une aiguille hypodermique de calibre 30. Si une fuite est détectée, ce qui peut être fermé avec un supplément de suture interrompue 7-0 polyglactine pour combler l'écart. Réduire le dos de la vessie reconstruite dans l'abdomen. 4. Fermeture incisionnelle Avant la clôture de la paroi abdominale, injecter le muscle droit et le tissu sous-cutané avec bupivacaïne pour l'anesthésie locale (<3 mg / kg de 0,25%). Reapproximate du muscle droit avec un processus continu, en cours d'exécution de suture polyglactine 4-0. Fermer la peau avec un processus continu, en cours d'exécution de suture polyglactine 4-0. Nettoyez et séchez l'incision (figure 4). Transfert de l'animal dans un cadre chaleureux, une cage propre, pour un réveil de l'anesthésie. </ol> Les étapes à suivre pour la pose du cathéter cystostomie pour l'analyse cystomanométrique sont comme suit: 5. Tunneling le cathéter cystostomie Mettre en place le champ opératoire stérile des instruments nécessaires chirurgicaux: cisaille à raser, des pinces à dents, fines pinces atraumatiques, pilote à l'aiguille fine, de la gaze, ciseaux de Metzenbaum, ciseaux ténotomie, petite pince courbe, lame de scalpel, 6-0 polypropylène, 4-0 polyglactine suture, 3-0 suture de soie (suture de soie 4-0 pour les souris), aiguille 18G, 22G aiguille pointe émoussée, l'aiguille 25G, 1 ml seringue remplie une solution saline, 50 tuyaux en polyéthylène (PE-50) coupé pour une durée de ~ 10 cm. Flare la fin de la PE-50 tube en faisant délicatement de l'exposer à une flamme. Veillez à ne pas faire fondre la fin éteint ou obstruer le lumen (ceci peut être vérifié par l'injection de solution saline à travers une aiguille 25G relié à la "non-évasée" fin et assurer un flux). Ce sert d'ancrage pour maintenir le tube intérieur de la vessie (figure 5). <li> Anesthésier l'animal comme ci-dessus à l'étape 1.2. Utilisez des cisailles de rasage pour enlever la fourrure à la fois le dos de l'animal, entre l'omoplate et le bas de l'abdomen sur la partie ventrale. Préparation des zones avec de la Bétadine et l'éthanol à 70%. Placez l'animal couché sur le drap. Faire une incision de 1 cm sur le dos entre les omoplates. En utilisant les ciseaux de Metzenbaum, développer un plan entre la peau et le muscle sous-jacent en plaçant les pointes des ciseaux dans le plan et les répandre pour créer un tunnel autour de l'abdomen ventral. Repositionner le dos des animaux. Faites votre incision abdominale et exposer la vessie comme ci-dessus dans les étapes 2.1-2.4. Réduire la vessie dans l'abdomen. Placez une petite pince dans votre tunnel sous-cutané créé en 5.6 étape à partir de votre incision de la peau dorsale. Avec vos doigts pour protéger le contenu intra-abdominaux, percer à travers la paroi abdominale avec les conseils de la pince dans l'abdomen. Saisissez le sfin de l'Mooth PE-50 tube avec la pince et le tirer en arrière à travers l'incision dorsale. Faire en sorte que l'extrémité bulbe n'est pas tiré delà de la paroi abdominale (figure 6). 6. Placer le tube cystostomie Livrer la vessie à travers l'incision. A partir de ce moment-là, la vessie doit être manipulé avec des pinces fines pour éviter le traumatisme de la vessie qui pourrait causer des dommages ou une inflammation qui peut biaiser les résultats de votre cystométriques ou entraîner une gêne supplémentaire pour l'animal en post-opératoire. Prenez note de l'emplacement proposé pour le tube cystostomie. Il doit être placé au niveau du dôme de la vessie (supérieure au segment augment). Cela permettra d'éviter tortillement ou l'occlusion du tube. En utilisant la suture 6-0 en polypropylène, placez un point pursestring au niveau du dôme de la vessie de la manière suivante: la place du premier lancer à travers la paroi de la vessie longitudinalement, latéralement à l'emplacement proposé pour le tube cystostomie. Laissez une petite pince à l'extrémité lâche de sorte que la suture n'est pas par inadvertance tiré tout au long. Placez le prochain lancer dans une direction transversale, en commençant d'abord entrer dans la paroi de la vessie un peu en dehors de la sortie de votre premier lancer. Ne tirez pas sur le fil de suture tendue. Placez votre parallèle de suture à côté de votre premier (longitudinalement) va dans la vessie juste céphalique sur le site de sortie de votre dernier suture transversale. Le quatrième tir va commencer latéral à la sortie du dernier point et à la fin prochaine de l'entrée pour votre coup toute première fois. Fait correctement, cela forme un carré circonférentielle autour du site proposé cathéter (figure 7). Utilisation d'une aiguille 18G, percer la paroi de la vessie dans le centre de la suture pursestring. Veillez à ne pas percer trop profondément (juste assez pour être intraluminal). Placez le bout de vos pinces fines dans l'ouverture et écartez doucement pour élargir le trou. Insérez l'extrémité bulbe de la sonde dans le défaut de lavessie jusqu'à ce qu'il soit intraluminale. Tirez le fil de suture pursestring serré autour du cathéter et l'attacher vers le bas. Cela devrait cinch la paroi vésicale autour du cathéter le maintenir en place (Figure 8). Prendre une extrémité de la suture et l'enrouler autour du cathéter une fois et lier cette baisse pour sécuriser davantage le cathéter. 7. Test du cathéter et de clôture de l'incision abdominale Avec une aiguille de seringue de 1 mL et 25G, insérer l'aiguille dans le tube et injecter lentement une solution saline pour distendre la vessie. Observer s'il ya des fuites autour du cathéter. Une fois que vous voyez des fuites de l'urètre, aspirer la solution saline pour décompresser de la vessie à nouveau. Fermer l'incision abdominale comme ci-dessus dans les étapes 4.1-4.4. 8. Fermeture de l'incision dorsale et la fixation du cathéter (Pour les rats) Repositionner l'animal couché. Couper le tube de cathéter au niveau de la peau avec des ciseaux. Insérez une 22G contondant til'aiguille dans le tube p. Fermez la peau sur le tube avec polyglactine 4-0 en une façon courante. Laisser le moyeu d'aiguille extrusion de la peau. Placer un bouchon sur la ligne intraveineuse aiguille émoussée. Utilisation de suture en soie 3-0, sécuriser l'extrémité du cathéter à la peau (figure 9). Nettoyez l'incision. Transférer le rat dans une ambiance chaleureuse, cage propre, pour un réveil de l'anesthésie. 8. * Fermeture de la voie dorsale et la fixation du cathéter (Pour les souris ou les rats) * Occlure l'extrémité distale du cathéter en le vrillage ou en utilisant une flamme pour faire fondre l'extrémité. Coil * la fin de la tubulure et le laisser dans la poche sous-cutanée sur le dos de l'animal (ne pas couper les tuyaux pour le raccourcir) (Figure 10). * Fermeture de la peau au-dessus de la tubulure avec polyglactine 4-0 dans une mode en cours d'exécution (Figure 11). * Le jour de la cystomanométrie, préparer l'incision dorsale avec de la Bétadine et l'éthanol à 70%. Ouvrez l'incision dorsale sous anesthésie et enlever le tube enroulé de la poche sous-cutanée. Fermer l'incision. Réveillez l'animal de l'anesthésie et d'effectuer la cystomanométrie quand il est pleinement éveillé. 9. Résultats représentatifs – des méthodes chirurgicales La vessie reconstruite doit être aussi étanche à l'eau que possible pour éviter les complications liées à une fuite urinaire importante (figure 3). Douleur ou malaise se manifeste habituellement comme frissons ou de griffer et à ronger à l'incision abdominale. Ceci peut être géré avec sous-cutanée quotidienne injections d'un non-stéroïdiens anti-inflammatoires tels que le méloxicam (0,5-1,0 mg / kg sous-cutanée). En règle générale, les animaux n'ont besoin que des injections pour les 3 premiers jours post-opératoires. Cela peut être complété par un opioïde, tels que la buprénorphine (0,05-0,1 mg / kg sous-cutanée toutes les quatre heures 8-12) selon les besoins. Les animaux doivent être surveillés 3 fois par jour pendant les 3 premiers jours post-opératoires, TWquotidienne des glaces pour jours post-opératoires 3-5 puis quotidiennement par la suite pour évaluer la douleur, des signes d'infection, cicatrisation adéquate, l'activité, le toilettage, et élasticité de la peau. Les antibiotiques (Baytril, 5mg/kg sous-cutanée toutes les 24 h dans un volume ne dépassant pas 0,1 ml) sont donnés pour les 72 premières heures suivant la chirurgie, à titre prophylactique contre l'infection chirurgicale. Les signes de reprise normale sont déambulation normale et les niveaux d'activité, une alimentation appropriée et potable, absence de douleur ou de détresse (pas de vocalisation) et de la socialisation normale avec compagnons de cage. Un temps de récupération d'au moins 5-7 jours devrait être donnée avant l'analyse cystomanométrique, pour permettre la guérison de la vessie et une diminution de l'inflammation qui pourrait potentiellement affecter les résultats. Analyses cystométriques 10. Réveillez-analyse cystométriques Configuration décrite avec MLT844 ADInstruments avec la capture de données et d'analyse avec LabChart v6 (ADInstruments) et de la perfusion avec une pompe à seringue Harvard 22 (Harvard Apparatus, Holliston, MA), bien que d'autres systèmes comparables sont disponibles (figure 12). Calibrer la fois en volume et la pression sur la base des spécifications du système cystomanométrique utilisé. Placer les animaux dans des cages métaboliques (cages avec un plancher en treillis métallique) qui sont suspendues sur une échelle. L'échelle est reliée à un transducteur. Purger le système de toute bulle d'air et assurer un écoulement continu de la pompe à perfusion. Connectez le système de capture des données à un ordinateur et d'observer pour les tracés de données. Ajuster l'échelle en conséquence. La pression de la vessie et le volume d'urine seront enregistrées en continu. Accéder à des cathéters suspubiennes avec une aiguille 27G connecté par l'intermédiaire d'une tube en T au transducteur de pression et la pompe à perfusion. Commencez la perfusion de sérum physiologique à 12,5 pi / min pour la souris et 100 pi / min pour le rat. Permettre à la configuration de traçage pour stabiliser la miction (élévation de la pression de la vessie, suivie par un vide). Cela prend habituellement approximativementron 10-20 minutes. Enregistrez les cycles de miction pour 45-120 minutes ou au moins des cycles mictionnels 3-4. Observez ensemble de la procédure en temps réel pour dépanner en cas de complications qui mèneront à l'artefact (plicature du cathéter soit, obstruction, etc, voir ci-dessous la discussion). Arrêter la perfusion, débrancher le cathéter du système, et de retourner à l'animal de sa cage. 11. Inconscient Analyse cystométriques (n ° cathéter sus-pubien) Anesthésier l'animal avec de l'uréthane (1-2 g / kg) par injection intrapéritonéale (IP). Exposer la vessie comme ci-dessus dans les étapes 1.3-2.4. Étalonner le système que dans l'étape 9.2. Préparer le système que dans l'étape 9.4 à 9.5. Insérer une aiguille 27G connecté par l'intermédiaire d'une tube en T au transducteur de pression et de la pompe de perfusion dans la face latérale de la vessie. Enregistrez les cycles de miction pour 45-90 minutes. Arrêter la perfusion, retirer l'aiguille de la vessie et euthanasier l'animal. </ Li> 12. Résultats représentatifs – Analyses cystométriques Tracés urodynamiques peuvent ensuite être analysées afin de déterminer les paramètres tels que les volumes annulés, la conformité, de pointe, l'intervalle de pressions mictionnels contraction entre, le temps de cycle mictionnel et les volumes vides résiduels post-. Cystométrogramme peut être divisé en un remplissage et une phase de la miction. Un phase de remplissage normal est la portion du cycle miction de la vessie dans lequel remplit avec peu de changement dans la pression intra. Une phase de miction normale du tracé se compose d'une augmentation régulière de la pression intravésicale correspondant à la contraction du détrusor. La pression la plus élevée atteinte pendant la phase annulation du tracé que l'on appelle la pression mictionnelle de pointe. Un pic de pression haute miction pourrait suggérer un modèle miction obstructive, une vessie hypercontractile ou un coude dans le cathéter SP. La conformité peut être calculée en faisant l'acquisition du ratio du volume instillé During la phase de remplissage et la variation de pression (conformité = AV / AP). Une vessie hypocompliant est celui qui est incapable de répondre adéquates volumes urinaires basses pressions. L'intervalle intercontraction peut être calculée en analysant le temps entre deux contractions comme on le voit sur la cystométrogramme. Un intervalle de intercontraction courte est suggestive d'une vessie irritable. Le temps de cycle mictionnel se réfère au temps qu'il faut pour un remplissage complet et d'annuler la phase de compléter et peut être facilement constatée par l'analyse de la traçabilité. À la fin de la cystomanométrie, résidu post-mictionnel (PVR) peuvent être obtenus. Cela se fait par l'aspiration du cathéter sus-pubien à l'issue d'une contraction du détrusor. Ces paramètres permettent l'enquêteur objectivement étudier la dynamique de la vessie que la vessie se remplit et se vide. Figure 1. Photographie de l'incision abdominaleet l'extrusion de la vessie. Figure 2. Incision vessie à l'exposition de la lumière de la vessie. Figure 3. Intégration de l'implant sur ​​la paroi de la vessie. Figure 4. Photographie de l'incision fermée. Figure 5. Extrémité évasée du tube PE-50. Figure 6. PE-50 tube (cathéter) à travers l'incision dorsale. Figure 7.Suture Pursestring. Figure 8. Sécurisation du cathéter dans la vessie. Figure 9. Cathéter sécurisé. Figure 10. Tube spiralé dans la poche sous-cutanée. Figure 11. Dorsale de fermeture d'incision. Figure 12. Exemple cystomanométrique set-up. Figure 13. Cystométrie Représentant de traçage.